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既然反義RNA在原核生物中對基因表達起著重要的調控作用，那么人工設計在天然狀態下不存在的反義RNA來調節靶基因的表達，想必也是可能的。這已在不少實驗中得到證實。1.由于對靶mRNA的SD序列的上游區的結構了解甚少，因此，在要設計Ⅱ類反義RNA用于和靶mRNASD序列上游區結合，以期達到調節該mRNA翻譯的目的是比較困難的。2.Ⅲ類反義RNA是和mRNA的起始處結合而形成類似ρ-不依賴性的轉錄終止子而使轉錄水平上抑制靶基因的表達。因此，要設法在靶mRNA上找到一段連續的U序列，就可以設計出反義RNA，與該U序列上游的mRNA鏈互補，以形成ρ-不依賴性終止子。理想的作用位點是在靶mRNA的5'端上游的非編碼區，以免受核糖體的影響。3.只要靶基因的核苷酸順序已經知道，就可以人工設計出Ⅰ類反義RNA。有時還可設計同時具有Ⅰ類和Ⅲ類反義RNA功能的反義RNA。我們還可以設計出天然存在的反義RNA的反義RNA來。這樣就可以拮抗原始反......閱讀全文
既然反義RNA在原核生物中對基因表達起著重要的調控作用，那么人工設計在天然狀態下不存在的反義RNA來調節靶基因的表達，想必也是可能的。這已在不少實驗中得到證實。1.由于對靶mRNA的SD序列的上游區的結構了解甚少，因此，在要設計Ⅱ類反義RNA用于和靶mRNASD序列上游區結合，以期達到調節該mRNA
在原核生物中反義RNA具有多種功能，例如調控質粒的復制及其接合轉移，抑制某些轉位因子的轉位，對某些噬菌體溶菌-溶源狀態的控制等。下文僅舉數例。調控細菌基因的表達反義RNA對編碼CAP的基因的調控作用已如前述。這里再介紹一下micF RNA對ompF基因的表達的調控。ompF蛋白質是大腸桿菌的外膜蛋白
隨著分子生物學和遺傳工程的發展，基因治療應運而生，反義技術是其中一種，它的基礎是根據核酸雜交原理設計針對特定靶序列的反義核酸，從而抑制特定基因的表達，包括反義RNA、反義DNA及核酶（Ribozyme），它們通過人工合成和生物合成獲得。反義DNA是指一段能與特定的DNA或RNA以堿基互補配對的方式結
反義RNA是指與mRNA互補的RNA分子，也包括與其它RNA互補的RNA分子。由于核糖體不能翻譯雙鏈的RNA，所以反義RNA與mRNA特異性的互補結合, 即抑制了該mRNA的翻譯。通過反義RNA控制mRNA的翻譯是原核生物基因表達調控的一種方式，最早是在E.coli 的產腸桿菌素的Col E1質粒中
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實驗材料 限制性內切核酸酶酶水解模板 DNA大腸桿菌 DNA 多聚酶胰 DNaseⅠ試劑、試劑盒 氯仿苯酚乙醇DTTrNTP溶液轉錄緩沖液Tris-Cl鹽酸亞精胺NaCl胎盤RNase抑制物牛血清白蛋白RNA聚合酶DEPC儀器、耗材 DNA合成儀瓊脂糖凝膠電泳微量離心管實驗步驟 一、化學合成的 RN
RNA 也可以由線狀 DNA 為模板，通過 RNA 聚合酶（如T3、T7 或 SP6 ) 在體外合成。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗材料限制性內切核酸酶酶水解模板 DNA大腸桿菌 DNA 多聚酶胰 DNaseⅠ試劑、試劑盒氯仿苯酚乙醇DTTrNTP溶液轉錄緩沖液Tris-Cl鹽
細胞中反義RNA的來源有兩種途徑：第一是反向轉錄的產物，在多數情況下, 反義RNA是特定靶基因互補鏈反向轉錄產物, 即產生mRNA和反義RNA的DNA是同一區段的互補鏈。第二種來源是不同基因產物，如OMPF基因是大腸桿菌的膜蛋白基因，與透性有關，其反義基因MICFZE則為另一基因。
反義RNA的分類和作用機制：下表總結了原核細胞內天然存在的11種反義RNA。這些反義RNA按其作用機制可經分為三大類。調節水平 反義RNA 靶RNA 分類 功能 來源轉錄后水平?micF RNA ompF mRNA 1A OmpF合成 染色體oop RNA cⅡmRNA 1B 溶菌-溶源?噬菌體sa
用反義RNA分子來調節基因表達時，經常會遇到的困難是反應模板的穩定性差。因此，人們正在探索如何改進反義基因的新方法，目前主要有：（1）優化反義RNA的結合。反義RNA鏈的長度對抑制基因的效果是重要的。雙螺旋形成過程中將釋放能量，RNA鏈越長，釋放的自由能越多。從這一意義來講，可以說長RNA作為反義R