關于親和色譜的概述
20世紀初,俄國植物學家茨維特(Tswett)首次提出色譜法。他把碳酸鈣粉末裝到玻璃管中,將植物葉子的石油醚萃取液作為樣品倒入管內,然后再用石油醚自上而下洗脫。隨著洗脫的進行,植物葉子中的各種色素向下移動逐漸形成一圈圈的色帶,茨維特將這種色帶分離過程稱為色譜(Chromatography),所用的玻璃管內的碳酸鈣填充物稱為固定相(stationary phase),洗脫用的石油醚稱為洗脫液或洗脫劑(eluent),也就是我們常說的流動相(mobile phase)。后來,采用該法分離了許許多多的物質,雖然分離過程中看不到色帶存在,但色譜法一直沿用至今。 色譜法在當今物質尤其是具有生物活性物質的分離中起到舉足輕重的作用。然而在色譜發展的早期有許多的人往往將色譜看做一種藝術(art), 但是隨著色譜理論的發展,以及色譜技術的不斷推廣,色譜逐漸的稱為了一種科學(science)。對于從事生物大分子分離的物質常常用一句話來形容色譜......閱讀全文
關于親和色譜的概述
20世紀初,俄國植物學家茨維特(Tswett)首次提出色譜法。他把碳酸鈣粉末裝到玻璃管中,將植物葉子的石油醚萃取液作為樣品倒入管內,然后再用石油醚自上而下洗脫。隨著洗脫的進行,植物葉子中的各種色素向下移動逐漸形成一圈圈的色帶,茨維特將這種色帶分離過程稱為色譜(Chromatography),所用
親和色譜的相關概述
20世紀初,俄國植物學家茨維特(Tswett)首次提出色譜法。他把碳酸鈣粉末裝到玻璃管中,將植物葉子的石油醚萃取液作為樣品倒入管內,然后再用石油醚自上而下洗脫。隨著洗脫的進行,植物葉子中的各種色素向下移動逐漸形成一圈圈的色帶,茨維特將這種色帶分離過程稱為色譜(Chromatography),所用
關于免疫親和色譜的簡介
生物學名詞,指免疫親和色譜是指利用抗體或者與抗體相關的材料作為固定相的色譜。 抗體對抗原性物質的選擇結合,使該技術越來越多地應用于生物物質以及非生物物質的分離、純化和分析。與HPLC結合的免疫親和和色譜稱為高效免疫親和色譜。
關于親和色譜的基本信息介紹
親和色譜也稱為親和層析,是一種利用固定相的結合特性來分離分子的色譜方法。親和色譜在凝膠過濾色譜柱上連接與待分離的物質有一定結合能力的分子,并且它們的結合是可逆的,在改變流動相條件時二者還能相互分離。親和色譜可以用來從混合物中純化或濃縮某一分子,也可以用來去除或減少混合物中某一分子的含量。
關于親和色譜的一般流程介紹
親和色譜分離的通常是混合在溶液中的物質,比如細胞內容物、培養基或血漿等。待分離的分子在通過色譜柱時被固定相或介質上的基團捕獲,而溶液中其他的物質可以順利通過色譜柱。然后把固態的基質取出后洗脫,目標分子即刻被洗脫下來。如果分離的目的是去除溶液中某種分子,那么只要分子能與介質結合即可,可以不必進行洗
親和層析法概述
親和層析法是利用生物大分子與某些對應的專一分子特異識別和可逆結合的特性而建立起來的一種分離生物大分子的色譜方法,也叫做生物親和或生物特異性親和色譜。這種特異可逆結合的物質很多,見表6–3。如抗原與抗體、底物與酶、激素與受體等,他們間的這種特異親和能力又叫親和力。親和色譜中,一對互相識別的分子互稱對方
親和色譜的載體選擇
用于親和色譜的理想載體應具有下列特性:⑴不溶性:不溶于水;⑵滲透性:疏松網狀結構,容許大分子自由通過;⑶有一定硬度,最好為均一的珠狀;⑷具有大量可供反應的化學基團,能與大量配基共價連接;⑸非特異性吸附能力極低;⑹能抗微生物和酶的侵蝕;⑺有較好的化學穩定性;⑻親水性。選擇配基根據對純化大分子的特異性的
親和色譜的工作原理
將一對能可逆結合和解離生物分子的一方作為配基(也稱為配體),與具有大孔徑、親水性的固相載體相偶聯、制成專一的親和吸附劑,再用此親和吸附劑填充色譜柱,當含有被分離物質的混合物隨著流動相流經色譜柱時,親和吸附劑上的配基就有選擇地吸附能與其結合的物質,而其他的蛋白質及雜質不被吸附,從色譜柱中流出,使用適當
