基因探針的標記方法
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素、地高辛配體等作為標記物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。最常用的探針標記法是缺口平移法(nicktranslation)。探針的標記也可以采用隨機引物法,即向變性的探針溶液加入6個核苷酸的隨機DNA小片段,作為引物,當后者與單鏈DNA互補結合后,按堿基互補原則不斷在其3’OH端添加同位素標記的單核苷酸,這樣也可以獲得比放射性很高的DNA探針。......閱讀全文
基因探針的標記方法
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素、地高辛配體等作為標記物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。
基因探針的標記方法介紹
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5′端核苷酸,同時在3′端修復加入被標記核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻,多用于大分子DNA標記,(>100
關于基因探針標記的方法介紹
探針的標記方式有放射性標記和非放射性標記。標記物質有放射性元素(如32P等)和非放射性物質(如生物素、地高辛等)。32P是最常用的核苷酸標記同位素,被標記的dNTP本身就帶有磷酸基團,便于標記。特點是比活性高,可達9000Ci/mmol;發射的β射線能量高。用它標記的探針自顯影時間短,靈敏度高。
基因探針標記的介紹
探針是能與特異靶分子反應并帶有供反應后檢測的合適標記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補的原理,用特異的基因探針即識別特異堿基序列的有標記的一段單鏈DNA(或RNA)分子,與被測定的靶序列互補,以檢測被測靶序列的技術叫核酸探針技術。探針制備就是將目的基因進行標記。特異性探針有三種形式——cDNA、R
簡述探針標記方法
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´;端核苷酸,同時在3´;端修復加入被標記核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻,多用于大分
關于基因探針的標記介紹
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素-親合素系統、地高辛配體等作為標記物的方法。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。最常
關于基因探針的標記介紹
為了確定探針是否與相應的基因組DNA雜交,有必要對探針加以標記,以便在結合部位獲得可識別的信號,通常采用放射性同位素32P標記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發展了一些用非同位素如生物素-親合素系統 、地高辛配體等作為標記物的方法。非同位素標記的優點是保存時間較長,而且避免了同位素的污染。
關于探針標記方法的介紹
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´;端核苷酸,同時在3´;端修復加入被標記核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻,多用于大分
末端標記法介紹DNA探針的標記方法
末端標記法不是將DNA進行全長標記,只在其5'端或3’端導入標記物進行部分標記。該標記方法可得到全長DNA探針,因為攜帶的標記分子較少,所以標記比活性不高。
探針標記方法的主要類型介紹
①缺口平移標記法。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5′端核苷酸,同時在3′端修復加入被標記核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、簡便、成本相對較低、比活性相對較高、標記均勻,多用于大分子DNA標記,(>1000b