血細胞標本提取及檢驗

劉惠，王秀娟  中華醫學研究雜志 2006年1月 第6卷 第1期

　　影響血常規檢驗結果的因素很多，下面對標本的采集、稀釋、儲存做一介紹。

　　1  標本的采集

　　為了取得準確、可靠的檢驗結果，必須取得高質量的標本。高質量的標本是高質量檢驗的第一步。保證血液標本中各項細胞的完整形態是作為血常規檢驗高質量的標本的最基本的要求。血液細胞檢驗標本的制備分為采集和抗凝2個步驟。

　　1.1  標本的采集  按采血部位的不同，取得血常規檢驗標本，最常用的途徑是靜脈采血和末梢毛細血管采血。靜脈血血樣是最可靠的標本，手指血是末梢毛細血管血樣中與靜脈血差異最小且較為穩定的血樣。與靜脈血相比，手指血的準確性和可重復性仍然較差：白細胞計數明顯高（+8%）而血小板計數明顯低（-9%）。因此，絕大多數專家建議：血常規檢驗特別是應用血液分析儀時，應使用靜脈血。

　　1.2  標本的抗凝  用于血常規檢驗的血樣必須經抗凝劑抗凝處理，在目前的眾多抗凝劑中，EDTA鹽（EDTA-Na2，EDTA-K2，EDTA-K3）是對白細胞形態和血小板影響相對較小的抗凝劑，最適合用于血常規檢驗。除采血因素的影響（生理性因素、采血部位等）外，多數情況下，血樣的質量取決于血液和抗凝劑的比例。血液比例過高時，由于抗凝劑相對不足，血漿中出現微凝血塊的可能性增加，在用于血細胞分析儀時，微凝血塊可能阻塞儀器，同時影響一些檢驗指標。血液比例過低，抗凝劑相對過剩，對檢驗指標會造成嚴重影響。血液經EDTA抗凝后，白細胞的形態會發生改變，這種改變和時間及EDTA濃度有關。EDTA的最佳濃度（與血液比）為1.5mg/ml，如果血樣少，EDTA的濃度達到2.5mg/ml，中性粒細胞腫脹、分葉消失，血小板腫脹、崩解、產生正常血小板大小的碎片，這些改變都會使血常規檢驗和血細胞計數得出錯誤結果。

　　靜脈血和末梢血均可經抗凝劑抗凝成全血標本（標本中不含稀釋液，或對標本造成的稀釋的影響極小），顯而易見，末梢血抗凝標本要達到合適的血液和抗凝劑的比例是非常困難的。因此，在制備全血標本時，應使用定量的含EDTA鹽的真空采血管采集靜脈血。由于絕大多數的對標本稀釋的稀釋液中含有抗凝劑，在一定量的稀釋液中可直接加入微量靜脈血或末梢血液（10～40μl）即可制備成通常所說的預稀釋標本。多數情況下，預稀釋標本的制備適用于末梢血的血樣。

　　2  標本的稀釋
　　
　　血液是由血細胞和血漿兩部分組成的紅色粘稠混懸液。在進行血細胞檢驗計數時，直接用血液計數是困難的，無論是傳統的鏡檢還是使用其他先進儀器，血液都需要準確的稀釋后才能進行血細胞的檢驗計數。所以，稀釋倍數和計數容量是最重要的設計指標之一。
　
　　我們在檢驗中將血液稀釋于稀釋液中形成稀釋標本（稀釋比為1：N），以流動檢測的方式測出一定量（V）的稀釋標本內的血細胞數（T），經換算后得出血液中的細胞濃度（L）：L-T×N/V。
　　
　　由此可見，準確合理的稀釋倍數（在用于儀器時，RBC、PLT的稀釋倍數一般為1：10000～1：30000；WBC、HGB的稀釋倍數一般為1：250左右）和準確、穩定的測量容量是血細胞檢測的又一重要基礎。稀釋倍數過低，會形成細胞排隊通過傳感器的重合缺損；稀釋倍數過大，則會造成一定測量容量內血細胞的數量過少，這都會嚴重影響血液細胞檢驗的測量精度。

　　3  標本的儲存
　
　　抗凝劑因時間和濃度的不同，會造成對血細胞形態的影響。用EDTA抗凝靜脈血標本，在標本收集后的5min內或30min后，8h內（室溫）檢測，可以得到最佳的檢測結果。如果不需要血小板和白細胞分類的準確數據，則標本可以在2℃～8℃的條件下存放至24h。
　　
　　預稀釋標本一般需要在標本制備后10min內予以測量；如果稀釋液中添加細胞穩定劑，預稀釋標本的存放時間也不可超過4h。
　　
　　影響血常規檢驗結果的因素很多，要想取得準確的檢驗數據，就要在實驗的每一個步驟中都嚴格按照操作規程進行。

　　(編輯：悅  銘)

　　作者單位：253300 山東德州，德州市武城縣計劃生育技術服務站