口蹄疫分子生物學診斷技術
近年來，由于分子生物學技術的迅速發展及其在FMD診斷中的應用，建立了各種FMD的分子生物學診斷技術，主要包括以下幾種方法，核酸雜交、等電點聚焦電泳、寡核苷酸指紋圖譜分析、聚丙烯酰胺凝膠電泳、聚合酶鏈式反應、單克隆抗體技術等。（1）核酸探針 核酸探針即應用FMD的cDNA克隆片段，用32P或生物素等標記后制備探針，根據標記片段的不同，可以檢測各群（群特異性探針）或某一型（型特異性探針）FMDV的RNA，如McFarlance等的報道。應用A12亞型的全基因組cDNA以及O1型、C1型和Asial型的VPl基因片段制備核酸探針，前者可以檢出O型、A型、C型和Asial型FMDV，而后者則可分別檢出各自相對型的FMDV。國內學者吳時友、楊永欽等報道應用cDNA探針成功檢出FMDV，隨著PCR技術的建立極大地方便了核酸探針的制備和應用。只要正確選用恰當的核酸片段，完夠制備群特異、型特異的核酸探針檢測FMDV的RNA。1998年Rossi......閱讀全文
分子生物學實驗小技術（二）
1 、 各供應商送貨時往往會提供冰袋，在室溫下將化凍的大冰袋平整的一面整齊地插入1.5ml 或0.5ml 、0.2ml 的廢棄離心管；或將幾個化凍后的小冰袋填料塞入一個小泡沫盒中壓實，再插入各種大小的試管，放在-20 攝氏度下凍24小時后取出，拔出插入的廢管（可加點熱水以助拔管）即可做成一個
分子生物學常用實驗技術（十五）
第十章測序技術 在分子生物學研究中，DNA 的序列分析是進一步研究和改造目的基因的基礎。目前用于測序的技術主要有Sanger 等（1977）發明的雙脫氧鏈末端終止法和Maxam 和Gilbert（1977）發明的化學降解法。這二種方法在原理上差異很大，但都是根據核苷酸在某一固定的點開始，隨
分子生物學常用實驗技術（十六）
（三）電泳：1、預電泳（1）當凝膠聚合完全后，撥出鯊魚齒梳，將該梳子反過來，把有齒的一頭插入凝膠中，形成加樣孔。（2）立即將膠板固定在測序凝膠槽中，一般測序凝膠槽的上下槽是分開的，因而只有在固定好凝膠板后，方能加入TBE 緩沖液。（3）稀釋10×TBE 緩沖液至1×TBE，將該緩沖液加入上下二個電泳
分子生物學常用實驗技術（六）
一、材料 提純TMV 病毒液（10mg/ml）。二、設備 冷凍臺式離心機，低溫真空干燥儀，電泳儀，電泳槽。三、試劑 TE-飽和酚:氯仿（1:1），氯仿，3M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE 緩沖液，無RNA 酶的雙菌水。四、操作步驟1、取一eppendorf 管加入提純
分子生物學課程教學講義（一）
第一講 序論 二、現代分子生物學中的主要里程碑 分子生物學是研究核酸、蛋白質等所有生物大分子的形態、結構特征及其重要性、規律性和相互關系的科學，是人類從分子水平上真正揭開生物世界的奧秘，由被動地適應自然界轉向主動地改造和重組自然界的基礎學科。當人們意識到同一生物不同世代之間的連續性是由生物體自身所
分子生物學常用實驗技術（一）
第一章質粒DNA 的分離、純化和鑒定第二章DNA 酶切及凝膠電泳第三章大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化第四章RNA 的提取和cDNA 合成第五章重組質粒的連接、轉化及篩選第六章基因組DNA 的提取第七章RFLP 和RAPD 技術第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆第九章分子雜交技術第十章測
分子生物學常用實驗技術（十四）
三、菌落原位雜交 對分散在若干個瓊脂平板上的少數菌落（100-200）進行克隆篩選時，可采用本方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張硝酸纖維素濾膜上。經培養一段時間后，對菌落進行原位裂解。主平板應貯存于4℃直至得到篩選結果。1、材料：待檢測的細菌平皿，已標記好的探針
土壤的分子生物學特性介紹