親和色譜的特殊應用
親和色譜的用途很廣泛,可以用來從細胞提取物中分離純化核酸、蛋白,還可以從血漿中分離抗體。分離重組蛋白就經常使用親和色譜。通過基因修飾為蛋白加上一些人為的特性,這些特性使蛋白選擇性地與配體結合,從而達到分離的目的。親和色譜的另一大用途是從血漿中分離抗體。
親和色譜的影響因素
1、上樣體積若目標產物與配基的結合作用較強,上樣體積對親和色譜效果影響較小。若二者間結合力較弱,樣品濃度要高一些,上樣量不要超過色譜柱載量的5%~10%。(這個載量是指色譜柱所吸附的配體的量)2、柱長親和柱的長度需要根據親和介質的性質確定。如果親和介質的載量高,與目標產物(目標物)的作用力強,可以選
親和色譜的技術特點
親和色譜也稱為親和層析,是一種利用固定相的結合特性來分離分子的色譜方法。親和色譜在凝膠過濾色譜柱上連接與待分離的物質有一定結合能力的分子,并且它們的結合是可逆的,在改變流動相條件時二者還能相互分離。親和色譜可以用來從混合物中純化或濃縮某一分子,也可以用來去除或減少混合物中某一分子的含量。
親和色譜配基的選擇
純化生物大分子的配基(ligand)可以選小的有機分子,也可以選天然的生物高分子作理想的配基,它首先必須對欲純化的大分子具有很高的親和力。另外這些配基必須具備可修飾的基團,而且通過這些基團與載體形成共價鍵。這些共價鍵的形成不致于嚴重地影響配基與欲純化蛋白質的親和力。用于親和層析的配基有酶的底物、酶的
親和色譜法
親和色譜法( affinity chromatography),將相互間具有高度特異親和性的二種物質之一作為固定相,利用與固定相不同程度的親和性,使成分與雜質分離的色譜法。
親和色譜法
一、基本理論(一)原理 在生物體內,許多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有與某些相對應的專一分子可逆結合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、激素和受體、RNA和其互補的DNA等,都具有這種特性。生物分子之間這種特異的結合能力稱為親和力,根據生物分子間親和吸附和解離的原理,建立起來的
親和色譜法
親和色譜法( affinity chromatography),將相互間具有高度特異親和性的二種物質之一作為固定相,利用與固定相不同程度的親和性,使成分與雜質分離的色譜法。中文名:親和色譜法外文名:affinity chromatography所屬學科:生物應用領域:實驗例如利用酶與基質(或抑制劑)
關于氣相色譜的概述
氣相色譜并不能識別大部分的樣品,而且并非樣品中的所有物質都可以通過氣相色譜檢測出來。氣相色譜真正能告訴分析者的,只是在某個時間有一種物質從色譜柱中被洗脫出來,而且檢測器對它有響應。為了使結果變得更有意義,分析人員需要知道樣品中可能含有什么成分,以及它們可能有怎么樣的濃度。還有,一些低含量的物質可
蛋白質親和純化概述
蛋白質的分離純化是研究蛋白質結構和功能的重要手段,也是制備工業用酶、抗體、疫苗、基因重組藥物等的唯一途徑。蛋白純化的方法多種多樣。常用的有以下幾種方案:基于蛋白質的溶解度不同設計的鹽析或等電點沉淀方法;基于蛋白質分子量差異的透析與超濾或凝膠過濾方法;基于蛋白質所帶電荷不同設計的等電聚焦電泳或離子交換
簡述親和色譜的特殊應用
親和色譜的用途很廣泛,可以用來從細胞提取物中分離純化核酸、蛋白,還可以從血漿中分離抗體。分離重組蛋白就經常使用親和色譜。通過基因修飾為蛋白加上一些人為的特性,這些特性使蛋白選擇性地與配體結合,從而達到分離的目的。親和色譜的另一大用途是從血漿中分離抗體。
影響親和色譜的因素介紹
