從大鼠肝臟中分離高爾基復合體
從培養的哺乳動物細胞中分離高爾基體
從植物組織中分離高爾基體
| 實驗材料 | 雄大鼠 |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | 勻漿緩沖液 |
| 儀器、耗材 | Polytron 勻漿器 |
| 實驗步驟 | 1. 將按要求進用標準食物和飲水的雄大鼠（約 250 g) ，用斷頭和放血的方法處死。 2. 切下肝臟（10~13 g ) 并用刀片切碎。 3. 用一只 Polytron 勻漿器（20 ST 或 10 ST；Brinkman lnslruments) 以 10000 r/min 的頻率將每份肝臟在 2 倍體積的勻漿介質中處理 40 秒鐘。 勻漿緩沖液： 50 mmol/L Tris -馬來酸（Tris-maleate)，pH 6.4 0.5 mol/L 蔗糖 1% 葡聚糖（Sigma，平均分子量 225000） 4. 將勻漿液于 5000 g 離心 15 分鐘，去除大部分上淸，用一只裝有橡膠球的大孔巴斯德吸管（內徑約 1 mm ) 將沉淀中黃褐色的部分（上部 1/3 ) 重懸于少量的上清中。 5. 用吸管將懸液吹吸大約 12 次使之混勻，將懸液鋪在 1.2 mol/L 蔗糖之上。  6. 在一只吊籃式轉頭（Spinco SW50.1 ) 中將管子于 100000 g 離心 30 分鐘。 7. 用一只巴斯德吸管將上清吸出，然后用一只裝有橡膠氣球的巴斯德吸管將高爾基體的 “毯子”從 1.2 mol/L 蔗糖層上挑起。 8. 將這部分高爾基體懸于以下中的一種： (1) 來自蔗糖梯度的清亮上清，適于最佳形態的保持。 (2) 蒸餾水用于達到最高的分部純度。 (3) 勻漿介質或酶分析混合液（cocktail) 用于保持酶的活性。 9. 以 5000 g 離心 15~20 分鐘收集高爾基體。 |
7月13日，中國農業科學院植物保護研究所作物有害生物功能基因組研究創新團隊與中國科學院上海植物逆境生物學研究中心合作，在《自然—通訊》（NatureCommunications）上發表了題為“Gemi......
近日，中國科學院上海營養與健康研究所研究員陳雁研究組在MolecularMetabolism和Immunology上分別發表文章，揭示出位于細胞器高爾基體的膜蛋白PAQR11在脂肪代謝和免疫調節中發揮......
神經發育對神經元網絡的形成和正常腦功能至關重要。中國科學院遺傳與發育生物學研究所許執恒研究組先前的研究表明，cTAGE5/MEA6在肝臟中參與調控極低密度脂蛋白從內質網到高爾基體的運輸過程及分泌（Ce......
100多年前，意大利細胞學家CamilloGolgi在小腦浦肯野（Purkinje）細胞中發現高爾基體，現已證明高爾基體是細胞分泌途徑的核心細胞器。近年來發現高爾基體的結構紊亂廣泛存在于神經退行性疾病......
100多年前，意大利細胞學家CamilloGolgi在小腦浦肯野（Purkinje）細胞中發現高爾基體，現已證明高爾基體是細胞分泌途徑的核心細胞器。近年來發現高爾基體的結構紊亂廣泛存在于神經退行性疾病......
來自復旦大學、美國國立衛生研究所（NIH）的研究人員證實，GOLM1調節EGFR/RTK回收驅動了肝細胞癌轉移。這一研究發現發布在8月25日的《癌細胞》（CancerCell）雜志上。復旦大學973首......
7月22日，國際學術期刊《PLOSGenetics》在線刊登了南京農業大學和香港中文大學的一項最新研究成果，題為“ArabidopsisCOGComplexSubunitsCOG3andCOG8Mod......
2月1日，國際學術期刊EMBOJournal（《歐洲分子生物學學會會刊》）在線發表了中國科學院上海生命科學研究院營養科學研究所陳雁研究組的最新研究成果PAQR3controlsautophagybyi......
加州大學的科學家們在研究DNA損傷對高爾基體的影響時，發現了DNA損傷激活的新通路，這一通路影響著機體中細胞對化療的應答。包括化療和放療在內的標準癌癥治療策略，通過誘導細胞出現DNA損傷起作用。DNA......
來自美國南加州大學的分子微生物學家們發現了細胞中的一些錯綜復雜的調控機制，其有可能促使開發出治療癌癥和其他疾病的新療法。他們的研究結果發表在《自然細胞生物學》(NatureCellBiology)雜志......