蛋白質免疫印跡組織蛋白提取簡介
1）所需器材：制冰機、標記筆、兩套1.5ml EP管（最好高溫高壓處理）、一個大冰盒、一個1.5ml EP管盒、手套、眼科剪（最好高溫高壓處理）、新鮮組織或保存于-80℃冰箱組織、保存于4℃冰箱的PBS（最好高溫高壓處理）、移液槍、吸頭（最好高溫高壓處理）、兩套研磨棒（最好高溫高壓處理）、掌上離心機、濾紙、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟（PMSF，一種蛋白酶抑制劑，劇毒）、離心機、燒杯、2×SDS凝膠上樣緩沖液、二硫蘇糖醇（DTT）、震蕩器、泡沫板。 2）操作步驟： a.制冰機制冰； b.標記筆將兩套EP管做好標記； c.將大冰盒、EP管盒裝上冰，一套標記筆做好標記的EP管放置于大冰盒中，另一套標記筆做好標記的EP管放置于EP管盒中，戴好手套，帶上EP管盒、眼科剪剪取黃豆大小（約100mg）新鮮組織或保存于-80℃冰箱組織； d.取出保存于4℃冰箱的PBS，往EP管中滴加1ml PBS，眼科剪剪碎組織（動作快），掌上離......閱讀全文
SD大鼠神經視網膜組織總蛋白質提取
實驗概要本實驗提取SD大鼠神經視網膜組織總蛋白質，用Bradford法測樣品蛋白濃度，并用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳進行鑒定。實驗材料經過分離和鑒定的SD大鼠神經視網膜組織實驗步驟1. 神經視網膜組織總蛋白質提取標本稱重，置于研磨器中，液氮內研磨，按1:5( W/V)比例加入裂解緩沖液，
免疫印跡與免疫檢測實驗——轉移槽轉印蛋白質
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒轉移緩沖液儀器、耗材搖床海綿纖維素膜尼龍膜電轉儀實驗步驟1. ?制備抗原樣品，并用小型或標準尺寸的單向或雙向凝膠分離蛋白，在一個或多個泳道中分離預染色或生物素酰化的蛋白質分子量標準。2. ?電泳完成后，拆卸凝膠夾層，去除積層膠。以適量的轉移緩沖液室溫平衡凝膠30 min。3
頑拗性植物組織的蛋白質組學研究（苯酚法提取蛋白質...
頑拗性植物組織的蛋白質組學研究（苯酚法提取蛋白質）實驗實驗材料?植物組織試劑、試劑盒?苯酚提取緩沖液沉淀液等電聚焦緩沖液儀器、耗材?低溫粉碎機實驗步驟 3.1 蛋白質提取( 1 ) 新鮮植物組織在液氮中冷凍，然后在自動低溫粉碎機中預先冷卻的鋼杯中將材料研磨成細碎的粉末（見注釋 4) 。( 2 ) 在
頑拗性植物組織的蛋白質組學研究（苯酚法提取蛋白質）
1. 前言提取蛋白質是蛋白質組學研究的第一步。植物組織的蛋白質含量較低，并且存在多種非蛋白質成分，如細胞壁及貯藏多糖、脂質和酚類化合物，使蛋白質的提取難度增大 。植物蛋白質的可溶性與它們的細胞內定位關系密切，傳統的蛋白質提取方法是用水合緩沖液、去垢劑或直接沉淀法 [1] 。除了普遍使用的 TCA
頑拗性植物組織的蛋白質組學研究（苯酚法提取蛋白質）
實驗材料植物組織試劑、試劑盒苯酚提取緩沖液沉淀液等電聚焦緩沖液儀器、耗材低溫粉碎機實驗步驟3.1 蛋白質提取( 1 ) 新鮮植物組織在液氮中冷凍，然后在自動低溫粉碎機中預先冷卻的鋼杯中將材料研磨成細碎的粉末（見注釋 4) 。( 2 ) 在一個 15 ml 的離心管（falcon? tube) 中加入
蛋白質印跡法分類
Western Blot顯色的方法主要有以下幾種：i. 放射自顯影ii. 底物化學發光ECLiii. 底物熒光ECFiv. 底物DAB呈色現常用的有底物化學發光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實驗條件的是用第一種方法，發表文章通常是用底物化學發光ECL。只要買現成的試劑盒就行，操作也比較簡單，原理
蛋白質印跡實驗——檢測
試劑、試劑盒甘氨酸TrisSDS甲醇實驗步驟電泳轉移后，小心地從固定化材料上剝離凝膠。如果有小塊凝膠留在膜上，用雙蒸水洗，然后用濕的軟棉花擦去凝膠，殘留在膜上的凝膠會導致染色后在膜上出現 “白點”。膜可以貯存，也可以立即染色或用其他方式檢測。大部分用于電泳的染色方法都可用于膜。主要的限制是背景染色。
如何閱讀蛋白質印跡
Western印跡是臨床醫生可能會使用或要求的一種診斷技術。Western印跡通過分離樣品（通常是血液樣品）中的所有不同蛋白質來發揮作用。一旦分離了這些蛋白質，就可以使用稱為抗體的物質來檢測特定的蛋白質。這些特定蛋白質的存在與否，或檢測到的蛋白質的水平，將導致診斷。如果使用診斷性蛋白質印跡，則臨床醫
