人類染色體核型分析

實驗概要

學習和掌握人類染色體核型分析的方法，進一步識別和鑒定人類染色體。

實驗原理

核型（karyotype）一詞在20世紀20年代首先由蘇聯學者T. A. Levzky等人提出。核型分析的發展有三項技術起了很重要的促進作用，一是1952年美籍華人細胞學家徐道覺發現的低滲處理技術，使中期細胞的染色體分散良好，便于觀察；二是秋水仙素的應用便于富集中期細胞分裂相；三是植物凝集素（PHA）刺激血淋巴細胞轉化、分裂，使以血培養方法觀察動物及人的染色體成為可能。
 

核型是指染色體組在有絲分裂中期的表型，包括染色體數目、大小、形態特征等。核型分析是對染色體進行測量計算的基礎上，進行分組、排隊、配對并進行形態分析的過程。核型分析對于探討人類遺傳病的機制、物種親緣關系與進化、遠緣雜種的鑒定等都有重要意義。將一個染色體組的全部染色體逐個按其特征描繪下來，再按長短、形態等特征排列起來的圖像稱為核型模式圖，它代表一個物種的核型模式。
 

1960年，丹佛會議上，提出了人類有絲分裂染色體命名標準體制草案，為以后的所有命名方法奠定了基礎。1963年，倫敦會議上，正式批準Patan 提出的A、B、C、D、E、F、G七個字母表示七組染色體的分類法。1966年，芝加哥會議上，提出人類染色體組和畸變速記符號的標準命名體制。
 

A組（1-3號）

1號：最大的中央著絲粒染色體，長臂靠近著絲粒外有次縊痕。

2號：最大的亞中著絲粒染色體。

3號：中央著絲粒染色體，比1號小三分之一。

B組（4-5號）：為較大的亞中央著絲粒染色體，二者不易區分。

C組（6-12號，X）：中等近中央著絲粒染色體，彼此難區分。

    6、7、9、11號：著絲粒略近中央。

    8、10、12號：偏離中央。

    9號：q有次縊痕。

    X位于6、7之間。

D組（13-15號）：中等近端著絲點染色體，p常有隨體。

E組（16-18號）

    16號：中等中央著絲粒染色體，q上有次縊痕。

    17號：較小，近中央著絲粒染色體。

    18號：較小，近中央著絲粒染色體，p比17號更短。

F組（19-20號）：小的中央著絲粒染色體，彼此不易區分。

G組（21-22號，Y）：小的近端著絲粒染色體。

    21、22號：p常有隨體，q常呈分枝狀彼此不易區分。

    Y：p無隨體，q通常平行靠近。

主要試劑

Geimsa染色液等。

主要設備

攝影顯微鏡，顯微測微尺，染色缸，吹風機等。

實驗材料

人外周血淋巴細胞染色體標本

實驗步驟

1、將人外周血淋巴細胞染色體標本放入染色缸，用Geimsa染色液染色10-15分鐘→在盛水塑料杯中沖涮→風干→鏡檢

觀察細胞的標準為：

（1）細胞完整，輪廓清晰，染色體分布在同一水平面上。

（2）染色體形態和分布良好。

（3）最好無重疊，即使有個別重疊，也要能明確辯認，以免差錯。

（4）所觀察的細胞處于同一有絲分裂階段，即染色體螺旋化程度或染色體長短大致一樣。

（5）在所觀察的細胞周圍，沒有離散的單個或多個染色體存在，以免影響計數。

2、顯微攝影：將制好的片子放在數碼攝影顯微鏡下進行拍攝，以供分析。
 

3、核型分析

核型：一個細胞內所有染色體按一定順序排列起來，代表著某一個體所有細胞的染色體組成，包括數目、形態、大小等，分為A、B、C、D、E、F、G等七組和一組性染色體。

組型：把核型按模式圖的形式表現出來，代表一個種的染色體組成。
 

4、完成染色體組型分析。

注意事項

顯微照片分析：

染色體計數；染色體測量；

相對長度=單個染色體長度/ 整套單倍染色體總長×100

臂比率=q/p

著絲點指數=p/(p q) ×100