關于單克隆抗體制備骨髓瘤細胞的介紹
骨髓瘤細胞能產生并分泌大量的免疫球蛋白，這樣的瘤細胞融合后，可能影響或降低所分泌抗體的滴度，所以必須選育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤細胞。 選擇骨髓瘤細胞的條件： ①該瘤細胞系的來源應與制備脾細胞小鼠為同一品系，以便兩者的組織相容性抗原一致； ②骨髓瘤細胞必須是靜息狀態，不產生γ球蛋白或不分泌到細胞外； ③骨髓瘤細胞生長需要一個較高的細胞密度,最好106個細胞/ml； ④生長速度快，繁殖時間短。 常用的Balb/c小鼠產生的骨髓瘤細胞株有： ①S194/5XXO·BU·1； ②SP2/0—Ag14（簡稱SP2）； ③P2—X-—Ag8·6·5·3（簡稱653）； ④FO以653最為常用，它是由礦物油4－甲基－15烷（Pristane，降植烷）誘發出來的一種漿細胞瘤（MinerolOilplasmacytoma，MOPC）并經過培育形成一株8-氮鳥嘌呤有抵抗力的亞系。骨髓瘤細胞一般由有關單位直接引入，保......閱讀全文
關于單克隆抗體制備骨髓瘤細胞的介紹
骨髓瘤細胞能產生并分泌大量的免疫球蛋白，這樣的瘤細胞融合后，可能影響或降低所分泌抗體的滴度，所以必須選育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤細胞。 選擇骨髓瘤細胞的條件： ①該瘤細胞系的來源應與制備脾細胞小鼠為同一品系，以便兩者的組織相容性抗原一致； ②骨髓瘤細胞必須是靜息狀態，不產生γ球蛋白
關于單克隆抗體制備脾細胞的選擇介紹
1．材料 (1)免疫過的血清抗體滴度高的Balb/c鼠。 單克隆抗體制備流程 單克隆抗體制備流程 (2)1640培養液(3)2.5%FCS－1640營養液 2．操作方法 (1)拉頸或用CO2處死小白鼠。 (2)將小鼠放于70%酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在無菌條件下取脾。 (
單克隆抗體細胞選擇骨髓瘤細胞
骨髓瘤細胞能產生并分泌大量的免疫球蛋白，這樣的瘤細胞融合后，可能影響或降低所分泌抗體的滴度，所以必須選育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤細胞。選擇骨髓瘤細胞的條件：①該瘤細胞系的來源應與制備脾細胞小鼠為同一品系，以便兩者的組織相容性抗原一致；②骨髓瘤細胞必須是靜息狀態，不產生γ球蛋白或不分泌到細胞外
關于單克隆抗體的制備過程介紹
1.免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用二
單克隆抗體制備飼養細胞的相關介紹
在體外的細胞培養中，單個的或數量很少的細胞不易生存與繁殖，必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖，加入的細胞稱之為飼養細胞（Feedercell）。在細胞融合和單克隆的選擇過程中，就是在少量的或單個細胞的基礎上使其生長繁殖成群體，因此在這一過程中必須使用飼養細胞。許多種類的動物細胞都可以做飼養細胞
關于漿細胞骨髓瘤實驗診斷的介紹
漿細胞骨髓瘤是發生在骨髓的以漿細胞異常增生為特征的惡性腫瘤。其特征是異常漿細胞增生，并廣泛浸潤骨骼和軟組織，同時分泌M蛋白。漿細胞骨髓瘤實驗診斷主要依據骨髓檢查和血尿M蛋白檢測，免疫分型是重要的輔助指標，β2微球蛋白檢測有助于判斷預后。 1.骨髓象 一般呈增生活躍，骨髓瘤細胞數目不等
關于骨髓瘤的細胞學檢查介紹
腫瘤血運豐富呈暗紅色或深紅色，較脆軟。骨髓穿刺找到大量異常漿細胞可確診。血清蛋白增高，A/G倒置，蛋白電泳異常，顯示β和r球蛋白升高。并可出現白血病血象。40%以上的病人尿中Bence-Jones蛋白陽性。另外有血鈣增高，尿蛋白電泳異常等。 鏡下可見瘤體主要由大量密集的瘤細胞組成，間質極少。瘤細
骨髓瘤細胞的特點介紹
骨髓瘤細胞是B-淋巴漿細胞系統惡性增殖所致一種腫瘤。其特點是骨髓中出現異常的漿細胞 (稱為骨髓瘤細胞）的惡性增殖，并分泌某 種體液因子，使破骨細胞異常激活，造成溶 骨性病變，引起骨痛和骨質破壞，貧血、腎 功能損害、免疫功能異常。骨髓瘤細胞具有 以下幾個特點： ①穩定，易培養； ②自身不 分泌
關于單克隆抗體技術的細胞篩選的介紹
雜交瘤細胞在融合后2周左右即可篩選，即把分泌所需抗體的雜交瘤孔從眾多的孔中選出來，通常也稱為抗體檢測。抗體檢測的方法很多，通常根據所研究的抗原和 實驗室的條件而定。但作為雜交瘤篩選的抗體檢測方法必須具有快速、準備、簡便，便于一次處理大量樣品等特點。因為往往有幾百個樣品需要在短短幾個小時就報 告結
關于骨髓瘤的分期介紹
通常根據血紅蛋白、血鈣、溶骨性病變部位以及M蛋白合成率將多發性骨髓瘤分為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期，每期當中又根據有無腎功能損害分為A、B兩期。還有其他一 些實驗室檢查指標可用來判斷患者的預后，也被用于疾病分期。分期對于治療的選擇、療效的判斷及疾病預后的推測有指導價值。
單克隆抗體的制備
實驗方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握），然后對理想的雜交瘤細胞加
單克隆抗體的制備
實驗方法原理使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握），然后對理想的雜交瘤細胞加以擴增、冷凍和
