常用酶標記法介紹
酶與抗體交聯,常用戊二醛法和過碘酸鹽氧化法。郭春祥建立的HRP標記抗體的改良過碘酸鈉法簡單易行,標記效果好,特別適用于實驗室的小批量制備。其標記程序為:將5μg HRP溶于0.5ml蒸餾水中,加入新鮮配制的0.06 mol/L的過碘酸鈉(NaIO4)水溶液0.5ml,混勻置4℃冰箱30分鐘 , 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml,室溫放置30分鐘后加入含5(g純化抗體的水溶液1ml,混勻并裝透析袋,以0.05mol/L、pH9.5的碳酸鹽緩沖液于4℃冰箱中慢慢攪拌透析6小時(或過夜)使之結合,然后吸出,加硼氫化鈉(NaBH4)溶液( 5(g/ml)0.2ml,置4℃冰箱2小時,將上述結合物混合液加入等體積飽和硫酸銨溶液,置4℃冰箱30分鐘后離心,將所得沉淀物溶于少許0.02mol/L、pH7.4PBS中,并對之透析過夜(4℃),次日離心除去不溶物,即得到酶標抗體,用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml,......閱讀全文
酶標抗體結合物的純化
在酶標記的溶液中,出現的是各種交聯物的混合物,有酶-抗體、酶-抗體-酶、抗體-抗體、酶-酶,甚至還有游離的酶和抗體。在這中間,除了抗體-酶和酶-抗體-酶外,其它都應該給予除去。1、50%飽和硫酸銨沉淀法。此法只能除去游離的酶及酶-酶聚合體。而不能除去其它不需要者。但是此法對酶標抗體的損耗少。2、過S
高結合力酶標板
酶標板經表面處理后蛋白結合能力大大増強,可達300-400ng 1gG/cm2,主要結合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標板可提高敏感性,并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產生非特異性反應。抗原或抗體包被后,以非離子去污劑無法有效地封閉未結合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑
免疫酶標方法的方法原理
免疫酶標方法是繼免疫熒光后,于60年代發展起來的技術。基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是最常用的技術。本方法與免疫熒光技術相比的主要優點是:定位準確,
常用的酶有哪些?
常用的酶有:1.辣根過氧化物酶(HRP): 目前酶聯免疫吸附試驗中應用最廣泛的標記用酶。由無色的糖蛋白(主酶)和亞鐵血紅蛋白(輔基)結合而成的復合物。輔基是酶活性基團,而主酶則與酶活性無關,HRP的純度用RZ(HRP分別在403nm和275nm處的吸光度比值)表示,RZ值應大于3.0 。RZ值僅說明
常用的酶和常用的底物有哪些?
常用的酶1.辣根過氧化物酶(HRP):目前酶聯免疫吸附試驗中應用最廣泛的標記用酶。由無色的糖蛋白(主酶)和亞鐵血紅蛋白(輔基)結合而成的復合物。輔基是酶活性基團,而主酶則與酶活性無關,HRP的純度用RZ(HRP分別在403nm和275nm處的吸光度比值)表示,RZ值應大于3.0。RZ值僅說明血紅素基
酶標板洗板機堵塞現象的解決與預防方法介紹
酶標板洗板機是專門清洗酶標板的,一般和酶標儀配套使用。微電腦控制,能自動完成多種規格酶標板的洗板工作,可廣泛應用于醫院檢驗科、中心實驗室、體檢科、輸血科、專科實驗室、疾病控制中心、衛生監督保健所、血液中心、血站、動植物檢驗檢疫機構、畜牧獸醫疫病中心、科研機構、院校實驗室、生物制品企業衛生防疫站等單位
末端標記法介紹DNA探針的標記方法
末端標記法不是將DNA進行全長標記,只在其5'端或3’端導入標記物進行部分標記。該標記方法可得到全長DNA探針,因為攜帶的標記分子較少,所以標記比活性不高。
乙肝表面抗原酶標法陽性金標法陰性的原因
有兩種可能:1。乙肝已轉陰。這種可能性成年人身上有時會發生。2。乙肝需早晨空腹去檢查。不可吃任何東西,連水也不能喝。才能準確。你可過幾個月后按此方法去查下。
酶標板振蕩器的特點
