雙熒光素酶報告基因檢測（一）
雙熒光素酶實驗是廣大科研工作者經常會遇到的實驗。雙熒光素酶報告基因通常以螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）為報告基因，以海腎熒光素酶（Renilla luciferase）為內參基因。這樣構建的報告系統具備很多優勢，包括檢測靈敏度高、動態范圍廣、應用靈活等。同時雙熒光素酶實驗也有很多應用比如蛋白與蛋白互作，miRNA靶基因驗證，轉錄因子調控驗證，ceRNA研究等多種研究。熒光素酶實驗的實驗原理為了研究特定基因的轉錄調控元件，可以將這些元件插入到含有螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）的表達載體中，從而創建一個報告基因質粒。這使得所研究的序列能夠調節熒光素酶基因的表達。接著，通過將這個報告基因質粒轉入細胞，并對細胞施加不同的實驗處理，可以分析這些調控元件的功能。處理后，細胞被裂解，并加入熒光素底物（luciferin），此時熒光素酶能催化熒光素產生熒光（主峰波長約為560nm）。通過測量熒光強......閱讀全文
雙熒光素酶報告基因檢測（一）
雙熒光素酶實驗是廣大科研工作者經常會遇到的實驗。雙熒光素酶報告基因通常以螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）為報告基因，以海腎熒光素酶（Renilla luciferase）為內參基因。這樣構建的報告系統具備很多優勢，包括檢測靈敏度高、動態范圍廣、應用靈活等。同時雙熒光素酶實驗也有
雙熒光素酶報告基因檢測（二）
雙熒光素酶報告基因檢測（二）雙熒光素酶實驗通常被用來評估miRNA是否與其潛在的靶基因發生相互作用。實驗中，預測的miRNA靶標基因的3’-UTR序列被克隆到含有螢火蟲熒光素酶的報告基因載體的3’-UTR位置。如果miRNA與插入到質粒中的目標序列發生結合，miRNA將通過抑制該序列的翻譯來降低螢火
雙熒光素酶報告基因檢測（三）
雙熒光素酶報告基因檢測（三）螢火蟲熒光素酶片段互補成像（LCI）技術是一種新興的蛋白質相互作用研究方法，其中兩個被研究的目標蛋白質分別與螢火蟲熒光素酶的N端和C端相連。當這兩個蛋白質發生相互作用時，熒光素酶的兩個段落會接近并組合成一個活性酶。結合煙草瞬時表達系統的LCI技術，能夠在植物細胞內進行實時
雙熒光素酶報告基因測試
在用螢火蟲熒光素酶定量基因表達時 ，通常采用第二個報告基因來減少實驗的變化因素。但傳統的共報告基因（比如CAT，β-Gal，GUS）不夠便利。因為各自的測試化學，處理要求，檢測特點存在差異。Promega提供一種先進的雙報告基因技術，結合了螢火蟲熒光素酶測試和海洋腔腸熒光素酶測試。雙熒光素酶報告基因
雙熒光素酶報告基因實驗原理
雙熒光素酶報告基因實驗原理具體如下：雙熒光素酶報告基因實驗原理是利用雙熒光素酶作為熒光素酶的標記來研究基因表達與調控的機制。雙熒光素酶報告基因實驗是一種基因表達定量分析技術，通過將雙熒光素酶Luciferase作為報告基因插入到需要研究的靶基因啟動子區域或轉錄后區域，使其與靶基因協同表達。當熒光素基
雙熒光素酶報告基因檢測實驗技術服務
1、? 實驗簡介Luciferase報告基因系統是以 熒光素(luciferin) 為底物來檢測 螢火蟲熒光素酶 (fireflyluciferase)活性的實驗。熒光素底物會在熒光素酶作用下會發光（波長540-600nm），且光強能反應熒光素酶的表達量。熒光素酶的蛋白表達量與啟動子活性、mRNA的
雙熒光素酶報告基因檢測實驗技術服務
1、? 實驗簡介Luciferase報告基因系統是以 熒光素(luciferin) 為底物來檢測 螢火蟲熒光素酶 (fireflyluciferase)活性的實驗。熒光素底物會在熒光素酶作用下會發光（波長540-600nm），且光強能反應熒光素酶的表達量。熒光素酶的蛋白表達量與啟動子活性、mRNA的
雙螢光素酶報告基因檢測
螢光素酶報告基因系統廣泛應用于真核生物基因表達和細胞生理學研究，包括受體活性、轉錄因子、細胞信號轉導、mRNA加工和蛋白質折疊等。螢光素酶是理想的報告基因，因為哺乳動物細胞中不含內源性螢光素酶，一旦轉錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶。單螢光素酶報告基因實驗往往會受到各種實驗條件的影響，而雙螢光素
怎樣檢測雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。
怎樣檢測雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用
怎么使用多功能酶標儀檢測雙熒光素酶報告基因
以Promega公司雙熒光素酶檢測試劑盒為例：1. 試劑準備按照說明書配制PLB細胞裂解液、LAR II檢測液、Stop&Glo檢測液。2.儀器準備準備單管或微孔板發光檢測儀3. 樣品準備按照說明書使用PLB細胞裂解液裂解細胞，取20ul細胞裂解液4. 檢測過程a) 在1.5ml離心管中加入20ul
熒光素酶報告基因檢測的操作步驟
熒光素酶檢測系統，可用裂解液來溫和而快速地提取真核細胞中的熒光素酶，用其底物來檢測熒光素酶活性。檢測步驟如下：1.?加裂解緩沖液裂解轉染的細胞。2.?將上述裂解物轉移入微孔板或者試管中（根據檢測的需要選擇所用器材類型）。3.?加入含有所有酶反應成分（必須包括底物熒光素），使化學發光反應開始。4.?使
雙熒光素酶報告基因一定要在工具細胞上做嗎
報告基因檢測被廣泛應用于研究基因表達及外部刺激下原核和真核細胞的反應。Luciferase報告基因系統是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統。可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。但是報告基因實驗中往往會受到各種實驗條件的影響
雙熒光素酶報告基因實驗中的質粒怎么找
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。是檢測啟動子的熒光報告載體，當然是將miR的啟動子序列構建
熒光素酶報告基因用品的選擇與應用（一）
? ? ? ?一 、什么是熒光素酶報告基因？?? ? ? ?報告基因（Reporter Gene）：通常指可編碼某種蛋白或酶，其表達產物容易被檢測，并且能與內源性背景蛋白相區別的基因，通過它的表達產物來標定目的基因的表達調控。??? ? ? ?而理想的報告基因必須具備以下幾個條件：?? ? ? ?1
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的技術流程
啟動子的預測轉錄因子的預測報告基因質粒的構建實驗方法及結果分析?用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。擴增轉錄因子質
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的技術流程
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。（4） 擴增轉錄因子質粒，提純備用。同時準備相應的空載質粒
熒光素酶報告基因的技術流程
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。（4） 擴增轉錄因子質粒，提純備用。同時準備相應的空載質粒
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的技術流程
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。（4） 擴增轉錄因子質粒，提純備用。同時準備相應的空載質粒
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的技術流程
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。（4） 擴增轉錄因子質粒，提純備用。同時準備相應的空載質粒