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如同我們利用碎紙機來銷毀不再有用或是包含潛在破壞性信息的文件一樣，細胞利用分子機器來降解不需要或有缺陷的大分子。來自馬克思普朗克生物化學研究所的科學家們現在解碼了在降解核糖核酸(RNA)過程中起至關重要作用的一個蛋白質復合物(Ski復合物)的結構。這項研究發表在8月15日的《細胞》(Cell)雜志上。 RNA是細胞中廣泛存在、含量豐富的一類分子，它能夠發揮多種功能，例如可將基因組的信息翻譯為蛋白質。“我們所研究的Ski復合物負責將RNA分子提供給降解機器，”馬克思普朗克生物化學研究所科學家Felix Halbach說。 在RNA分子合成過程中發生任何的錯誤，或是不必要的RNAs累積對于細胞都是有害的。因此清除有缺陷或是不再需要的RNAs是細胞代謝的一個關鍵步驟。稱作為外來體(Exosome)的蛋白質復合物負責執行這一任務。外來體是Elena Conti領導的結構細胞生物學系的研究項目之一。然而研究人員對于......閱讀全文
2013年12月15日，清華大學生命科學學院王宏偉教授課題組在《Nature》子刊《Nature Structural and Molecular Biology》在線發表題為“Visualization of Distinct Substrate Recruitment Pathways
本期專文要來跟大家討論的話題是核糖核酸(RNA)的萃取，看到這里各位心中可能已經起了疑問: RNA 萃取不是很簡單嗎?只要照著標準步驟操作，加一加試劑就完成了，有必要大費周章特地開篇幅來談這件事嗎?其實越簡單的東西遇到困難時就越難解，各位看倌就請耐著性子，聽我們娓娓道來。 Lab 的經驗和
本期專文要來跟大家討論的話題是核糖核酸(RNA)的萃取，看到這里各位心中可能已經起了疑問: RNA 萃取不是很簡單嗎?只要照著標準步驟操作，加一加試劑就完成了，有必要大費周章特地開篇幅來談這件事嗎?其實越簡單的東西遇到困難時就越難解，各位看倌就請耐著性子，聽我們娓娓道來。 Lab 的經驗和
生物谷： RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。 3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存
從臨床樣本出發進行芯片、測序等高通量生物學研究是最常用的思路，但樣本采集過程受制于病理特征、病例數量等因素，耗時費力。無數期盼等來了期待中的臨床樣本，做個RNA抽提還常常……降解樣本的RNA完整度低，長鏈RNA變成了短鏈，在常規的擴增過程中會發生探針檢測的目的片段的丟失，導致芯片結果的不準確。遇到R
（四）核酸的濃縮、沉淀與洗滌隨著核酸提取試劑的逐步加入，以及去除污染物過程中核酸分子不可避免的丟失，樣品中核酸的濃度會逐漸下降，及至影響到后面的實驗操作或不能滿足后繼研究與應用的需要時，需要對核酸進行濃縮。沉淀是核酸濃縮最常用的方法，其優點在于核酸沉淀后，可以很容易地改變溶解緩沖液和調整核酸溶液至所
1. cDNA產量的很低可能的原因：*RNA模板質量低*對mRNA濃度估計過高*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足*同位素磷32過期*反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺*最常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系*與反
PCR儀常見問題及回答1. cDNA產量的很低可能的原因：＊RNA模板質量低＊對mRNA濃度估計過高＊反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足＊同位素磷32過期＊反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺＊zui常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是R
2.3 RT-PCR的引物設計 RT-PCR引物設計和一般PCR引物設計可以遵循同樣的原則。細心地進行引物設計是PCR中最重要的一步。理想的引物對只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火。設計糟糕的引物可能會同擴增其他的非目的序列。設計理想的引物都有以下共同的特點，而設計失敗的引物則各有各的缺
二、Generacer如何針對Generacer試劑盒設計基因特異性引物（GSP）？使用5’或3’RACE試劑都需要至少一條基因特異性引物，您在設計引物時需要注意以下幾點要求：*50-70％的GC含量，以提高引物熔點（Tm）*23-28個堿基長度，以提高引物特異性*降低3’端GC含量，將引物非特異性
1. cDNA產量的很低可能的原因：＊RNA模板質量低＊對mRNA濃度估計過高＊反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足＊同位素磷32過期＊反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺＊zui常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系＊
CRISPR-Cas9系統使用一段引導RNA（其與Cas9蛋白結合起來才能發揮作用）來靶定一段DNA，并裂解雙鏈DNA。這一現象提出了一個問題：由一個Dicer結合RNA元件和一段反義RNA組成的一種人造小RNA（asRNA，是否也能用來誘導Dicer處理和降解一段特定的RNA呢？ 為此，5月
