通過記錄RNA聚合酶觀察早期RNA轉錄動力學
科學家們通過記錄RNA聚合酶在何時何地通過與DNA序列結合啟動轉錄，觀察了早期RNA轉錄動力學。 生命的活動是通過蛋白質的制造而發生的，蛋白質賦予我們的細胞結構和功能。細胞蛋白質從DNA編碼的基因指令中獲得行進順序，他們的序列首先被復制并在一個叫做轉錄的多步驟過程中被制造成RNA。 科羅拉多州立大學的一個研究合作項目專門研究高分辨率熒光顯微鏡和計算模型，以實時、精細地可視化和描述這類生命過程，在單基因水平上。現在，由博士后研究員Linda Forero-Quintero領導的科學家們首次通過記錄RNA聚合酶在何處、何時以及如何通過與DNA序列結合啟動轉錄來觀察早期RNA轉錄動力學。 這項突破性技術，詳見《Nature Communications》雜志，有無數可能的拓展：包括加深對基本生物學過程的理解，揭示某些疾病的遺傳基礎。 “這是第一次有人研究單拷貝基因中的RNA聚合酶磷酸化動力學，”Forero說，他是蒙福特生......閱讀全文
RNA 反轉錄
?實驗材料 poly(A)+RNA反轉錄酶鼠源反轉酶 或禽源反轉錄酶試劑、試劑盒 oligo(dT)12-18 lmol LTris-Cl 1mol LTris-Cl lmol LKC1 25 mmol LMgCl2 dNTP 混合物 0.lmol LDTT RNasin實驗步驟 一材料與設備1)p
RNA 反轉錄
? ? ? ? ? ? 實驗材料 poly(A)+RNA 反轉錄酶 鼠源反轉酶 ?或禽源反轉錄酶 試劑、試劑盒 oligo
RNA的轉錄和逆轉錄
轉錄是以DNA為模板合成RNA的過程，經過轉錄DNA分子中的貯存信息傳遞到RNA分子中，再由mRNA做為模板合成蛋白質分子。逆轉錄也是從RNA的一個特定位置開始的，以RNA分子中的一條鏈為模板，在逆轉錄酶的作用下，以四種脫氧核苷酸為原料，合成方向仍是5'→3'，完成cDNA的合成。大
RNA復制、轉錄與逆轉錄
轉錄是以DNA為模板合成RNA的過程，經過轉錄DNA分子中的貯存信息傳遞到RNA分子中，再由mRNA做為模板合成蛋白質分子。逆轉錄也是從RNA的一個特定位置開始的，以RNA分子中的一條鏈為模板，在逆轉錄酶的作用下，以四種脫氧核苷酸為原料，合成方向仍是5'→3'，完成cDNA的合成。大
RNA 大量轉錄合成
? ? ? ? ? ? 實驗材料 模板 DNA 或質粒 試劑、試劑盒 TE ? TE 飽和酚 ? 氯仿
RNA 大量轉錄合成
實驗材料 模板 DNA 或質粒試劑、試劑盒 TE TE 飽和酚 氯仿異內醇 3mol LNaAc 無水乙醇 5X 轉錄緩沖液 lOOmmoL LDTT RNasin rATPrGTPrUTPrCTP SF6T3 或 T7RNA 聚合酶 異戊醇 DNase 7.5mol L 乙酸銨 無水乙醇 乙醇實驗
RNA 標準轉錄反應
實驗材料 模板 DNA 或質粒試劑、試劑盒 TE 異丙醇 3mol LNaAc 無水乙醇 5×轉錄緩沖液 l00 mmol L DTT RNasin rATPrGTPrUTP 各 2.5 mmol L [α42P] rCTP SPGT3 或 T7RNA 聚合酶 TE-飽和的酚氯仿異戊醇 DN
RNA 標準轉錄反應
? ? ? ? ? ? 實驗材料 模板 DNA 或質粒 試劑、試劑盒 TE 異丙醇 3mol LNaAc
3.5 RNA 反轉錄
利用 RNA 模板通過反轉錄獲得 DNA,進而復制和感染細胞實驗材料poly(A)+RNA反轉錄酶鼠源反轉酶 或禽源反轉錄酶試劑、試劑盒oligo(dT)12-18lmol LTris-Cl1mol LTris-Cllmol LKC125 mmol LMgCl2dNTP 混合物0.lmol LDTT
3.1.2 RNA 大量轉錄合成
RNA 標準轉錄體系的一般回收率為 lugRNA/ug 質粒 DNA, 使用下面的方法，可以提高回收率至 5?l0ug RNA/ug 質粒 DNA。大量制備 RNA 可以用于體外翻譯。實驗材料模板 DNA 或質粒試劑、試劑盒TETE 飽和酚氯仿異內醇3mol LNaAc無水乙醇5X 轉錄緩沖液lOO