應該是基因 的表達,包括轉錄和翻譯兩個過程。沒有蛋白質表達這種說法......閱讀全文
實驗方法原理 分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。 實驗材料 草地夜蛾(Sf9)細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液 試劑、試劑盒 PBS1×SDS樣品緩沖液 儀器、耗材 含 10% 胎牛血清(FBS)的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 載體 試劑、試劑盒
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 載體
實驗材料 載體 試劑、試劑盒 牛血清DMEM葡聚糖PBSDMSOEDTA 儀器、耗材 培養皿培養箱相差顯微鏡離心機 實驗步驟 1. ?將目的基因亞克隆至合適的載體中得到所需的重組DNA,用小量法(5 ml 培養物)或用CsCl/溴化乙錠離心法純化重組D
實驗材料?載體 試劑、試劑盒?牛血清DMEM葡聚糖PBSDMSOEDTA 儀器、耗材?培養皿培養箱相差顯微鏡離心機 實驗步驟 1.? 將目的基因亞克隆至合適的載體中得到所需的重組DNA,用小量法(5 ml 培養物)或用CsCl/溴化乙錠離心法純化重組DNA。 2.? 將在DMEM-10
一般直接用SDS凝膠加樣緩沖液裂解,具體方法如下:[試劑與設備](1)表達待檢測蛋白質的細菌。(2)50mmoL/LTris-HCl(pH7.4)。(3)2xSDS凝膠加樣緩沖液:100mmol/L Tris—HCl(pH6.8)200mmol/L 二硫蘇糖醇(DTT)4% SDS(電泳級)0.2%
基因重組—層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中,在 37℃,IPTG誘導下,超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉
實驗步驟一、設計具有標簽的蛋白質時需要考慮的因素親和力和可溶性的選擇在大腸埃布氏菌中生產外源蛋白時面臨兩個挑戰: 一? 是所用蛋白質表達系統的表達水平很低; 二是所表達的蛋白質被錯誤折疊進不溶性的聚集體—包涵體中。弱啟動子、低轉錄起始或稀有密碼子的存在引起的表達問題都可以通過在裝配過表達質粒時將矯正
目的要求(1)了解克隆基因表達的方法和意義。(2)了解重組蛋白親和層析分離純化的方法。實驗原理克隆基因在細胞中表達對理論研究和實驗應用都具有重要的意義。通過表達能探索和研究基因的功能以及基因表達調控的機理,同時克隆基因表達出所編碼的蛋白質可供作結構與功能的研究。大腸桿菌是目前應用最廣泛的蛋白質表達系
實驗步驟 一、設計具有標簽的蛋白質時需要考慮的因素 親和力和可溶性的選擇 在大腸埃布氏菌中生產外源蛋白時面臨兩個挑戰: 一? 是所用蛋白質表達系統的表達水平很低; 二是所表達的蛋白質被錯誤折疊進不溶性的聚集體—包涵體中。弱啟