所用引物的核苷酸序列是隨機的,其擴增的 DNA 區域事先未知。隨機引物PCR擴增的 DNA 區段產生多態性的分子基礎是模板 DNA 擴增區段上引物結合位點的堿基序列的突變,不同來源的基因組在該區段上表現為擴增產物有無差異或擴增片段大小的差異。隨機引物PCR標記表現為顯性或共顯性。 ①隨機擴增多態性DNA (Random Amplified Polymorphism DNA,RAPD) RAPD技術是1990年由Wiliam和Welsh等人利用PCR技術發展的檢測DNA多態性的方法。基本原理:它是利用隨機引物(一般為8—10bp)通過PCR反應非定點擴增DNA片段,然后用凝膠電泳分析擴增產物DNA片段的多態性。擴增片段多態性便反映了基因組相應區域的DNA多態性。RAPD所使用的引物各不相同,但對任一特定引物,它在基因組DNA序列上有其特定的結合位點,一旦基因組在這些區域發生DNA片段插人、缺失或堿基突變,就可能導致這些特......閱讀全文
所用引物的核苷酸序列是隨機的,其擴增的 DNA 區域事先未知。隨機引物PCR擴增的 DNA 區段產生多態性的分子基礎是模板 DNA 擴增區段上引物結合位點的堿基序列的突變,不同來源的基因組在該區段上表現為擴增產物有無差異或擴增片段大小的差異。隨機引物PCR標記表現為顯性或共顯性。 ①隨機擴增多
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 利用寡核苷酸作引物,DNA 聚合酶可沿單鏈模板起始 DNA 的合成(Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一,它們就可在模板的多位點上與模板雜交。因此模板上每一核苷酸(5' 端的核苷酸除外)的互補物將以同樣
利用寡核苷酸作引物,DNA 聚合酶可沿單鏈模板起始 DNA 的合成(Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一,它們就可在模板的多位點上與模板雜交。因此模板上每一核苷酸(5' 端的核苷酸除外)的互補物將以同樣的頻率摻入產物。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法
實驗概要本實驗探針標記采用TAKARA公司的隨機引物標記試劑盒Ver.2。實驗步驟1.于1.5ml離心管中加入5μl H2O,2μl引物(N6),5μl DNA(0.1μg-1μg)。2.充分混勻,98°C 3分鐘。3.離心1秒鐘,將離心管蓋上的汽化水甩下。4.加入2.5μl dNTPs(各2.5m
實驗方法原理 利用寡核苷酸作引物,DNA 聚合酶可沿單鏈模板起始 DNA 的合成(Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一,它們就可在模板的多位點上與模板雜交。因此模板上每一核苷酸(5' 端的核苷酸除外)的互補物將以同樣的頻率摻入產物。實驗材料 大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ Kl
隨機引物標記(random primer labeling)是利用單鏈 DNA 與六核苷酸(hexamer)退火結合,以六核苷酸為引物,加入4種 dNTP,其中1種標有同位素或生物素,用 Klenow 片段催化合成帶有標記的互補 DNA 鏈,標記率高而且不受瓊脂糖影響。該法不適于標記 RNA。Fei
特異引物的PCR標記所用引物是針對已知序列的 DNA 區段而設計的,具有特定核苷酸序列(通常為 18—24 bp),可在常規PCR復性溫度下進行擴增,對基因組 DNA 的特定區域進行多態性分析。 ①序列標志位點 (Sequence Tagged Sites,STS) STS是對以特定對引物
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 此法系可用于從低熔點瓊脂糖凝膠中回收 DNA 的放射性標記 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983,1984)。 實驗材料
此法系可用于從低熔點瓊脂糖凝膠中回收 DNA 的放射性標記 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983,1984)。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理此法系可用于從低熔點瓊脂糖凝膠中回收 DNA 的放射性標記 ( Feinberg 和 Vogelstein 1
一般來講,在做反轉錄時選用引物Oligo dt與選用隨機引物Random 9mers是有差別的:1、Random 9mers : 適用于具有HAIRPIN構造的所有RNA(rRNA、mRNA及tRNA)的反轉錄反應。并且合成的cDNA,任何特異型Primer Pair都可以用于PCR反應。2、Oli