通過調控免疫檢查點重塑腫瘤局部免疫微環境

　　腫瘤細胞通過誘導免疫檢查點的異常表達逃避免疫細胞攻擊。靶向T細胞免疫檢查點PD1/PDL1的免疫療法可恢復CD8+T細胞功能，成為當前最受期待的有可能治愈惡性腫瘤的方法，但大部分患者因為原發或繼發耐藥導致腫瘤侵襲進展，免疫治療耐藥原因的探究成為當前研究的熱點。

　　既往研究表明免疫微環境中的免疫細胞表型是預測其臨床反應的重要生物標記物，T細胞除了被PD1/PDL1抑制外，還受交替極化的M2樣腫瘤相關巨噬細胞 (TAMs) 的抑制。通常，經典激活的促免疫巨噬細胞（M1）和替代激活的抑制免疫巨噬細胞（M2）是由輔助T細胞的細胞因子庫驅動的巨噬細胞極化的兩種不同狀態。M1巨噬細胞產生促炎和免疫刺激性細胞因子，如白介素IL-12、TNF-α等，參與輔助T細胞（Th1）對感染及腫瘤的免疫反應。而腫瘤相關的巨噬細胞（TAMs）更類似于M2極化的巨噬細胞，在侵襲性癌癥中可能占腫瘤總量的50%，可通過生成包括但不僅限于TGF-β、IL-10、VEGF、CCL2、CXCL12、CXCR4、MMPs等多種生長因子、細胞因子，重塑細胞外基質，從而調節腫瘤生長、遷移以及血管生成。

　　CD47被認為是巨噬細胞的免疫檢查點，已經證實的兩個主要配體是信號調節蛋白α（Sirpα）和血栓反應蛋白-1 (TSP-1)，兩者的結合可抑制巨噬細胞的吞噬功能。CD47廣泛存在于各種類型的腫瘤細胞中，使其可能成為廣泛適用的靶標，目前靶向CD47活化巨噬細胞吞噬作用的研究很多，但對其在TAMs向M2極化中的作用和機制知之甚少。

　　2021年5月21日，美國肯塔基州路易維爾大學腫瘤中心Douglas C. Dean教授及其團隊在Science Advances雜志上發表文章（第一作者是山東第一醫科大學第一附屬醫院郭燕醫生），題為：Zeb1 induces immune checkpoints to form an immunosuppressive envelope around invading cancer cells。研究發現，Zeb1誘導侵襲性肺腺癌細胞中PDL1和CD47的表達，CD47驅動相鄰TAMs的M2極化,進一步抑制了T細胞的功能，因此在侵襲性腫瘤細胞周圍塑造了免疫抑制微環境，促使腫瘤細胞的免疫逃逸，亦有可能是T細胞免疫檢查點抑制劑耐藥的原因。

　　惡性腫瘤侵襲依賴于轉錄因子Zeb1驅動的上皮間質轉化（EMT），且EMT的發生與免疫治療耐藥相關，這提示侵襲前沿的癌細胞是免疫治療的靶標，但尚未有研究去證實，也不清楚侵襲前沿EMT的發生是否與TAMs的M2替代極化有關。鑒于上述原因，此研究在K-Ras驅動的肺腺癌（AC）追蹤了Zeb1與免疫檢查點和腫瘤微環境中免疫細胞浸潤的關系，尤其是對比分析了K-Ras突變合并Zeb1單基因缺失形成的肺腺瘤小鼠模型中的免疫檢查點表達和免疫細胞浸潤情況。結果表明Zeb1的表達誘導EMT發生的同時，在侵襲前沿誘導腫瘤細胞高表達免疫檢查點CD47、PDL1，經CHIP實驗表明Zeb1基因與PDL1和CD47均存在相互結合的序列基礎，證實了Zeb1靶向調控PDL1、CD47的表達（圖1）。

　   圖1：Zeb1調控免疫檢查點PDL1、CD47的表達

　　進一步免疫熒光檢測到腫瘤侵襲前沿，Zeb1高表達的局部CD47與M2樣TAMs空間上共定位，且體外細胞培養中應用CD47抗體可抑制巨噬細胞的M2極化，提示CD47的高表達導致TAMs向M2極化，伴有CD8+T細胞局部缺失共同造成了局部免疫抑制性微環境（圖2）。同時研究中還檢測到侵襲前沿微環境中的巨噬細胞表達PDL1，進一步抑制了局部的T細胞。

　　圖2：CD47與M2巨噬細胞空間上共定位

　　綜上，此研究結果強調了侵襲前沿的癌細胞可能是免疫檢查點治療的靶標， Zeb1誘導的免疫檢查點PDL1和CD47，其在侵襲前沿的表達可能預測患者對免疫治療的反應，為PD1/PDL1耐藥患者尋找替代或聯合治療靶點提供理論依據。