淋巴細胞轉化試驗方法

發布時間：2020-04-20 23:08 原文鏈接：淋巴細胞轉化試驗方法

T細胞在體外培養時，受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)或特異性抗原刺激后，可出現代謝旺盛、蛋白質和核酸合成增加、細胞體積增大并能進行分裂的淋巴母細胞，此稱為淋巴細胞轉化現象。淋巴細胞轉化率的高低，可以反映機體的細胞免疫水平，因此，可作為測定機體免疫功能的指標之一。

本實驗采用形態學方法進行淋巴細胞轉化試驗。T淋巴細胞在體外培養過程中受有絲分裂原如植物血凝素刺激后，轉化為體積較大的母細胞，胞漿增多而深染，核增大并可見核仁裂，計數轉化細胞的百分率可反映機體的細胞免疫功能。

【材料】

1．RPMLl640培養液(用前調至含小牛血清10％、青霉素100u／m1、鏈霉素μg/m1，用NaHCO3調pH至7.2-7.4)。

2．PHA(用RPMIl 640基礎培養液配成1000μg／m1)。

3．吉姆薩染液。

4．離心機、恒溫箱、計數器及顯微鏡等。

【方法】

2. 2500r／min，離心10min后棄上清液，留0.2m1沉淀細胞制片，迅速吹干。

3. 吉姆薩染色10一20min，水洗，干燥。

4. 油鏡計數200個淋巴細胞中轉化的細胞數，計算轉化率。

【結果觀察】

1．淋巴母細胞的形態學標準是細胞核的大小、核與胞漿的比例、胞漿染色性及核的構造與核仁的有無。可以見到以下幾種類型細胞。

(1)成熟的小淋巴細胞：與未經培養的小淋巴細胞一樣為6-8μm，核染色致密，無核仁，核與胞漿比例大，胞漿染色為輕度嗜堿性。

(2)過渡型淋巴細胞：比小淋巴細胞大，約l0-20μm，核染色致密，但出現核仁，此為與成熟小淋巴細胞鑒別要點。

(3)淋巴母細胞：細胞體積增大，約20-30μm，形態不整齊，常有小突出，核質染色疏松，有核仁l-2個，胞漿變寬，常出現胞漿空泡。

(4)其它細胞：如中性粒細胞在培養72h后，絕大部分衰變或死亡，呈碎片。

2．淋巴細胞轉化率的計算：按上述分類檢查推片頭、體、尾三部分，計數200個淋巴細胞，計算過度型和淋巴母細胞百分率。在正常情況下，PHA誘導的淋巴細胞轉化率為60％一80％，如為50％一60％則偏低，50％以下則為降低。

【注意事項】

1．培養基成分對轉化率影響較大，注意其有效期。

2．小牛血清用前需滅活。

3．培養時要保證有足夠的氣體。

4．PHA劑量過大對細胞有毒性，PHA轉化反應劑量一般10m1，培養瓶內液體總量不要超過2m1，太小不足以刺激淋巴細胞轉化，試驗前應先測定。