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（提示 關于酶量的問題。通常的內切酶效價在10U/μL左右，3μL內切酶相當于30U，足夠切10μL的質粒。因為通常小提質粒的濃度在200－600ng /μL，一般濃度達不到1μg/μL。根據1U酶切1μg質粒的原則，這一酶量是足夠的。）1%瓊脂糖回收膠回收（碎膠、酚氯仿抽提法）1. 酶切產物加入10％量的上樣Buffer，混勻。使用1%的瓊脂糖回收膠，電泳回收酶切產物。2. 用手術刀切下所需要的大片斷（載體）和小片斷（插入片斷），收入一個1.5mL離心管中。（提示: 切膠前，需用分別含酒精、NaOH和雙蒸水的紙巾擦拭凝膠接觸的臺面，以防污染。 手術刀要火焰消毒，而后切膠回收。）3. 12000rpm 1分鐘，將凝膠甩到管底。 -20℃ 冰凍20分鐘。4. 取200μL Tip 頭兩只，在酒精燈上稍烤化Tip頭尖端，兩Tip頭尖相對來回相接觸，在Tip頭頂部制成直徑3mm左右的平頭，準備用于碎膠。5. 從-20℃取出凍結的凝膠，......閱讀全文
（提示 關于酶量的問題。通常的內切酶效價在10U/μL左右，3μL內切酶相當于30U，足夠切10μL的質粒。因為通常小提質粒的濃度在200－600ng /μL，一般濃度達不到1μg/μL。根據1U酶切1μg質粒的原則，這一酶量是足夠的。）1%瓊脂糖回收膠回收（碎膠、酚氯仿抽提法）1. 酶切產物加入1
本方法的核心部分是醫科院基礎所的生化脂蛋白組的吳剛老師所創，我在其基礎上進行了一些改動，主要是DNA回收上采取了更簡單的方法。（本方法最適用于雙酶切制作片斷并進行克隆 的情況。對于分步酶切制作片斷，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片斷平移的克隆 （也適用于多片斷連接）簡介：將用
酶切直接在回收PCR產物的試管中配置酶切體系：PCR產物酶切－制作插入片斷公用Buffer 6μL酶 I 3μL酶 II 3μLPCR產物 ——雙蒸水 48μL合計 60μL要將PCR產物接入的質粒載體A，取A質粒3μL進行酶切。A質粒酶切－制作載體片斷公用Buffer 3μL酶 I 1μL酶 II
9. 在一新1.5mL 離心管中加入 900μL 預冷 無水乙醇、20μL 3M的醋酸鈉。將步驟8的上清小心加入本步驟離心管中。顛倒數次混勻。12000rpm 4℃ 離心15分鐘。（提示 吸取步驟8中的上清時，千萬不要將有機相吸入，寧可放棄一些上清，否則影響后面的連接反應。 另外，本方法
1. 連接產物10μL、5×KCM溶液10μL、雙蒸水30μL，（共50μL）混勻，置冰上。2. 從-70℃冰箱中取 1支感受態細胞，置冰上。融化后立即取50μL，加入步驟1中的混合液中，輕輕吹打數次混勻（不可用力過大，不可渦旋）， 立即置冰上。3. 冰上放置20 分鐘。4. 室溫放置10分鐘。5.
酶切直接在回收PCR產物的試管中配置酶切體系：PCR產物酶切－制作插入片斷公用Buffer 6μl酶 I 3μl酶 II 3μlPCR產物 ——雙蒸水 48μl合計 60μl要將PCR產物接入的質粒載體A，取A質粒3μl進行酶切。A質粒酶切－制作載體片斷公用Buffer 3μl酶 I 1μl酶 II
本方法的核心部分是醫科院基礎所的生化脂蛋白組的吳剛老師所創，我在其基礎上進行了一些改動，主要是DNA回收上采取了更簡單的方法。（本方法最適用于雙酶切制作片斷并進行克隆的情況。對于分步酶切制作片斷，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片斷平移的克隆（也適用于多片斷連接）簡介：將用作載
精密恒溫水槽是一款集加熱、制冷于一體的高精度恒溫裝置。由舜瑪儀器獨立研發生產的精密恒溫水槽依據溫度范圍劃分為兩類，一類是：高精度低溫恒溫槽（-80~100℃），另一類是高精度超級恒溫水油槽（室溫~300℃）。 一、精密恒溫水槽的特點： 1.控溫系統采用PID控溫技術，精度可達0.01
恒溫原油離心機利用水與原油密度比重的不同，在高速運轉的離心場中把原油和水分離出來，以達到測量原油中的水含量。為了讓新手快速掌握其使用方法，下面我們來說說其使用方法及注意事項。 恒溫原油離心機的使用方法： 先將本機所配離心管加入需分離的物質，分
快速TA克隆的突破T載體是TA克隆載體的簡稱，就是利用載體的T末端和PCR產物的A末段連接而將目的基因克隆到載體中的方法。目前市場上常見的T載體，根據連接方法可以分成兩種：方法1、以T4連接酶進行連接的方法，這種方法的載體有promega、takara；可以說這兩家公司將這兩種方法發揮到了很高的水平