1、上樣體積 若目標產物與配基的結合作用較強,上樣體積對親和色譜效果影響較小。若二者間結合力較弱,樣品濃度要高一些,上樣量不要超過色譜柱載量的5%~10%。(這個載量是指色譜柱所吸附的配體的量) 2、柱長 親和柱的長度需要根據親和介質的性質確定。如果親和介質的載量高,與目標產物(目標物)的
親和色譜法原理
在生物體內,許多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有與某些相對應的專一分子可逆結合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、激素和受體、RNA和其互補的DNA等,都具有這種特性。生物分子之間這種特異的結合能力稱為親和力,根據生物分子間親和吸附和解離的原理,建立起來的色譜法稱親色譜法。親和色譜
親和色譜法簡介
一、基本理論(一)原理:在生物體內,許多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有與某些相對應的專一分子可逆結合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、激素和受體、RNA和其互補的DNA等,都具有這種特性。生物分子之間這種特異的結合能力稱為親和力,根據生物分子間親和吸附和解離的原理,建立
關于液相色譜理論的概述
液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相,稱為經典液相色譜法,此方法柱效低、時間長(常有幾個小時)。高效液相色譜法(High performance Liquid Chromatography,HPLC)是在經典液相色譜法的基礎上,于60年代后期引入了氣相色譜理論而
關于高速逆流色譜的高速逆流色譜的概述
高速逆流色譜儀(High-speed Countercurrent Chromatography,簡稱HSCCC),于1982年由美國國立衛生院Ito博士研制開發的一種新型的、連續高效的液液分配色譜技術。 高速逆流色譜 ( high-speed countercurrent chromatog
親和色譜法的適應范圍
可用于分離活體高分子物質、過濾性病毒及細胞。或用于對特異的相互作用進行研究。
親和色譜法的技術簡介
親和色譜法( affinity chromatography),將相互間具有高度特異親和性的二種物質之一作為固定相,利用與固定相不同程度的親和性,使成分與雜質分離的色譜法。
親和色譜法的適應范圍
可用于分離活體高分子物質、過濾性病毒及細胞。或用于對特異的相互作用進行研究。
親和色譜法的技術簡介
利用酶與基質(或抑制劑)、抗原與抗體,激素與受體、外源凝集素與多糖類及核酸的堿基對等之間的專一的相互作用,使相互作用物質之一方與不溶性擔體形成共價結合化合物,用來作為層析用固定相,將另一方從復雜的混合物中選擇可逆地截獲,達到純化的目的。
親和色譜法的技術特點
親和色譜法( affinity chromatography),將相互間具有高度特異親和性的二種物質之一作為固定相,利用與固定相不同程度的親和性,使成分與雜質分離的色譜法。
親和色譜的一般流程
親和色譜分離的通常是混合在溶液中的物質,比如細胞內容物、培養基或血漿等。待分離的分子在通過色譜柱時被固定相或介質上的基團捕獲,而溶液中其他的物質可以順利通過色譜柱。然后把固態的基質取出后洗脫,目標分子即刻被洗脫下來。如果分離的目的是去除溶液中某種分子,那么只要分子能與介質結合即可,可以不必進行洗脫,
親和色譜法載體的選擇
用于親和色譜法的理想載體應非特異性吸附要盡可能小,對其他大分子物質的作用很微弱;必須具有多孔的網狀結構,能使大分子自由通過而增加配基的有效濃度;必須具有相當量的化學基團可供活化,并在溫和條件下能與大量的配基連接;具有良好的機械性能;在較寬的pH值、離子強度和變性劑濃度范圍內具有化學和機械穩定性;高度