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1，調整有機相比例，看看變化趨勢，如果能調開，用這個方法簡單變梯度，這個最好是有經驗的實驗員調整調的好的話，峰型會變得很好。調整水相pH值，這個吧，如果你分不開的色譜峰是有酸堿性的官能團會比較好。不過pH值一變，所有色譜峰的保留時間都可能變色譜柱，你看看峰型，有沒有拖尾。如果有的話換一根好點兒的柱子可能就分開了。如果峰型還好就不用折騰了。另外實在分不開，可以考慮換柱子填料。比如C18，可以換C8或者苯基柱。2，最好是有經驗的實驗員調整調的好的話，峰型會變得很好。調整水相pH值，這個吧，如果你分不開的色譜峰是有酸堿性的官能團會比較好。不過pH值一變，所有色譜峰的保留時間都可能變色譜柱，柱效不好有可能柱子污染了，從譜圖上看，每個峰型 都不是左右對稱。出峰太快，洗脫力太強。減少有機相比例可提高分離度（從你譜上看，這點對你可能不起作用）流動相PH選擇不當，應根據物質結構，選擇適合的緩沖鹽及PH值。調整有機相比例，看看變化趨勢，如果能調開......閱讀全文
如果用紫外檢測器，負峰表明出峰的地方吸收值低于流動相，所以考慮兩個方面：一是流動相吸收值大，很可能被污染了，二是質量不好的溶劑，尤其是甲醇，產生這種問題。如果做正相，要充分考慮流動相溶劑的截止波長。
可以看看色譜儀的基線是不是正常的形狀，泵壓是否正常，看看有沒有漏液，流路有沒有從洗脫切換到正常進樣的流路。再有就是將正常出峰的色譜儀上的色譜柱換上試試。如果流動相，流速等參數相同，延遲出峰就要考慮流路和色譜柱是否有問題了，如果完全不出峰的話，就要再考慮檢測器的問題。
若干的可能性，逐個排除：如果是保留時間越來越短，可能是色譜柱不耐低pH，固定相有水解，應更換色譜柱，如：Agilent StableBond等；如果是保留時間越來越長，可能是系統未平衡——先用純乙腈沖柱，再用流動相充分平衡；如果是保留時間不穩定，且使用的LC是低壓多元泵，可能是比例閥閉鎖不全，導致其
若干的可能性，逐個排除：如果是保留時間越來越短，可能是色譜柱不耐低pH，固定相有水解，應更換色譜柱，如：Agilent StableBond等；如果是保留時間越來越長，可能是系統未平衡——先用純乙腈沖柱，再用流動相充分平衡；如果是保留時間不穩定，且使用的LC是低壓多元泵，可能是比例閥閉鎖不全，導致其
??? 異常的色譜峰指的是色譜圖中的無峰或出現負峰、寬峰、雙峰、肩峰、峰形不對稱等情況。一般來說，異常峰是實驗工作中較為棘手的問題。異常峰的出現會影響色譜分析的結果。通常情況下，峰型問題是由分離系統所決定的。在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型，對于各種各樣的異常峰，要區別對待，
前沿峰（peak fronting）可能由多種情況引起。一、樣品過載當進樣量超過柱子的容量，樣品峰會呈現前伸或拖尾，解決方案就是減少進樣量。圖1顯示了進樣體積從1μl到10μl峰型的變化。這種問題一般在使用小體積色譜柱時表現更為明顯，所以色譜柱方法從常規250mm或150mm長色譜柱轉化到體積較小的
若干的可能性，逐個排除：如果是保留時間越來越短，可能是色譜柱不耐低pH，固定相有水解，應更換色譜柱，如：Agilent StableBond等；如果是保留時間越來越長，可能是系統未平衡——先用純乙腈沖柱，再用流動相充分平衡；如果是保留時間不穩定，且使用的LC是低壓多元泵，可能是比例閥閉鎖不全，導致其
水峰&倒峰?? ? 在液相色譜中，水出峰通常是作為溶劑出峰，因此在出峰的時間上通常都是位于溶劑峰的位置（0~5min之間）。峰形上，相比于其他有機溶劑的溶劑峰，水峰多表現為明顯的基線波動，甚至為倒峰。?? ? 而色譜分析中的倒峰則不僅僅局限于水溶劑峰，因此倒峰可能在色譜分析的任何位置出峰。這種情況下
溶劑峰&空白峰?? ? 溶劑峰，顧名思義就是溶解樣品溶劑出的峰。如樣品用甲醇溶解，單獨進甲醇溶劑的峰即是溶劑峰。?? ? 空白峰和溶劑峰這兩個概念經常被分析工作者混淆，但嚴格來說，空白峰指的是樣品基質本底的出峰情況（即空白基質樣品），并不僅僅指溶劑峰。若是簡單的小分子極性化合物，溶劑峰和空白峰在譜圖
1,檢查液路是否正常,保證流量,密封性都對的2,不接柱子進純品看看檢測器有沒有響應,如果沒有就是檢測器出問題了3,檢查你的樣品是不是正常的