基因轉移技術是一種將外源基因以在體(in vivo)或離體(in vitro)的方式導入到靶細胞核內的技術, 屬于基因工程技術(亦稱重組DNA 技術)的一個重要組成部分。基因工程技術以分子生物學等學科發展為基礎, 使人類擁有了構造生物遺傳物質新組合的能力。對在體方式而言, 基因轉移技術需要跨越細胞外和細胞內雙層障礙。細胞外的轉移過程中遇到的障礙有:DNA 在血漿中的降解、網狀內皮組織對于DNA的吸收、難以將DNA 定位到特定的器官、轉染為黏液所阻止等;細胞內的障礙包括:溶酶體對DNA 的降解作用、DNA胞漿的穩定性以及DNA向質粒的移位等。基因槍技術等直接轉移方法是人們以物理方法來將基因轉移的方法......閱讀全文
基因轉移技術是一種將外源基因以在體(in vivo)或離體(in vitro)的方式導入到靶細胞核內的技術, 屬于基因工程技術(亦稱重組DNA 技術)的一個重要組成部分。基因工程技術以分子生物學等學科發展為基礎, 使人類擁有了構造生物遺傳物質新組合的能力。對在體方式而言, 基因轉移技術需要
最常用的將克隆重組的DNA片段導入哺乳動物細胞的方法是用磷酸鈣介導的轉染。轉染的DNA可能是通過吞飲作用進入細胞質,然后進入細胞核。
基因轉移技術分為兩類:第一類是將目的基因轉導入體外培養的細胞或導入從體內取出的細胞,觀察目的基因在細胞中的表達,這項技術稱基因轉染(gene transfection)技術。通常情況下,該技術轉入的目的基因不與細胞染色體發生整合,而是在細胞質呈現暫時性表達,隨時間推移而逐漸減弱或消失。第二類是將
動物實驗和實驗動物都要求達到實驗室操作規范(good laboratory practice, GLP)和標準操作程序(standard operating procedure, SOP)這些規范和操作對實驗動物和實驗室條件,工作人員素質,技術水平和操作方法都要求標準化。所有藥物的安全評價試
基因敲除是一種遺傳工程技術,是指通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。基因敲除針對某個序列已知但功能未知的序列,改變生物的遺傳基因,令特定的基因功能喪失作用,從而使部分功能被屏蔽,并可進一步對生物體造成影響,進而推測出該基因的生物學功能。基因敲除技術克服了隨機整合的盲目性和偶然性,是一種理
基因轉移是用物理的、化學的或生物學的方法將目的基因導入受體細胞并使之表達的一種技術。 物理方法 包括顯微鏡注射法、電脈沖介導法。顯微注射法是應用特別的玻璃顯微注射器在顯微鏡下把重組DNA導入靶細胞;電脈沖介導法又稱電穿孔法,是指在高壓電脈沖的作用下,使細胞膜上出現瞬間微小的孔洞,從而介導不同
(1)配制下列溶液 ①2×HEPES-緩沖鹽溶液(HBS) ②2mol/L CaCl2 ③0.1×TE(pH8.0)用0.22μm濾器過濾除菌,分裝貯存于4℃。 ④DNA:將DNA(約20μg/106細胞)溶于0.1×TE(pH8.0),使用濃度為40μg/ml。為使轉化效率達到最高,質
實驗材料 幼年家豬性別任意病毒或非病毒的包含編碼重組基因的載體試劑、試劑盒 阿斯匹林Telazol甲苯噻嗪異氟烷無菌的磷酸鹽緩沖溶液儀器、耗材 導管(適合豬用的)和器械標準的手術器械Balfour牽引器絲帶兩個氣囊導管壓力牽引器血液動力監護儀可吸收的縫線皮膚鎖環實驗步驟 1.在手術前 2 天,給幼年
儀器、耗材3. 5mm的硝酸纖維素材料的帶有支架的可促使血管球的導管實驗步驟1.和基本方案 1 的第 1~6 步一樣將豬的血管分開。2.通過支架插入一個 3.5 mm 的硝酸纖維素材料的帶有支架的可促使血管球的導管,漸漸地后退以促使它接近大腿骨的的動脈(圖 13.1.2)。然后用 8 個大氣壓的壓力
二、轉導 以噬菌體為媒介,把供細菌的基因轉移到受體菌內,導致后者基因改變的過程稱為轉導。 當噬菌體在細菌中增殖并裂解細菌時,某些DNA噬菌體(稱為普遍性轉導噬菌體)可在罕見的情況下(約105~107次包裝中發生一次),將細菌的DNA誤作為噬菌體本身的DNA包入頭部蛋白衣殼內。當裂解