蛋白質首先在薄條凝膠中通過等電聚焦分離。然后將凝膠水平放置在第二個平板狀凝膠上,通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質。水平分離反映了pI的差異;垂直分離反映了分子量的差異。因此,原始的蛋白質組成在兩個維度上擴散。使用雙向電泳技術可以分解數千種細胞蛋白質。可以從凝膠中切取出單個蛋白質點,并通過質譜進行鑒定。......閱讀全文
蛋白質首先在薄條凝膠中通過等電聚焦分離。然后將凝膠水平放置在第二個平板狀凝膠上,通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質。水平分離反映了pI的差異;垂直分離反映了分子量的差異。因此,原始的蛋白質組成在兩個維度上擴散。使用雙向電泳技術可以分解數千種細胞蛋白質。可以從凝膠中切取出單個蛋白質點,并通過質譜
實驗概要本文介紹了雙向電泳原理及操作步驟(第一向等電聚焦和第二向SDS-PAGE電泳)。實驗原理二維聚丙烯酰胺凝膠電泳技術結合了等電聚焦技術(根據蛋白質等電點進行分離)以及SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(根據蛋白質的大小進行分離)。這兩項技術結合形成的二維電泳是分離分析蛋白質最有效的一種電泳手段。通
雙向電泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)是等電聚焦電泳和SDS-PAGE的組合,即先進行等電聚焦電泳(按照pH分離),然后再進行SDS-PAGE(按照分子大小),經染色得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質圖。蛋白質組研究的發展以雙向電泳技術作為核心。雙向電泳由
蛋白質組研究的發展以雙向電泳技術作為核心. 雙向電泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分離約1 000個E.coli蛋白,并表明蛋白質譜不是穩定的,而是隨環境而變化. 雙向電泳原理簡明,第一向進行等電聚焦,蛋白質沿pH梯度分離,至各自的等電點;隨后,再沿垂直的方向進行分子量
實驗概要本實驗介紹了雙向電泳技術,先進行等電聚焦電泳(按照pI分離),然后再進行SDS-PAGE(按照分子大小),經染色得到二維分布的蛋白質圖。實驗原理雙向凝膠電泳的原理是第一向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上
實驗方法原理雙向電泳(two-dimensional electrophoresis)是等電聚焦電泳和SDS-PAGE的組合,即先進行等電聚焦電泳(按照pI分離),然后再進行SDS-PAGE(按照分子大小),經染色得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質圖。實驗材料細胞樣品試劑、試劑盒ddH2O溴酚藍指示劑
實驗原理2-DE的第一向電泳等電聚焦是基于等電點不同而將蛋白粗步分離,第二向SDS-PAGE是基于蛋白質分子量不同,而將一向分離后的蛋白進一步分離。這樣就可以得到蛋白質等電點和分子量的信息。主要試劑1. BSA2. Bradford液3. DTT?4. 0.05% 的溴酚蘭?5. IPG buffe
一、? ? ? ? 實驗原理:2-DE的第一向電泳等電聚焦是基于等電點不同而將蛋白粗步分離,第二向SDS-PAGE是基于蛋白質分子量不同,而將一向分離后的蛋白進一步分離。這樣就可以得到蛋白質等電點和分子量的信息。 二、? ? ? ? 實驗步驟: 1. 樣品的溶解 取純化后的晶體蛋白3.0mg,加入
實驗概要本實驗介紹了雙向電泳的詳細實驗過程。實驗原理2-DE的第一向電泳等電聚焦是基于等電點不同而將蛋白粗步分離,第二向SDS-PAGE是基于蛋白質分子量不同,而將一向分離后的蛋白進一步分離。這樣就可以得到蛋白質等電點和分子量的信息。主要試劑1. BSA2. Bradford液3. DTT4. 0.
第一向等電聚焦⒈ 從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液(I)(不含DTT,不含IPG buffer)一小管(1ml/管),置室溫溶解。⒉ 在小管中加入0.01g DTT, 0.5% 對應膠條pH范圍的IPG buffer,充分混勻。⒊ 從小管中取出400微升水化上樣緩沖液,加入100微升樣品(