在我們的實驗室里，zui難搞的樣品類型之一就是土壤。在開發提取土壤中微生物DNA、RNA的試劑盒和構思提取方法的過程中，我們需要收集記錄大量各種類型土壤的有機物含量、質地、pH以及采集地。這些因素與土壤微生物含量息息相關，同樣地也影響著提取DNA、RNA的得率。下文，我將介紹一些影響土壤DNA、RN
分子生物學課程教學講義（五）
1. DNA復制的起始 大腸桿菌中的復制起始位點是Ori C，全長245Bp，該序列在所有細菌復制起始位點中都是保守的。DNA復制起始中的主要步驟a. 大約20個左右的DnaA蛋白首先與OriC中的4個9堿基重復區相結合；b. 識別并使3個13堿基串聯重復區DNA形成開環結構；c. DnaB蛋白在
分子生物學實驗診斷技術（一）
一、核酸雜交技術????? ? 檢驗方法建立的基本要素是特異性和靈敏度，在復雜的物體中，使無法感覺的特定物質進入人類的觀察范圍。核酸雜交檢測技術就是利用核酸堿基嚴格配對的特異性，核酸標記物的靈敏度而建立的檢測核酸結構與功能的方法。該法建立以來已有二十年，目前研究實驗室用得多，臨床實驗室用得較少，除成
分子生物學常用實驗技術（十一）
第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆第一節概述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA 或RNA 的方法.它包括三個基本步驟: (1) 變性(Denature):目的雙鏈DNA 片段在94℃下解鏈; (2) 退火
常用的分子生物學基本技術
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
分子生物學實驗常用試劑配置
常用貯液與溶液1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。10mol/L乙酸胺（ammonium ac
分子生物學課程教學講義（二）
第二講 染色體與DNA一、 DNA的組成與結構 Avery在1944年的研究報告中寫道："當溶液中酒精的體積達到9/10時，有纖維狀物質析出。如稍加攪拌，它就會象棉線在線軸上一樣繞在硬棒上，溶液中的其它成份則呈顆粒狀沉淀。溶解纖維狀物質并重復數次，可提高其純度。這一物質具有很強的生物學活性，初步實驗
分子生物學常用實驗技術（九）
第三節從動物組織提取基因組DNA一、材料 哺乳動物新鮮組織。二、設備 移液管、高速冷凍離心機、臺式離心機、水浴鍋。三、試劑1、分離緩沖液：10mmol/L Tris?Cl pH7.4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA。2、其它試劑：10% SDS，蛋白酶K (20mg/
分子生物學的應用意義
實踐應用意義在應用方面，生物膜能量轉換原理的闡明，將有助于解決全球性的能源問題。了解酶的催化原理就能更有針對性地進行酶的人工模擬，設計出化學工業上廣泛使用的新催化劑，從而給化學工業帶來一場革命。分子生物學在生物工程技術中也起了巨大的作用，1973年重組DNA技術的成功，為基因工程的發展鋪平了道路。8
分子生物學常用試劑的配制
1．LB(Luria-Bertani)培養液、平板的配制配制每升LB培養液，應在950ml去離子水中加入：細菌培養用酵母提取物（bacto-yeastextract）5g細菌培養用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10gNaCl10g搖動容器直至溶質完全溶解，用5mol/LNaOH(約0.2
分子生物學常用實驗技術（十三）
2. 從RNA 合成單鏈cDNA 探針cDNA 單鏈探針主要用來分離cDNA 文庫中相應的基因。用RNA為模板合成cDNA 探針所用的引物有兩種: (1)用寡聚dT 為引物合成cDNA 探針。本方法只能用于帶Poly(A)的mRNA,并且產生的探針極大多數偏向于mRNA 3'末端序列
分子生物學常用實驗技術（十二）