1. cDNA產量的很低可能的原因：*RNA模板質量低*對mRNA濃度估計過高*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足*同位素磷32過期*反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺*最常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系*與反
第一部分 RNA 提取策略1、RNA降解的原因內源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因，因為人體細胞自身就是幾十分鐘（20min？）mRNA被降解一輪，所以不管是組織還是細胞還是液體狀樣本在離開其中細胞的最佳生活狀態后都應該盡快的被妥善的方法保存起來。外源性RNA酶也是一個需要注意的因素，最常
[實驗原理]RNA是一類極易降解的分子，要得到完整的RNA必須最大限度地抑制提取過程中內源性及外源性核糖核酸酶對RNA的降解。本實驗以小麥為材料，采用異硫氰酸胍—苯酚—氯仿抽提法或CTAB法提取總RNA。異硫氰酸胍是高濃度變性劑，可溶解蛋白質，破壞細胞結構，使蛋白質與核酸分離，失活RNA
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
第一節 概 述 從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了解轉錄后加工
血液采集： PAXgene系統提供標準化的BD Vacutainer（真空采血管，室溫保存），配合使用一次性消毒采血針作靜脈穿刺，采血管內的負壓會迫使血液自動吸入管中，當搜集的血液達到2.5毫升刻度線時停止采血。采血管中本身已經預裝了6.9毫升的RNA穩定試劑，拔
密歇根大學綜合癌癥中心的研究人員開發了一項新技術，可更好地了解癌細胞與正常細胞中RNA有可能存在差異的原因，并將推動更深入地了解腫瘤全基因組測序檢測。研究人員將這一成果發布在《美國科學院院刊》(PNAS)雜志上。 當研究人員測序癌細胞的RNA時，他們可以將之與正常細胞進行比較，看看哪里存在
（二）TRIzol試劑提取RNA1.取新鮮動物組織0.1～0.2g置于組織勻漿器中，加入預冷的Trizol液 1ml 于玻璃勻漿器中，在冰浴中迅速勻漿15～30s，以充分研碎組織。然后將細胞懸浮液吸入另一1.5ml Ep管中，于室溫下靜置5min。2.加入200μl氯仿，劇烈振搖15s混勻后，室溫靜
細菌和古菌中的CRISPR-Cas系統可以特異性識別并降解外源入侵的基因，目前有的系統已開發為最為前沿的基因編輯工具。根據干擾機制的不同，CRISPR-Cas系統主要被分為六種類型。目前，人們對I、II、V和VI型CRISPR-Cas系統的結構和功能研究的較為詳盡，而對其他類型的結構與功能了解相
提 要: 目的 建立一種快速鑒定RNA 完整性的方法。方法 在常規瓊脂糖凝膠電泳的基礎上,結合甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳加以改進而成。結果 提取的總RNA 用此方法電泳后可得到28S、18S、5. 8S(5S) 三條清晰的rRNA 條帶。結論 此方法可以達到對RNA 完整性進行快速鑒定的目的。
細菌和古菌中的CRISPR-Cas系統可以特異性識別并降解外源入侵的基因，目前有的系統已開發為最為前沿的基因編輯工具。根據干擾機制的不同，CRISPR-Cas系統主要被分為六種類型。目前，人們對I、II、V和VI型CRISPR-Cas系統的結構和功能研究的較為詳盡，而對其他類型的結構與功能了解
(四)擴增產物分析區下述操作在本區內進行：擴增片段的測定。核酸擴增后產物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板上探針雜交方法(同位素標記或非同位素標記)、瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、Southern轉移、核酸測序方法等。目前國內的商品試劑盒絕大部分均采用非同位素標記的微孔板上探針雜交方法，即PC
構建全長cDNA文庫分為噬菌體文庫和質粒文庫，二者大同小異。無論怎樣，應當注意如下幾個方面： 一、保證獲得數量足夠的高質量的起始RNA。構建cDNA文庫要求的RNA量比做RACE和Northern blot的要多，在材料允許的情況下一般的試劑盒均推薦采用純化總mRNA后進行反轉錄，這比直接
cDNA文庫構建可以：（1）用于分離全長基因進而開展基因功能研究；（2）篩選目的基因并直接用于表達；（3）提供構建分子標記連鎖圖譜的所用探針。實驗方法原理cDNA 文庫是指某生物某發育時期所轉錄的全部 mRNA 經反轉錄形成的 cDNA 片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。經典 cDNA 文庫構建
cDNA文庫構建 實驗方法原理 cDNA 文庫是指某生物某發育時期所轉錄的全部 mRNA 經反轉
第一部分RNA 提取策略1、RNA降解的原因內源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因，因為人體細胞自身就是幾十分鐘（20min？）mRNA被降解一輪，所以不管是組織還是細胞還是液體狀樣本在離開其中細胞的最佳生活狀態后都應該盡快的被妥善的方法保存起來。外源性RNA酶也是一個需要注意的因素，最常見
從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了解轉錄后加工等一系列問題。總之
在所有RNA實驗中，最關鍵的因素是分離得到全長的RNA。而實驗失敗的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶廣泛存在而穩定，一般反應不需要輔助因子。因而RNA制劑中只要存在少量的RNA酶就會引起RNA在制備與分析過程中的降解，而所制備的RNA的純度和完整性又可直接影響RNA分析的結果，所