假陽性是指出現的 PCR 擴增條帶與目的靶序列條帶一致,有時其條帶更整齊,亮度更高。產生的原因有:①引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行 PCR 擴增時,擴增出的 PCR 產物為非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或擴增產物的交叉污染。解決方法有:操作輕柔,防止靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外造成污染;除酶及不能耐高溫的物質外,所有試劑或器材高壓消毒;離心管及加樣槍頭等一次性使用。必要時,可在加標本前,將反應管和試劑用紫外光照射,以破壞存在的核酸。......閱讀全文
假陽性是指出現的 PCR 擴增條帶與目的靶序列條帶一致,有時其條帶更整齊,亮度更高。產生的原因有:①引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行 PCR 擴增時,擴增出的 PCR 產物為非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或擴增產物的交叉污染。解決方法有:操作輕柔,防止
利用菌落作為模板進行PCR擴增,驗證該菌落里是否帶有目標片段。但是由于PCR是一個級聯放大的過程,所以即使菌落中不含有目標片段,而是菌落表面沾有一部分之前連接,轉化中用的目標DNA,也會導致PCR獲得擴增條帶,從而誤認為這個菌落已經帶有了目標片段,稱之為假陽性。可以通過提質粒酶切,或者測序驗證,排除
假陰性是指不出現特異擴增帶。可能原因:引物設計不合理,酶失活或酶量不足,模板量太少,退火溫度不合適,循環次數過少,產物未及時電泳檢測等。解決方法有:重新設計引物,增加酶量或調換酶,增加模板量,調整退火溫度,增加循環次數,及時檢測擴增產物,一般在 48h 以內進行。
假陽性假陽性是指出現的 PCR 擴增條帶與目的靶序列條帶一致,有時其條帶更整齊,亮度更高。產生的原因有:①引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行 PCR 擴增時,擴增出的 PCR 產物為非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或擴增產物的交叉污染。解決方法有:操作輕柔
假陽性是指出現的 PCR 擴增條帶與目的靶序列條帶一致,有時其條帶更整齊,亮度更高。產生的原因有:①引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行 PCR 擴增時,擴增出的 PCR 產物為非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或擴增產物的交叉污染。解決方法有:操作輕柔,防止
假陽性假陽性是指出現的 PCR 擴增條帶與目的靶序列條帶一致,有時其條帶更整齊,亮度更高。產生的原因有:①引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行 PCR 擴增時,擴增出的 PCR 產物為非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或擴增產物的交叉污染。解決方法有:操作輕柔
@云醫小哥,給個解釋,了解了丙肝后,丙肝抗體又是什么球?丙肝抗體:這是由于人體免疫細胞對丙肝病毒感染所做出的反應而產生的。丙肝抗體檢驗就是通過檢驗丙肝抗體的存在,來確定之前病毒的存在,而不是檢驗病毒本身。那么丙肝抗體陽性是什么意思?丙肝抗體指的是丙肝表面抗體,它不是一種保護性的抗體,當輸入了外來的含
PCR反應的特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性,但令人頭痛的問題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽性的產生。一、標本交叉污染源:收集標本的容器:標本放置時,由于密封不嚴溢于容器外,或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;吸樣槍:標本核酸模板在提取過程中,由于污染導致標本間污染;氣溶膠:
最近做酶切連接轉化,最后做鑒定時,以菌落為模板進行PCR時可以見到有目的條帶;當把菌落接種到LB液擴菌后,以菌液為模板進行PCR時卻什么東東都沒有?請問會是什么原因啊?多多指教啊!建議重新以菌落為模板進行PCR檢測,再重新以菌液為模板進行PCR檢測,因為菌落或者菌液PCR假陽性的幾率還是比較高的。但
一、概念理解。當你真的沒有的時候,別人卻說你有——假陽性(false positive)當你真的有的時候,別人卻說你沒有——假陰性(false negative)下面表格列出了四種情況,另外兩張判斷正確的情況分別是:你真的有,別人也說你有——真陽性(true positive)你真的沒有,別人也說你