異常白細胞顯微鏡檢查標準操作規程

1. 實驗原理
用瑞氏染色法，對制備好的血涂片進行染色，然后在顯微鏡下進行形態檢查。
2. 標本采集：
2.1 標本種類：新抽取的抗凝血或手指末梢血。
2.2 標本要求：
2.2.1抗凝劑采用EDTA K2抗凝。
2.2.2用手指末梢血作白細胞檢驗時，如手指有凍瘡，則主張采用耳垂血。
3. 標本儲存：取材后應立即推制成血涂片，并盡快送檢。
4.標本運輸：保持干燥，室溫運輸。
5. 標本拒收標準：污染，凝固標本不能作測定。
6. 實驗材料：
瑞氏血細胞染色液，生產廠家：（臺資）珠海貝索生物技術有限公司。
7. 實驗儀器：
7.1 儀器名稱：OLYMPUS 顯微鏡
7.2 儀器廠家：OLYMPUS
7.3 儀器型號：OLYMPUS CH30
8. 操作步驟
8.1  采血后推制厚薄適宜的的血膜片，血膜應呈舌狀，頭、體、尾清晰可分。
8.2  瑞氏染色：將制好的干燥血涂片平置于染色架上，滴加瑞氏染色液A液3-5滴使其迅速蓋滿血膜，然后加瑞氏染色B液3-5滴，輕輕搖動玻片或用洗耳球吹氣使A、B染液充分混勻，染色1-2分鐘（氣溫低或涂片較厚時可適當延長染色時間），用自來水檢驗地 帶網沖去染液，待干。
8.3  高倍鏡（必要時油鏡）觀察白細胞形態。
8. 結果判斷與分析
9.1 核象變化。
(1) 核左移：說明外周血中幼稚或桿狀核粒細胞增多，見于急性白血病，急性化膿性細菌感染，急性中毒，急性溶血。正常妊娠、缺氧及低血壓也可出現細胞核左移現象。
(2) 核右移：說明中性粒細胞核分葉過多，見于巨幼細胞性貧血，惡性貧血，化療及炎癥恢復期，遺傳性中性粒細胞分葉過多，尿毒癥等。巨多核中性粒細胞：成熟中性細胞胞體增大，核分葉過多，常為5-9葉，甚至12-15葉。各葉大小差別很大，常見于巨幼細胞性貧血。此外，在疾病進行期突然出現核右移，表示預后不良。
(3) 分葉過少：乳酸缺乏癥，假性pelger-huet異常等。
9.2 其他核異常
環形或面包圈型核：見于慢粒，慢性粒細胞白血病，骨髓異常增生綜合征等。中性粒細胞形態變化
9.3 中性粒細胞的毒性變化：
1） 細胞大小不均：為骨髓內幼稚粒細胞發生不規則的分裂增殖所致。
2） 中毒顆粒：比正常中性顆粒粗大，大小不等，分布不均勻，染色較深，呈黑色或紫黑色。有時顆粒很粗大，與嗜堿粒細胞易混淆；有時小而稀少，散雜在正常中性顆粒之中。
含中毒顆粒的中性粒細胞應與嗜堿粒細胞區別，其要點：嗜堿粒細胞核較少分葉、染色較淺、顆粒較大、大小不均、著色更深、細胞邊緣處常分布較多，可分布于核上，胞漿中常見小空泡。在血片染色偏堿或染色時間過長時，易將檢驗地 帶網中性顆粒誤認為中毒顆粒。但只要注意全片各種細胞的染色情況，則不難區別。
含中毒顆粒細胞在中性細胞中所占比值稱為毒性指數。毒性指數愈大，提示中毒變性結果。
3） 空泡：可為單個，但常為多個。大小不等，亦可在核中出現。被認為是細胞脂肪變性的結果。
4） Dohle體：是中性粒細胞胞漿內因毒性變而保留的嗜堿性區域。呈圓形、梨形或云霧狀。界限不清，染成灰藍色，直徑為1-2μm，是胞質局部不成熟，即核與胞質發育不平衡的表現。Dohle小體亦可見于單核細胞中，其意義相同。
5） 退行性變：常見者有胞體腫大、結構模糊、邊緣不清晰、核固縮、核腫脹和核溶解（染色質模糊、疏松）等等。如胞質破裂后消失，只剩胞膜，則成裸核或藍狀細胞，退行性變亦可見于衰老細胞，在正常情況下為數極少。