蛋白質印跡法原理
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附
蛋白質印跡（Western－blotting）
印跡法（blotting）是指將樣品轉移到固相載體上，而后利用相應的探測反應來檢測樣品的一種方法。1975年，Southern建立了將 DNA轉移到硝酸纖維素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA雜交檢測特定的DNA片段的方法，稱為Southern印跡法。而后人們用類似的方法，對 RNA和蛋白
全自動蛋白質免疫印跡系統技術指標
全自動蛋白質免疫印跡系統是一種用于化學、生物學、臨床醫學、軍事醫學與特種醫學領域的分析儀器，于2013年4月21日啟用。 技術指標 1、無需繁瑣、混亂的制膠、跑膠過程，減少操作程序，避免污染 2、無需轉膜，減少實驗步驟，避免樣品損失，提高結果的準確率和重復率 3、系統自動加樣 4、根據
蛋白質免疫印跡實驗制備分離膠、積層膠
制備分離膠、積層膠 1）所需器材：制冰機、制膠槽、Teflon梳子、小燒杯、手套、大冰盒、去離子水、30%聚BXXA溶液、1.5mol/L的Tris-cl（PH值8.8）、1.0mol/L的Tris-cl（PH值6.8）、10%SDS（十二烷基磺酸鈉）、10%AP（過硫酸銨）、TEMED（四甲
蛋白質印跡法的測定蛋白質含量
1、制作標準曲線（1 ）從－20℃取出1mg/ml?BSA，室溫融化后，備用。（2） 取18個1.5ml離心管，3個一組，分別標記為0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。（3 ）按下表在各管中加入各種試劑。0μg2.5μg5.0μg10.0μg20.0μg40.0
組織總蛋白提取原理
關鍵詞：腦組織?目的：熟練進行腦組織蛋白質的提取 背景知識：無 原理：無 具體內容： 腦組織總蛋白質提取方法 1．將低溫保存的樣本稱重。 2．加入裂解液。樣本與組織比例=1：3~3.5 w/v，一般為150~170mg：500μl。加入50×Cocktail蛋白酶抑制劑。可利用振蕩器、加樣器，將組織
組織總蛋白提取原理
關鍵詞：腦組織 目的：熟練進行腦組織蛋白質的提取 背景知識：無 原理：無 具體內容： 腦組織總蛋白質提取方法 1．將低溫保存的樣本稱重。 2．加入裂解液。樣本與組織比例=1：3~3.5 w/v，一般為150~170mg：500μl。加入50×Cocktail蛋白酶抑制劑。可利用振蕩器、加樣器，將組織
組織總蛋白提取原理
關鍵詞：腦組織 目的：熟練進行腦組織蛋白質的提取 背景知識：無 原理：無 具體內容： 腦組織總蛋白質提取方法 1．將低溫保存的樣本稱重。 2．加入裂解液。樣本與組織比例=1：3~3.5 w/v，一般為150~170mg：500μl。加入50×Cocktail蛋白酶抑制劑。可利用振蕩器、加樣器，將組織
蛋白質印跡免疫分析（Western－Blot－Anglysis）原理和操作步驟
【基本原理】 蛋白質印跡免疫分析的過程包括蛋白質經凝膠電泳分離后，在電場作用下將凝膠上的蛋白質條帶轉移到硝酸纖維素膜上，經封閉后再用抗待檢蛋白質的抗體作為探針與之結合，經洗滌后，再將濾膜與二級試劑—放射性標記的或辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶偶聯抗免疫球蛋白抗體結合，進一步洗滌后，通過放射自顯影或原
如何提取蛋白質？
對于每個大腸桿菌表達的目的蛋白，確定其產生、定位及估計培養基或細胞中的產量都相當重要。為了簡化確定工作，通常對總細胞蛋白及培養液、周質、可溶胞質和不溶胞質部分進行小規模分析。分析的結果有利于誘導條件優化或確定大規模誘導條件，以及采用合適的蛋白抽提方法用來純化目的蛋白。下面簡單的介紹總細胞蛋白的提
蛋白質如何提取
大部分蛋白質都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液,少數與脂類結合的蛋白質則溶于乙醇、丙酮、丁醇等有機溶劑中,因些,可采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質及酶.（一）水溶液提取法稀鹽和緩沖系統的水溶液對蛋白質穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質最常用的溶劑,通常用量是原材料體積的1-5倍,提取時需要均勻的攪拌,以利