單克隆抗體的制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩
關于單克隆抗體技術的細胞融合的介紹
首先制備細胞培養基、 氨基喋呤（A）貯存液、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷（HT）貯存液等各種細胞生長所需的營養物質。然后制備髓瘤細胞和脾淋巴細胞，之后進行細胞融合。在細胞融合后選擇性培養過程中，由于大量骨髓瘤細胞和脾細胞相繼死亡，此時單個或少數分散的雜交瘤細胞多半不易存活，通常必須加入其他活細胞使之繁
關于單克隆抗體細胞融合的過程介紹
融合的方法很多，常用的有轉動法和離心法。融合時脾細胞和骨髓瘤細胞的比例為1:1至10:1不等。3:1或5:1最為常用。 1．試劑與材料 (1)供融合用的脾細胞及骨髓瘤細胞。 (2)1640培養液100ml。 (3)完全1640液100ml。 (4)2.5%FCS－1640液50ml。
關于骨髓瘤的病因分析介紹
骨髓瘤是一種進行性的腫瘤性疾病，其特征為骨髓漿細胞瘤和一株完整性的單克 隆免疫球蛋白(IgG，IgA，IgD或IgE)或BenceJones蛋白質(游離的單克隆性κ或γ輕鏈)過度增生。多發性骨髓瘤常伴有多發性溶骨性損害，高鈣血癥，貧血，腎臟損害，而且對細菌性感染的易感性增高，正常免疫球蛋白的生成
關于骨髓瘤的詳細癥狀介紹
骨髓瘤是中年和晚年(40～60歲)發生的多發惡性骨髓內腫瘤。椎體、肋骨、胸 骨、顱骨和骨盆為其好發部位。晚期，股骨和肱骨亦可被累，但膝和肘以下的骨質極少發生。其主要癥狀為疼痛，初期為間歇性，繼為持續性，疼痛十分劇烈。神經可能被壓迫，造成放射性疼痛或截癱。腫瘤一旦發現后，多數患者逐漸發生進行性貧血
關于骨髓瘤的鑒別診斷介紹
典型的多發性骨髓瘤病例診斷并不困難。主要依據骨髓穿刺活檢發現異常漿細胞浸潤,X光片發現骨質破壞性改變,血清電泳檢出M蛋白或/和尿中存在輕鏈。診斷的同時還應做好鑒別診斷。 1、骨髓穿刺活檢發現大量骨髓瘤細胞 此為最主要的診斷依據。但漿細胞增多也可見于類風濕關節炎,骨髓內腫瘤轉移、慢性炎癥等諸多疾
關于孤立性骨髓瘤的介紹
孤立性骨髓瘤約占骨髓瘤的3%。病變僅侵犯骨骼的某個局部部位，產生局部疼痛。多數患者無貧血、高血鈣及腎功能不全。約1/4患者血清或尿中的M蛋白含量較一般低（
關于骨髓瘤細胞分泌大量M蛋白引起的癥狀的介紹
1、繼發感染 感染多見于細菌，亦可見真菌、病毒，最常見為細菌性肺炎、泌尿系感染、敗血癥，病毒性帶狀庖疹也可見。 2、腎功能損害 50%－70%病人尿檢有蛋白、紅細胞、白細胞、管型，出現慢性腎功能衰竭、高磷酸血癥、高鈣血癥、高尿酸血癥，可形成尿酸結石。 3、高粘滯綜合征 約為2%－5%發
單克隆抗體的制備過程
單克隆抗體在現代生物醫學中的作用越來越大，它不僅被廣泛應用于生化和免疫檢測，而且治療癌癥和自體免疫疾病的單抗藥物也逐漸批準上市。因此單抗的制備和篩選具有其內在的重要性。 動物免疫 取4只6周齡雌性BALB/c小鼠皮下注射抗原（20 μg/只），第一次免疫與等量弗氏完全佐劑乳化，0.2 mL/只
單克隆抗體的制備過程
1. 免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用
單克隆抗體的制備過程
1. 免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用
單克隆抗體的制備步驟
過程1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞
單克隆抗體的制備過程
1.免疫動物選擇免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官,刺激相應B淋巴細胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細胞。2.細胞融合采用二氧化碳氣體處
單克隆抗體的制備過程
1.免疫動物免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。2.細胞融合采用二氧化碳氣體處死小
單克隆抗體的制備步驟
過程1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞
單克隆抗體的制備過程
單克隆抗體的大量制備主要采用動物體內誘生法和體外培養法。(1)體內誘生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進行預處理。1-2周后，腹腔內接種雜交瘤細胞。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內增殖，并產生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體
單克隆抗體的制備步驟
1、免疫動物的選擇：免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的過程。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。2、細胞融合：采用二氧化碳氣體處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，制備脾細胞懸液。 將準備好的同
單克隆抗體的制備過程
1. 免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。 2.細胞融合 采用