外切核酸酶的種類
為限制性核酸內切酶（restrictionendonuclease，簡稱限制酶）。當外源DNA侵入細菌后，限制性內切酶可將其水解切成片段，從而限制了外源DNA在細菌細胞內的表達，而細菌本身的DNA由于在該特異核苷酸順序處被甲基化酶修飾，不被水解，從而得到保護。 限制性核酸內切酶的研究和應用發展很快，目前已提純的限制性核酸內切酶有100多種，許多已成為基因工程研究中必不可少的工具酶。 限制性核酸內切酶可被分成三種類型。Ⅰ型和Ⅲ型限制酶水解DNA需要消耗ATP，全酶中的部分亞基有通過在特殊堿基上補加甲基基團對DNA進行化學修飾的活性。 Ⅰ型和Ⅲ型酶具有限制和修飾兩種作用，而特異性弱，切割位點的序列不固定，不已知，不宜用于基因克隆中。 Ⅱ型限制酶水解DNA不需要ATP也不以甲基化或其它方式修飾DNA，能在所識別的特殊核苷酸順序內或附近切割DNA。因此，被廣泛用于DNA分子克隆和序列測定。......閱讀全文
核酸酶保護實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 核酸酶 試劑、試劑盒 ATP CTP GTP MUTP
什么是核酸酶？
核酸酶有DNase、RNase、核酸酶S1等，可水解相應的DNA和RNA，核酸酶S1可降解單鏈DNA和RNA，用量增大也可降解雙鏈核酸。它可用于切去ds-cDNA合成中產生的發夾環。 末端轉移酶在Mg 存在下，選擇3′－OH端單鏈DNA為引物加成核苷酸，在Co 存在下，選擇3′－OH端雙鏈DN
核酸酶的主要種類
核酸外切酶有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸
核酸酶的分類介紹
核酸外切酶有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸
細胞內cccDNA的抽提與純化
最常用的抽提細胞內cccDNA的方法是蛋白質－去污劑沉淀法，其原理是基于rcDNA和cccDNA與蛋白質結合能力的差異。rcDNA能與蛋白質共價結合，與絕大多數細胞染色體DNA一起形成沉淀，而cccDNA不能與蛋白質結合故游離于上清中，用酚氯仿抽提上清即可得到cccDNA。根據筆者的經驗，該方法的主
核酶和核酸酶的區別
核酶是有催化活性的RNA, 即化學本質是RNA,卻具有酶的催化功能。核酶的功能很包括切割RNA、切割DNA,、連接RNA、磷酸酶活性等。與蛋白質酶相比，核酶的催化效率較低，是一種較為原始的催化酶。核酶可降解特異的mRNA序列。核酶又稱核酸類酶、酶RNA、核酶類酶RNA。 它的發現打破了酶是蛋白質的傳
核酸酶的作用機制
不同來源的核酸酶，其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，稱為核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于DNA，稱為脫氧核糖核酸酶（DNase），有些核酸酶專一性較低，既能作用于RNA也能作用于DNA，因此統稱為核酸酶（nuclease）。根據核酸酶作用的位置不同，又可將核酸酶
兆核酸酶的定義
中文名稱兆核酸酶英文名稱meganuclease定 義一類核酸酶內切酶，其識別序列較長，位點極為罕見，切割產生的片段很大，是定位基因操作的工具。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
RNA－SI－核酸酶作圖
實驗材料 [γ-32P」ATP合適的寡核苷酸DNA 模板l10XdNTP 混合物KLenow 片段合適的限 制性內切核酸酶X 射線膠片洗脫緩沖液tRNA 石蠟油S1 核酸酶試劑、試劑盒 10X 激酶緩沖液PNK10X 復性緩沖液6% 聚丙烯酰胺 8mol L 尿素溶液 (溶于 0.5XTBE) 及甲
RNA－SI－核酸酶作圖