l LCD實時顯示系統運行狀態和參數值*。 l 采用高品質開關電源,整機長期運行穩定可靠*。 l 采用一鍵式旋鈕操作,簡單易用*。 l 具有斷電恢復功能,當外電源斷電又重新來電時,設備可按原設定程序自動恢復運行*; l 微處理器控制,溫控線性好、波動小*; l 可在0~100小時范圍內
自動酶標分析儀的特點
測量準確,重復性好,具有質控功能,無須外接計算機即可自動提供31天質控數據及X平均值、SD、CV值; 能做定性、定量、基因檢測; 開放型軟件,可適應目前國內外任何廠家的試劑; 可預設操作程序,并可儲存檢測結果; 檢測結果既可直接顯示在屏幕上,也可打印保存; 開機后具有自檢功能,可保證儀
酶標板的基本信息簡介
作為載體的固相聚苯乙烯(Polystyrene)表面對抗原、抗體或抗原抗體復合物的吸附也起著重要作用。 抗原、抗體和其它生物分子通過多種機制吸附至載體表面,這包括通過疏水鍵、流水/離子鍵的被動吸附,通過引入其它活性基團如氨基和碳基的共價結合,以及通過表面改性后的親水鍵結合。
酶標分析儀的相關概念
1. 微孔板。是一種經事先包埋專用于放置待測樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的小孔,孔內都包埋著相應的抗原或抗體,微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液。 [4] 2. 中心定位。儀器會自動對酶標孔進行中心定位,中心定位是要消除酶標孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準確。在對每一個酶
酶標分析儀的相關概念
1. 微孔板。是一種經事先包埋專用于放置待測樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的小孔,孔內都包埋著相應的抗原或抗體,微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液。 2. 中心定位。儀器會自動對酶標孔進行中心定位,中心定位是要消除酶標孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準確。在對每一個酶標儀進行
酶標板振蕩器的指標
1. 溫度控制范圍:環境溫度以上5度到80度 2.溫度均勻性:≤±0.5℃ 3.溫度穩定性:≤±0.5℃ 4. 升溫速度:≤20分鐘 (室溫升溫到80℃) 5. 加熱平臺溫度準確度:≤±0.5℃ 6. 振蕩轉速范圍:200-1600 rpm/min(步進1rpm) 7. 振蕩幅度與方
酶標板振蕩器的簡介
酶標板恒溫振蕩器采用微處理技術結合智能化PID 控制能夠在達到目標溫度后快速的保持穩定,可節省等待的時間而形成的酶標板恒溫振蕩器,產品設計緊湊而嚴密,占用的空間范圍小,帶來更多的自由和方便、噪音低、無污染;溫度、振蕩、時間LCD顯示,美觀大方,操作簡單等特點。主要用于酶標板(96孔/384孔板)
酶標抗體的質量鑒定與保存
1. 酶活性和抗體效價測定 采用雙向免疫擴散法(稀釋抗體)和DAB-H2O2顯色反應檢測結合物中抗體效價和免疫沉淀線中的酶促反應。 2. 酶量和IgG量 酶量(mg/ml)=OD403′0.4 IgG量(mg/ml)=(OD280-OD402′0.42)′0.94′0.62
酶標抗體的質量鑒定與保存
1. 酶活性和抗體效價測定采用雙向免疫擴散法(稀釋抗體)和DAB-H2O2 顯色反應檢測結合物中抗體效價和免疫沉淀線中的酶促反應。2. 酶量和IgG量酶量(mg/ml)=OD403 ′0.4IgG量(mg/ml)=(OD280- OD402 ′0.42)′0.94′0.62其中,0.42為酶蛋白本身
酶標分析儀的功能特點
酶標分析儀在實驗室中應用的主要作用就是用于酶聯免疫吸附試驗,可以分為單通道酶標分析儀、多通道酶標分析儀、全自動酶標分析儀和半自動酶標分析儀。
酶標抗體的質量鑒定與保存
1.酶活性和抗體效價測定: 采用雙向免疫擴散法(稀釋抗體)和DAB-H2O2 顯色反應檢測結合物中抗體效價和免疫沉淀線中的酶促反應。 2.酶量和IgG量: 酶量(mg/ml)=OD403 ′0.4 IgG量(mg/ml)=(OD280- OD402 ′0.42)′0.94
VIDAS全自動酶標免疫測試系統.
