氯霉素乙酰基轉移酶(CAT)測定
試劑、試劑盒 Tris-緩沖液 Tris 三硝基甲苯(Triton) CAT 稀釋緩沖液CAT 酶標準物閃爍液 聚丙烯閃爍杯儀器、耗材 微量離心管微量離心機實驗步驟 一、材料滅菌物品1. D-PBSA2. 多孔培養板:6 孔,35 mm非消毒物品1. Tris-緩沖液:Tris-HCl,0.1mol/L,pH8.02. Tris/三硝基甲苯(Triton):Tris-HCl,0.1mol/L,pH8.0,0.1%TritonX-100,4℃ 儲存3. CAT 稀釋緩沖液:Tris-HCl,0.1mol/L,pH8.0,50% 甘油,0.2%BSA4. 底物:含 250 mmol/L 氯霉素(GIBCO)的 100% 甲醇;分裝,-70℃ 儲存5. 14C-CoA:14C-丁酸輔酶 A(10μCi/mL;AmershamPharmacia)6. CAT 酶標準物:制備含 0.2、1.0、2.0、4.0、10U/mL 標準液的 CA......閱讀全文
氯霉素乙酰基轉移酶(CAT)測定
試劑、試劑盒 Tris-緩沖液 Tris 三硝基甲苯(Triton) CAT 稀釋緩沖液CAT 酶標準物閃爍液 聚丙烯閃爍杯儀器、耗材 微量離心管微量離心機實驗步驟 一、材料滅菌物品1. D-PBSA2. 多孔培養板:6 孔,35 mm非消毒物品1. Tris-緩沖液:Tris-HCl,0.1mol
氯霉素乙酰基轉移酶(CAT)測定實驗
通過測定轉染細胞的報告基因表達,如β-gal或CAT,可以確定導人的DNA是否已被整合到宿主細胞主要用于(1)測定基因表達(2)基因整合評價(3)細胞的調控。來源于《動物細胞培養:基礎技術指南(第五版)》實驗方法原理氯霉素乙酰轉移酶報告基因(chloramphenicol acetyltransfe
氯霉素乙酰基轉移酶(CAT)測定實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 氯霉素乙酰轉移酶報告基因(chloramphenicol acetyltransferase, CAT)能將乙酰基從乙酰輔酶A轉移到氯霉素上。本試劑盒采用熒光測定的方法,檢測CAT活性,它的靈敏度接近同位素測定方法,而操作極
氯霉素乙酰基轉移酶(CAT)測定實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 氯霉素乙酰轉移酶報告基因(chloramphenicol acetyltransferase, CAT)能將乙酰基從乙酰輔酶A轉移到氯霉素上。本試劑盒采用熒光測定的方法,檢測CAT活性,它的靈敏度接近同位素測定方法,而操作極
薄層層析法測定氯霉素酰基轉移酶含量實驗
試劑、試劑盒 CAT 反應混合物 1乙基乙酸裂解緩沖液不含鈣鹽和鎂鹽的磷酸鹽緩沖液薄層層析(TLC) 溶劑Tris-Cl放射性墨水 儀器、耗材 干冰 乙醇浴不溶于乙醇的墨水的記號筆旋轉真空蒸發器橡膠棒 薄層層析板薄層層析槽預設為 65°C 的水浴 實驗步驟 材料 緩沖液和溶液 貯
薄層層析法測定氯霉素酰基轉移酶含量實驗
材料緩沖液和溶液貯存液、緩沖液和試劑的組分請見附錄 1。貯存液稀釋到適當濃度。CAT 反應混合物 11mol/LTris-Cl(pH7.8)50ul[14C] 氯霉素 (60mCi/mmol, 用水稀釋到 0.1mCi/ml)10ul乙酰輔酶 A(新鮮
薄層層析法測定氯霉素酰基轉移酶含量實驗
本方案中,我們列出了三種不同的分析方法,可以用來測定報道基因載體 pCAT3 轉染哺乳動物細胞后表達的 CAT 酶活性(請見圖 17-3)。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料用攜帶感興趣 DNA 的 pCAT 載體轉染的哺乳動物培養細
報告基因分類及優缺點
報告基因(reporter gene)是一種編碼可被檢測的蛋白質或酶的基因,其表達產物非常容易被鑒定。把它的編碼序列和基因調節序列相融合,在調控序列控制下進行表達,從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控。作為報告基因必須具備的條件:(1)全序列已測定(2)表達產物在手提細胞中不存在,即無背景,
二氫硫辛酰胺乙酰基轉移酶實驗
實驗方法原理 實驗材料 酶樣品試劑、試劑盒 Tris-HClCoA乙酰磷酸磷酸轉乙酰酶DL-二氫硫辛酰胺儀器、耗材 分光光度計實驗步驟 實驗所需「試劑」具體見「其他」0.98 ml 實驗混合物0.02 ml 酶樣品30℃ 時,于 240 nm 處吸收值發生變化,需使用石英比色皿。注意事項 其他 試劑
二氫硫辛酰胺乙酰基轉移酶實驗
分光光度法 Stopped 實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料