一代測序和二代測序的區別

一、含義不同：

第一代測序：指雙脫氧末端終止法，擴增后通過毛細管電泳讀取序列，每次獲取數據量少。

第二代測序：為高通量測序，采用微珠或高密度芯片邊合成邊測序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次獲得數G數據，相對與第三代，都仍然需要擴增的方法放大信號，擴增后再檢測。

二、作用不同：

Sanger法測序利用一種DNA聚合酶來延伸結合在待定序列模板上的引物。直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。

普通的二代測序，全基因組或外顯子組測序是將DNA分成小片段，然后對各個片段多次讀取（一般是三十次）。然而，如果突變只發生在15-20%的細胞中，三十次讀取還不足以可靠地捕捉到它們，尤其是當突變只影響一個基因拷貝時。

測序程序

在4只試管中加入適當的引物、模板、4種dNTP（包括放射性標記的dNTP，例如32PdNTP和DNA聚合酶（如以RNA為模板，則用反轉錄酶），再在上述4只管中分別加入一種一定濃度的ddNTP（雙脫氧核苷酸）。

與單鏈模板（如以雙鏈作模板，要作變性處理）結合的引物，在DNA聚合酶作用下從5’端向3’端進行延伸反應，32P隨著引物延長摻入到新合成鏈中。當ddNTP摻入時，由于它在3’位置沒有羥基，故不與下一個dNTP結合，從而使鏈延伸終止。ddNTP在不同位置摻入，因而產生一系列不同長度的新的DNA鏈。