變性高效液相色譜分析巰嘌呤甲基轉移酶基因多態性位點

摘要:目的　應用變性高效液相色譜技術(DHPLC) 分析巰嘌呤甲基轉移酶(TPMT) 基因多態性位點。方法　用以PCR 為基礎的DHPLC ,檢測健康成人和臍血以及急性白血病病人,TPMT基因第5 外顯子G238C、第7 外顯子G460A 和第10 外顯子A719G的3 個多態性位點。結果　健康成人、臍血和急性白血病病人全部DNA 樣本,TPMT基因外顯子區的3 個位點的多態性頻率為3149 % ,遠低于白種人和非洲人。變異的位點僅為第10 外顯子A719G,且均為雜合變異。TPMT第5 外顯子630 例標本的色譜峰均為單峰。第7 外顯子有316 例為單峰,214(34 %) 為雜合峰。將單峰標本進行1∶1 混合后重新進樣也有雜合峰出現。經DNA 測序分析,證實此區無序列變異;雜合峰標本在54 和60 ℃為單峰,55～59 ℃均為雜合峰。而單峰標本峰形未隨溫度發生變化。說明DHPLC的檢測誤差并不是柱箱溫度不合適引起的。第10 外顯子有608 例為單峰,雜合峰為22 例,其中10/ 22 例標本進行DNA 直接測序,證實為雜合變異。結論　DHPLC技術能快速篩選出TPMT第5 和第10 外顯子區的多態性位點,但不能檢測出第7 外顯子的多態性位點。因此,DHPLC不能作為單一方法進行TPMT基因多態性位點的檢測。