第九章分子雜交技術 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總D
走下神壇的分子生物學研究
研究分子生物學（包括相關）固然好，但是……總有太多的但是 過去很長一段時間里，分子生物學研究在我心目中是神圣的，是“高端、大氣、上檔次”的。 尤其是“人類基因組計劃”開展和公布結果那幾年，基因序列和表達的研究真是神奇無比，后面又興起了RNA系列的研究，還有組學以及生物信息學的研究更是精妙絕倫
分子生物學課程教學講義（四）
第四講 DNA、RNA和蛋白質代謝 DNA是貯藏遺傳信息的最重要的生物大分子。DNA分子中的核苷酸排列順序不但決定了胞內所有RNA及蛋白質的基本結構，還通過蛋白質（酶）的功能間接控制了細胞內全部有效成份的生產、運轉和功能發揮。貯藏在任何基因中的生物信息都必須首先被轉錄生成RNA，才能夠得到表達。D
最前沿的分子生物學技術
自然科學的發展從20世紀以來有過兩次重大變革,第一次是在物理學領域,它不僅全面推動了自然科學的發展,所引起的技術革命也已經給人類生活帶來了巨大影響。第二次變革發生在生物學領域,是由于物理學和化學廣泛而又深刻地滲入生物學的結果。這次變革以50年代中脫氧核糖核酸(DNA)雙螺旋結構的確定和蛋白質晶體結構
原創]分子生物學軟件集總結
1. DNASIS 2.5?DNASIS for Windows 2.5版是日立軟件公司（Hitachi Sofeware Engineering Co.,Ltd.）97年推出的一個功能強大的序列分析軟件。包含有大部分分子生物學軟件的常用功能，可進行DNA，RNA，蛋白質序列的編輯和分析，甚至還能進
豬丹毒分子生物學診斷技術
? 常規細菌培養檢測豬丹毒至少要3天，鑒定血清型大約要lo天，而這種PCR法可在5h內完成。它使用兩步擴增法，先用高度特異性引物組M0101-M0102進行初步擴增之后，再添加4種特異性寡核苷酸引物組對4種不同血清型豬丹毒的16SrRNA序列進行擴增。???? rRNA基因簇包括16SrRNA、23
分子生物學常用實驗技術（十七）
第二節T7 DN A 聚合酶測序技術一、概述 T7 DNA 聚合酶最初具有5'→3'聚合酶活性以及單鏈和雙鏈3'→5'外切酶活性。當T7 DNA 聚合酶用適當方法處理后，可使3'→5'外切酶活力明顯下降。改造后的T7 DNA 聚合酶又稱T7
分子生物學常用實驗技術（二）
第三節操作步驟 一、細菌的培養和收集 將含有質粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24 小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12 小時至對數生長后期。 二、質粒D
分子生物學實驗常用試劑配置
一. 常用貯液與溶液 1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammo
分子生物學課程教學講義（三）
第三講 蛋白質合成一.基因與基因表達的一般概念基因作為唯一能夠自主復制、永久存在的單位，其生理學功能以蛋白質形式得到表達。DNA序列是遺傳信息的貯存者，它通過自主復制得到永存，并通過轉錄生成mRNA，翻譯生成蛋白質的過程控制所有生命現象。編碼鏈（coding strand）又稱sense stran
分子生物學實驗診斷技術（二）
（三）Northern blot用于RNA分析，電泳條件與轉膜方法與Southern blot不同外，RNA不必變性與中和，電泳時加電醛防止RNA發夾結構形成。其它步驟相同。為了防止RNase水解需分析的mRNA，盡可能將器皿在160-180℃干熱滅菌8小時以上，也可加0.1％焦碳酸二乙酯（DEPC
分子生物學實驗基礎知識
分子生物學是在生物化學基礎上發展起來的，以研究核酸和蛋白質結構、功能等生命本質的學科，在核酸、蛋白質分子水平研究發病、診斷、治療和預后的機制。其中基因工程（基因技術，基因重組）是目前分子生物學研究熱點，這些技術可以改造或擴增基因和基因產物，使微量的研究對象達到分析水平，是研究基因調控和表達的方法，也