蛋白質如何提取
大部分蛋白質都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液,少數與脂類結合的蛋白質則溶于乙醇、丙酮、丁醇等有機溶劑中,因些,可采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質及酶.（一）水溶液提取法稀鹽和緩沖系統的水溶液對蛋白質穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質最常用的溶劑,通常用量是原材料體積的1-5倍,提取時需要均勻的攪拌,以利
蛋白質印跡法的原理
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附
蛋白質印跡法的分類
顯色的方法主要有以下幾種：i. 放射自顯影ii.?底物化學發光ECLiii. 底物熒光ECFiv. 底物DAB呈色現常用的有底物化學發光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實驗條件的是用第一種方法，發表文章通常是用底物化學發光ECL。只要買現成的試劑盒就行，操作也比較簡單，原理如下（二抗用HRP標記）
快速蛋白質斑點印跡試驗
試劑、試劑盒Tris緩沖鹽溶液(TBS)TBS+1%牛血清白蛋白TBS+0.1%Tween-20(TBST)5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸 氮藍四唑(BCIP NBT)顯色試劑鼠抗σ32單克隆抗體3RH2(MAb 3RH2)兔抗鼠免疫球蛋白G(IgG)~堿性磷酸酶綴合物儀器、耗材硝酸纖維素膜實驗步驟
快速蛋白質斑點印跡試驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 Tris緩沖鹽溶液(TBS) TBS+1%牛血清白蛋白 TBS+0.1%Tween-20(TBST) 5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸 氮藍四唑(BCIP NBT)顯
蛋白質印跡法的原理
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似,但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗。經過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附
量蛋白質斑點印跡實驗
蛋白質印跡法，它是用免疫學方法來測量某一蛋白質的量。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南，作者：朱厚礎。試劑、試劑盒鼠抗-σ32 單克隆抗體辣根過氧化酶共價標記的羊抗鼠免疫球蛋白 GECLTM#1 和#2 試劑十二烷基肌氨酸鈉Tris-緩沖鹽溶液儀器、耗材硝酸纖維素膜斑點印跡裝置ECLTMHYPER
蛋白質印跡的操作步驟
(1)蛋白質樣品的制備 :有兩種方法(直接加樣緩沖液來裂解細胞,制備細胞蛋白質提取液)。(2)十二烷基酸鈉-聚丙烯電泳(SDS-PAGE分離原理:根據蛋白質的分子差異)電泳:在直流電場作用下,帶電的粒子向著與自身電荷相反的方向移動的現象。電泳遷移率與分子量的對數呈線性關系。(3)蛋白質的電轉移 采用
定量蛋白質斑點印跡實驗
試劑、試劑盒 鼠抗-σ32 單克隆抗體辣根過氧化酶共價標記的羊抗鼠免疫球蛋白 GECLTM#1 和#2 試劑十二烷基肌氨酸鈉Tris-緩沖鹽溶液儀器、耗材 硝酸纖維素膜斑點印跡裝置ECLTMHYPERFILM或柯達 X 光底片緩沖液 A實驗步驟 材料與設備樣品，由各步純化操作所得硝酸纖維素膜 (0.
什么是蛋白質印跡法？
蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。
什么是蛋白質印跡測試？
Western blot測試,也稱為免疫印跡,是對蛋白質混合物中特定蛋白質的測試。蛋白質印跡試驗是在凝膠電泳或酶聯免疫吸附測定(ELISA)試驗后進行的,它使用抗體來鑒定特定的蛋白質。SDS頁面十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是用于分離蛋白質以進行蛋白質印跡的常用測試。當蛋白質通