? ? ? ? ? ? 實驗材料 [γ-32P」ATP 合適的寡核苷酸 DNA 模板l 10XdNTP 混合物 KLenow 片段 合適的限 制性內切核酸酶
核酸酶的發展歷史
20世紀70年代，在細菌中陸續發現了一類核酸內切酶，能專一性地識別并水解雙鏈DNA上的特異核苷酸順序，稱為限制性核酸內切酶（restriction endonuclease，簡稱限制酶）。當外源DNA侵入細菌后，限制性內切酶可將其水解切成片段，從而限制了外源DNA在細菌細胞內的表達，而細菌本身的DN
信使核糖核酸的降解相關介紹
同一細胞內的不同mRNA具有不同的壽命（穩定性）。在細菌細胞中，單個mRNA可以存活數秒至超過一小時，但平均壽命為1至3分鐘，因此，細菌mRNA的穩定性遠低于真核mRNA。哺乳動物細胞mRNA的壽命從幾分鐘到幾天不等。mRNA的穩定性越高，從該mRNA產生的蛋白質越多。 mRNA的有限壽命使細胞
信使RNA的降解
同一細胞內的不同mRNA具有不同的壽命（穩定性）。在細菌細胞中，單個mRNA可以存活數秒至超過一小時，但平均壽命為1至3分鐘，因此，細菌mRNA的穩定性遠低于真核mRNA。哺乳動物細胞mRNA的壽命從幾分鐘到幾天不等。mRNA的穩定性越高，從該mRNA產生的蛋白質越多。 mRNA的有限壽命使細胞能夠
核酸酶的基本信息
能夠將聚核苷酸鏈的磷酸二酯鍵切斷的酶，稱為核酸酶。核酸酶屬于水解酶，作用于磷酸二酯鍵的P-O位置。?核酸酶是在核酸分解的第一步中，作用于水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵的一種核酸。在高等動植物中都有作用于磷酸二酯鍵的。不同來源的核酸酶，其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，稱為核糖核酸
關于核酸酶的基本信息介紹
能夠將聚核苷酸鏈的磷酸二酯鍵切斷的酶，稱為核酸酶。核酸酶屬于水解酶，作用于磷酸二酯鍵的P-O位置。 核酸酶是在核酸分解的第一步中，作用于水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵的一種核酸。在高等動植物中都有作用于磷酸二酯鍵的。 不同來源的核酸酶，其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，稱
核酸酶的基本信息介紹
能夠將聚核苷酸鏈的磷酸二酯鍵切斷的酶，稱為核酸酶。核酸酶屬于水解酶，作用于磷酸二酯鍵的P-O位置。 核酸酶是在核酸分解的第一步中，作用于水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵的一種核酸。在高等動植物中都有作用于磷酸二酯鍵的。 不同來源的核酸酶，其專一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，稱
核酸酶的分類與發展史
分類一、核酸外切酶有些核酸酶能從DNA或RNA鏈的一端逐個水解下單核苷酸，所以稱為核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶稱為脫氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶稱為核糖核酸外切酶;也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶從3′端開始逐個水解核苷酸，稱為3′→5′外切酶，例如，
原核mRNA的降解
原核生物mRNA的降解是不同核糖核酸酶包括核酸內切酶，3'核酸外切酶和5'核酸外切酶的共同作用的結果。在一些情況下，長度為數十至數百個核苷酸的小RNA分子（sRNA）可通過與互補序列堿基配對來促進RNase III對特定mRNA的降解。
原核mRNA的降解
