雙向凝膠電泳 雙向凝膠電泳的原理是第一向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上分開。由于雙向電泳技術在蛋白質組與醫學研究中所處的重要位置,它可用于蛋白質轉錄及轉錄后修飾研究,蛋白質組的比較和蛋白質間的相互作用,細胞分化凋亡研究,致病機制及耐藥機制的研究,療效監測,新藥開發,癌癥研究,蛋白純度檢查,小量蛋白純化,新替代疫苗的研制等許多方面。近年來經過多方面改進已成為研究蛋白質組的最有使用價值的核心方法。 等電聚焦 等電聚焦(isoelectric focusing,IEF)是60年代中期問世的一種利用有pH梯度的介質分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。等電聚焦凝膠電泳依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離,等電聚焦中,蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸,在電場中形成正極......閱讀全文
一、蛋白質組概念:一個細胞、一個組織或一個機體全部基因所表達的全部蛋白質。 二、蛋白質組學研究范疇 1.蛋白質和蛋白質間 2.蛋白質和核酸之間 3.蛋白質及其組成質點的分離、分析、鑒定 4.蛋白質結構分析 5.生理、病理或不同發育狀態下蛋白質組表
3 甲基化干擾實驗 用來檢測蛋白質的結合位點。甲基化修飾的DNA探針可以干擾蛋白質的結合。結合位點上未被修飾的DNA片段才能與蛋白結合,然后將DNA從被修飾的堿基處切割,電泳分離,結合蛋白的DNA在結合位點上不能被修飾,不能切斷,可確定結合位點的位置。 4 Dnase I 足紋分析
基因組(genome)包含的遺傳信息經轉錄產生mRNA,一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類的mRNA稱為轉錄子組(transcriptome)。很顯然,不同細胞在不同生理或病理狀態下轉錄子組包含的mRNA的種類不盡相同。mRNA經翻譯產生蛋白質,一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類
基因組(genome)包含的遺傳信息經轉錄產生mRNA,一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類的mRNA稱為轉錄子組(transcriptome)。很顯然,不同細胞在不同生理或病理狀態下轉錄子組包含的mRNA的種類不盡相同。mRNA經翻譯產生蛋白質,一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類
人們在吞咽的時候,頸部有個器官會隨著吞咽動作上下活動,它就是甲狀腺。西湖歐米有望實現臨床轉化的第一個項目,就是基于蛋白質標志物的甲狀腺結節的良惡性診斷。 甲狀腺很小,但它影響到五臟六腑。數據顯示,每5個成年人中就可能有1人患有甲狀腺結節。其中,約60%的甲狀腺結節都是良性的。但有10
(Marc Wilkins(1994)) A study of proteome using the technologies of large-scale protein separation, identification and quantitation. The study o
常見問題———? HPLC 篇? 1 . HPLC 靈敏度不夠的主要原因及解決辦法? 樣品量不足:解決辦法為增加樣品量? 樣品未從柱子中流出:可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子? 樣品與檢測器不匹配:根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器? 檢測器衰減太多:調整衰減即可。? 檢測器時間常數太大:
1 背景和意義從生命活動的直接執行者——蛋白質的角度研究生命現象和規律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學的主要手段。而這些研究往往離不開對細胞、組織或器官中含有蛋白質種類和表達量的研究。對處不同時期、不同條件下蛋白質表達水平變化的研究,識別功能模塊和路徑,監控疾病的生物標志物,這些研究都
Proteomics Primer1. Proteomics2. 2-D PAGE3. Immobilised pH gradients (IPGs)4. Mass spectrometry5. Principles of mass spectrometry6. Matrix assisted la
1 . HPLC 靈敏度不夠的主要原因及解決辦法 樣品量不足:解決辦法為增加樣品量 樣品未從柱子中流出:可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子 樣品與檢測器不匹配:根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器 檢測器衰減太多:調整衰減即可。 檢測器時間常數太大:解決