WIKI資訊
1. 加入12 μl的TSR于離心管中，劇烈振蕩，讓其充分溶解DNA沉淀，稍離心。 2. 將溶液轉移至蓋體分離的0.2 ml PCR管中，稍離心。 3. 在PCR儀上進行熱變性(95℃ 2 min)，冰中驟冷，待上機。......閱讀全文
1. 加入12 μl的TSR于離心管中，劇烈振蕩，讓其充分溶解DNA沉淀，稍離心。 2. 將溶液轉移至蓋體分離的0.2 ml PCR管中，稍離心。 3. 在PCR儀上進行熱變性(95℃ 2 min)，冰中驟冷，待上機。
1. 取0.2 ml的PCR管，用記號筆編號，將管插在顆粒冰中，按下表加試劑： 所加試劑 測定模板管 標準對照管 BigDye Mix 1 μl 1 μl 待測的質粒DNA 1 μl － pGEM-3Zf (+) 雙鏈DNA － 1 μl 待測DNA的正向引物 1 μl － M13(
PCR技術代替了為測序而反復進行的分子克隆和模板制備步驟。PCR技術與自動測 序技術相結合后，它將成為一種最快、最有效的測定核苷權序列的方法。本章主要綜 述各種測模板的制備以及如何完成PCR產物的直接測序。與傳統的將PCR片段克隆入質 粒或病毒基因組相比，直接序列分析有兩個主要的優點:1)由于它是一
pcr測序反應 (1) 取0.2ml的pcr管，用記號筆編號，將管插在顆粒冰中，按下表加試劑： 所加試劑 測定模板管 標準對照管 bigdye mix 1μl 1μl 待測的質粒dna 1μl － pgem-3zf (+) 雙鏈dna － 1μl 待測dna的正向引物 1μl －
pcr產物測序的最大風險是有在凝膠上看起來的一個條帶，實際上有多個分子。也就是說長度相似的分子有可能在電泳的時候只有一條帶。如果只是進行pcr產物回收，沒有進行凝膠分離的過程的話，東西可能更多了。問題就在于，如果出現雙峰或者多峰，這個樣品就白送了，什么也結果也沒有。特別你現在用的還是簡并引物，本身目
1. 將混合物離心，將擴增產物轉移到1.5 ml EP管中。 2. 加入25 μl醋酸鈉/乙醇混合液，充分振蕩，置冰上10 min以沉淀DNA。12 000 r/min于4℃離心30 min，小心棄上清。 3. 加70%(V/V)的乙醇50 μl洗滌沉淀2次。12 000 r/min于4℃離
當在預電泳時，即可進行樣品的制備，將反應完畢的樣品在沸水浴中加熱1～3分鐘，立即置于冰上即可。如果樣品長時間不用，則應重新處理。可使用4～6%聚丙烯酰胺凝膠，膠厚0.4 mm。厚度小于0.4 mm的膠可能導致信號太弱。加樣時不必吸去上層覆蓋的礦物油，但要小心地吸取礦物油下的藍色樣品。
1. DNA 直接測序：指直接分析不經分離的PCR 擴增產物，如果各個位點上堿基序列都是一致的，則所得信號是確定的，否則，在那些有相異堿基的位點出現模糊信號， 如果模板在多數情況下被正確擴增，則少數的突變將被掩蓋，這是結果顯示的是模板的序列.但是，當擴增的前幾輪即出現錯誤擴增并被后續的循環積累，這時
（1）當凝膠聚合完全后，撥出鯊魚齒梳，將該梳子反過來，把有齒的一頭插入凝膠中，形成加樣孔。 （2）立即將膠板固定在測序凝膠槽中，一般測序凝膠槽的上下槽是分開的，因而只有在固定好凝膠板后，方能加入TBE緩沖液。 （3）稀釋10×TBE緩沖液至1×TBE，將該緩沖液加入上下二個電泳槽中，去除產生
關閉電泳儀，用移液槍吸緩沖液清洗樣品孔，去除在預電泳時擴散出來的尿素，然后立即用毛細管進樣器吸取樣品，加入樣品孔中。上樣順序一般為G、A、T、C。加樣完畢后，立即電泳。開始可用30 V/cm進行電泳，5分鐘后可提高至40～60 V/cm，并保持恒壓狀態。一般來說，一個55 cm長，0.2 mm厚