活性氧(ROS)是含氧的化學反應性化學物質。實例包括過氧化物,超氧化物,羥基自由基,單線態氧,和α-氧。在生物學背景下,ROS形成為氧的正常代謝的天然副產物,并且在細胞信號傳導和體內平衡中具有重要作用。然而,在環境壓力(例如,紫外線或熱暴露)期間,ROS水平會急劇增加。這可能會對細胞結構造成嚴重損害,這被稱為氧化應激。ROS的產生受植物中應激因子反應的強烈影響,這些增加ROS產生的因素包括干旱,鹽度,寒冷,營養缺乏,金屬毒性和UV-B輻射。ROS也由外源性源如電離輻射產生。
在生物系統中,游離活性氧星很低,因此測定時需要靈敏的方法如脈沖射解、電子自旋共振等技術,但儀器較昂貴。由線粒體產生的H2O2,存在時間較長,能使DCFH探針的熒光物被氧化成DCF(二氯熒光素雙乙酸鹽),DCF可被酯酶裂解成二氯熒光素,以二氯熒光素為基礎的熒光法,可檢測H2O2、O2-和OH-,這種方法較簡單,但特異性較低。以亞鐵血紅素過氧化物酶/辣根過氧化物酶催化H2O2氧化熒光物、產生熒光素的熒光法,特異性和靈敏度較高;通過測定活性氧損傷的產物如脂質過氧化物(oxLDL)和DNA損傷產物(8-羥基鳥嘌呤)等,可間接反映活性氧產量。不成對電子使H2O2,等帶有順磁共振特性,可被EPR光譜法測量,但需要特殊的設備。使用氧化還原反應中分子間能量轉移,使發光氨還原后可與O2-,反應產生產物并發光,這種方法非常靈敏,已經用于測定完整細胞、單獨的線粒體及線粒體亞顆粒中的O2-含量。
線粒體是過量的活性氧主要的促調亡靶,可誘導線粒體雙層膜通透孔(PT孔)開放,釋放鈣離子、細胞色素C、凋亡誘導因子AIF,引起胱冬蛋白酶caspase9激活caspase3/6/7;可使線粒體電子傳遞鏈解耦聯,下調ATP產生水平,上調促凋亡蛋白Bax的表達水平,最后使線粒體外膜破裂,導致細胞凋亡。
線粒體雙層膜通透孔有2個氧化敏感位點:一個位點有吡啶核苷酸結合基序,可結合NAD/NADH和NADP+/NADPH;另一個位點有谷胱甘肽結合基序,可結合谷胱甘肽。活性氧能使線粒體雙層膜通透孔結合的NADH,NADPH、谷胱甘肽氧化,促使線粒體雙層膜通透孔開放。活性氧增加既是線粒體雙層膜通透孔開放的原因,也是其結果。高水平腫瘤壞死因子TNF-a/MLR可上調活性氧的產生水平。高水平活性氧也可刺激死亡受體通路,引起細胞凋亡。過量的活性氧也可誘導線粒體外膜孔開放,釋放鈣離了、細胞色素C、凋亡誘導因了AIF,引起細胞凋亡。
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