原核生物mRNA的降解是不同核糖核酸酶包括核酸內切酶，3'核酸外切酶和5'核酸外切酶的共同作用的結果。在一些情況下，長度為數十至數百個核苷酸的小RNA分子（sRNA）可通過與互補序列堿基配對來促進RNase III對特定mRNA的降解。
分子遺傳學詞匯克列諾片段
中文名稱：克列諾片段英文名稱：Klenow fragment定 義：DNA聚合酶的羧基大片段。已喪失5'→3'端外切核酸酶活性，但仍保留5' →3' 端聚合酶活性和3' →5'端外切酶活性。應用學科：遺傳學（一級學科），分子遺傳學（二級學科）
提高PCR的忠實性
帶有校正功能的酶包括克隆和效率分析，PCR產物表達或定點突變在內的PCR應用都需要高忠實性的PCR。Taq DNA聚合酶被看做是低忠實性的聚合酶，因為其缺少3'到5'外切核酸酶（校正）活性。使用帶有3'到5'外切核酸酶活性的熱穩定聚合酶可以提高忠實性。但是這些聚合酶的
如何在PCR產物表達中提高忠實性？
? 包括克隆和效率分析，PCR產物表達或定點突變在內的PCR應用都需要高忠實性的PCR。Taq DNA聚合酶被看做是低忠實性的聚合酶，因為其缺少3'到5'外切核酸酶（校正）活性。使用帶有3'到5'外切核酸酶活性的熱穩定聚合酶可以提高忠實性。但是這些聚合酶的產量比Taq
核糖核酸酶保護分析
一、體外轉錄在無菌1.5 ml 微型離心管中，結合以下內容：4 ul 5倍轉錄緩沖液2 ul 0.1 M DTT4 ul 2.5 MM NTP（A，C，G）0.8 ul RNA酶抑制劑（25 U/ul）RNA酶抑制劑（Promega）中100 UM冷UTP1 ul/ug ?UL線性DNA模板5 ul
核酸酶的基本分類
能夠將聚核苷酸鏈的磷酸二酯鍵切斷的酶，稱為核酸酶。核酸酶屬于水解酶，作用于磷酸二酯鍵的P-O位置。?核酸酶是在核酸分解的第一步中，作用于水解核苷酸之間的磷酸二酯鍵的一種核酸。在高等動植物中都有作用于磷酸二酯鍵的。
概述核酸酶的發展歷史
20世紀70年代，在細菌中陸續發現了一類核酸內切酶，能專一性地識別并水解雙鏈DNA上的特異核苷酸順序，稱為限制性核酸內切酶（restriction endonuclease，簡稱限制酶）。當外源DNA侵入細菌后，限制性內切酶可將其水解切成片段，從而限制了外源DNA在細菌細胞內的表達，而細菌本身的
5.5－RNA－SI－核酸酶作圖
SI 核酸酶是種內切酶，它是從米曲霉米曲霉 (Aspergillusoryzae) 中分離得到。它能降解單鏈核酸，卻不能降解雙鏈核酸。此外，它能高靈敏度地降解局部錯配的雙鏈分子，即使只有一對堿基錯配，也能因 S1 核酸酶的切割而被檢測出來。用 S1 核酸酶來識別和切割錯配或未復性的區域，再通過變性內
什么是核糖核酸酶？
指能水解RNA磷酸二酯鍵的酶稱核糖核酸酶(ribonuclease，RNase)。不同的RNase其專一性不同，例如牛胰核糖核酸酶(RNase I)，它的作用位點是嘧啶核苷3’一磷酸與其他核苷酸之間的連接鍵，而核糖核酸酶T1(RNase T1)的作用位點是3’鳥苷酸與其他相鄰核酸之間的5’一OH
核糖－核酸酶H的定義
所有類型細胞均含有不止一種核糖核酸酶H。核糖核酸酶H(RNaseH)催化DNA-RNA雜合體的RNA部分的核內降解，產生不同鏈長帶3'羥基和5'磷酸末端的寡核糖核酸。
核糖－核酸酶H的特征
在許多反轉錄病毒中與多功能酶的反轉錄酶有關，在病毒基因組進入DNA轉錄的不同階段執行重要的功能。在真細菌中，核糖核酸酶H確信在以下方面是所必需的：從Okazaki片段去除RNA引物時、在轉錄子進入DNA聚合酶I啟動DNA合成所用引物的轉錄過程時，以及在去除R-環為在大腸桿菌染色體復制起點提供不規則D
核糖－核酸酶H的定義
所有類型細胞均含有不止一種核糖核酸酶H。核糖核酸酶H(RNaseH)催化DNA-RNA雜合體的RNA部分的核內降解，產生不同鏈長帶3'羥基和5'磷酸末端的寡核糖核酸。