VIDAS是生物梅里埃公司生產的一種全自動免疫熒光酶標儀,在微生物檢測中主要是利用酶聯免疫的原理對微生物或毒素等進行篩選檢測。 mini-VIDAS是一臺全自動熒光免疫分析儀,它集合計算機、鍵盤及打印機于一身。此免疫儀的反應市控制整個酶聯反應的操作直至打印結果。內置計算機管理數據及報告。M
熒光素標記試劑與酶標試劑
(1)酶標試劑:酶標抗體僅需適當底物和普通光學顯微鏡即可高度敏感地檢出抗原。由于信號是通過吸收光的差異,而非發射光來檢測,底物的不溶性顯色產物分布在酶所在位置的周圍區域,因此這種檢測方法尚不能達到熒光技術的分辨率。 酶反應后出現沉淀,在酶所處位置周圍產生不溶性顯色產物,通過底物的顯色來檢出
細胞免疫化學:免疫酶標技術
1) 直接法1.標本固定。2.PBS洗滌2×3分鐘。3.1%?H2O2(或1%?H2O2?甲醇)抑制內源性過氧化物,室溫10~20分鐘。4.正常血清(1:10)孵育,室溫20分鐘。5.滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6.PBS洗滌3×3分鐘。7.DAB+H2O2顯色5~10分鐘,鏡下控制染色
如何正確操作使用酶標洗板機
酶標洗板機是一種精密的儀器設備,規范洗板機的操作程序,可以保證洗板機的正常狀態。而且正確的操作使用不僅能確保其準確性和穩定性,還能夠延長其使用壽命。那么,如何正確操作使用酶標洗板機?下面來看看專家的解答。?酶標洗板機的正確操作步驟:?一、開機:插上電源線,打開儀器開關。?二、換液:選擇沖洗欄內的換液
免疫酶技術中常用的酶-底物系統
各種免疫酶技術,最終都是以某種顯色反應而揭示待測物質來進行定性和定量分析。不同酶要選擇相應的底物,見下表。免疫酶技術中常用的酶-底物系統酶底物顯色反應測定波長/nm辣根過氧化物酶二氨基聯苯胺深褐色沉淀5-氨基水楊酸棕色449鄰苯二胺橘紅色492/460鄰聯甲苯胺藍色4254-硝基酚磷酸黃色400堿性
脈沖標記法的定義
脈沖標記法是指一次性加入示蹤物,標記只持續數小時,之后在一定時間內測量示蹤物在土壤-植物系統中的分配比例。
免疫標記法及其分類
免疫標記法及其分類1.熒光免疫法原理是應用一對單克隆抗體的夾心法。底物用磷酸-4-甲基傘形酮,檢測產物發出的熒光,熒光強度與Mb濃度呈正比,可在8min內得出結果。結果以Mb每小時釋放的速率表示(△Mb)表示。該法重復性好,線性范圍寬,具有快速、敏感、準確的特點。以雙抗夾心法為例,首先將特異性抗體與
酶活力測定常用的方法
酶活力測定常用的方法有終點法和動力學方法兩類。終點法測定完成一定量反應所需的時間,如α-淀粉酶的活力測定。因為碘對淀粉呈現藍色反應,當淀粉溶液中加入淀粉酶后,碘的藍色反應消失而呈現紅棕色;碘對淀粉顏色反應消失的時間可表示淀粉酶活力的大小。碘對淀粉顏色反應消失花的時間越短,表示酶的活力越高。動力學方法
關于探針標記的簡述
探針是能與特異靶分子反應并帶有供反應后檢測的合適標記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補的原理,用特異的基因探針即識別特異堿基序列的有標記的一段單鏈DNA(或RNA)分子,與被測定的靶序列互補,以檢測被測靶序列的技術叫核酸探針技術。探針制備就是將目的基因進行標記。特異性探針有三種形式——cDNA、R
基因探針標記的介紹
探針是能與特異靶分子反應并帶有供反應后檢測的合適標記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補的原理,用特異的基因探針即識別特異堿基序列的有標記的一段單鏈DNA(或RNA)分子,與被測定的靶序列互補,以檢測被測靶序列的技術叫核酸探針技術。探針制備就是將目的基因進行標記。特異性探針有三種形式——cDNA、R
臨床物理檢查方法介紹--眼震電圖描記法介紹
眼震電圖描記法介紹:?眼震電圖描記法(electronystagmography,ENG)用于前庭眼反射檢查,包括視動中樞檢查、位置試驗、冷熱試驗等,是診斷眩暈癥的重要手段。眼震電圖描記法正常值:?利用角膜(正電位)與視網膜(負電位)之間存在的電位差在眼球周圍形成的電場。眼球運動時周圍的電場隨之發生