氯霉素乙酰基轉移酶（CAT）測定實驗
通過測定轉染細胞的報告基因表達，如β-gal或CAT,可以確定導人的DNA是否已被整合到宿主細胞主要用于（1）測定基因表達（2）基因整合評價（3）細胞的調控。來源于《動物細胞培養：基礎技術指南（第五版）》實驗方法原理氯霉素乙酰轉移酶報告基因(chloramphenicol acetyltransferase, CAT)能將乙酰基從乙酰輔酶A轉移到氯霉素上。本試劑盒采用熒光測定的方法，檢測CAT活性，它的靈敏度接近同位素測定方法，而操作極為簡便、快捷，成本也大為降低。使用通用裂解緩沖液，能與其他類型的報告基因檢測和蛋白含量檢測兼容。實驗材料細胞樣本試劑、試劑盒Tris-緩沖液Tris 三硝基甲苯（Triton）CAT 稀釋緩沖液CAT 酶標準物閃爍液聚丙烯閃爍杯儀器、耗材微量離心管微量離心機實驗步驟一、材料滅菌物品1. D-PBSA2. 多孔培養板：6 孔，35 mm非消毒物品1. Tris-緩沖液：Tris-HCl，0.1mol......閱讀全文
氯霉素乙酰基轉移酶（CAT）測定實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 氯霉素乙酰轉移酶報告基因(chloramphenicol acetyltransferase, CAT)能將乙酰基從乙酰輔酶A轉移到氯霉素上。本試劑盒采用熒光測定的方法，檢測CAT活性，它的靈敏度接近同位素測定方法，而操作極
氯霉素乙酰基轉移酶（CAT）測定實驗
通過測定轉染細胞的報告基因表達，如β-gal或CAT,可以確定導人的DNA是否已被整合到宿主細胞主要用于（1）測定基因表達（2）基因整合評價（3）細胞的調控。來源于《動物細胞培養：基礎技術指南（第五版）》實驗方法原理氯霉素乙酰轉移酶報告基因(chloramphenicol acetyltransfe
氯霉素乙酰基轉移酶（CAT）測定實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 氯霉素乙酰轉移酶報告基因(chloramphenicol acetyltransferase, CAT)能將乙酰基從乙酰輔酶A轉移到氯霉素上。本試劑盒采用熒光測定的方法，檢測CAT活性，它的靈敏度接近同位素測定方法，而操作極
氯霉素乙酰基轉移酶（CAT）測定
試劑、試劑盒 Tris-緩沖液 Tris 三硝基甲苯（Triton） CAT 稀釋緩沖液CAT 酶標準物閃爍液 聚丙烯閃爍杯儀器、耗材 微量離心管微量離心機實驗步驟 一、材料滅菌物品1. D-PBSA2. 多孔培養板：6 孔，35 mm非消毒物品1. Tris-緩沖液：Tris-HCl，0.1mol
二氫硫辛酰胺乙酰基轉移酶實驗
實驗方法原理 實驗材料 酶樣品試劑、試劑盒 Tris-HClCoA乙酰磷酸磷酸轉乙酰酶DL-二氫硫辛酰胺儀器、耗材 分光光度計實驗步驟 實驗所需「試劑」具體見「其他」0.98 ml 實驗混合物0.02 ml 酶樣品30℃ 時，于 240 nm 處吸收值發生變化，需使用石英比色皿。注意事項 其他 試劑
二氫硫辛酰胺乙酰基轉移酶實驗
分光光度法 Stopped 實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料
二氫硫辛酰胺乙酰基轉移酶實驗——Stopped－實驗
實驗材料酶樣品試劑、試劑盒Tris-HClCoA乙酰磷酸磷酸轉乙酰酶DL-二氫硫辛酰胺HCl羥胺FeCl3 試劑實驗步驟實驗所需「試劑」具體見「其他」0.98 ml 實驗混合物0.02 ml 酶樣品30 ℃ 培養 15 min，加入 0.1 ml 1 mol/L HCl 停止，沸水浴 5 min。而
薄層層析法測定氯霉素酰基轉移酶含量實驗
本方案中，我們列出了三種不同的分析方法，可以用來測定報道基因載體 pCAT3 轉染哺乳動物細胞后表達的 CAT 酶活性（請見圖 17-3）。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料用攜帶感興趣 DNA 的 pCAT 載體轉染的哺乳動物培養細
薄層層析法測定氯霉素酰基轉移酶含量實驗
試劑、試劑盒 CAT 反應混合物 1乙基乙酸裂解緩沖液不含鈣鹽和鎂鹽的磷酸鹽緩沖液薄層層析（TLC) 溶劑Tris-Cl放射性墨水儀器、耗材 干冰 乙醇浴不溶于乙醇的墨水的記號筆旋轉真空蒸發器橡膠棒 薄層層析板薄層層析槽預設為 65°C 的水浴實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液、緩沖液和試劑的組分請見
薄層層析法測定氯霉素酰基轉移酶含量實驗
材料緩沖液和溶液貯存液、緩沖液和試劑的組分請見附錄 1。貯存液稀釋到適當濃度。CAT 反應混合物 11mol/LTris-Cl(pH7.8)50ul[14C] 氯霉素 (60mCi/mmol, 用水稀釋到 0.1mCi/ml)10ul乙酰輔酶 A(新鮮
報告基因分類及優缺點
報告基因（reporter gene）是一種編碼可被檢測的蛋白質或酶的基因，其表達產物非常容易被鑒定。把它的編碼序列和基因調節序列相融合，在調控序列控制下進行表達，從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控。作為報告基因必須具備的條件：（1）全序列已測定（2）表達產物在手提細胞中不存在，即無背景，
關于氯霉素乙酰轉移酶的簡介
氯霉素乙酰轉移酶（Chloramphenicol Acetyltransferase ，CAT）是一種原核酶類，可以將氯霉素乙酰化而使其 失活，是細菌產生氯霉素抗性的主要原因。 在大腸桿菌中易表達，而且非常穩定，因此，氯霉素乙酰轉移酶可被改造成檢測氯霉素的理想工具酶。不同種類的抗性細菌可以產
二氫硫辛酰胺乙酰基轉移酶實驗——分光光度法
實驗方法原理實驗材料酶樣品試劑、試劑盒Tris-HClCoA乙酰磷酸磷酸轉乙酰酶DL-二氫硫辛酰胺儀器、耗材分光光度計實驗步驟實驗所需「試劑」具體見「其他」0.98 ml 實驗混合物0.02 ml 酶樣品30℃ 時，于 240 nm 處吸收值發生變化，需使用石英比色皿。展開?注意事項其他試劑0.1
常用報道基因的功能對比
道基因的對比報道基因作用方式優點缺點氯霉素乙酰基轉移酶（CAT；細菌）CAT通過使乙酰基與抗生素共價連接的方式來解除氯霉素的毒性，報道基因實驗通常檢測n-丁酰基的一半從輔助因子n-丁酰輔酶A轉移到具有放射活性的氯霉素上，被修飾的氯霉素的遷移率發生改變，并且能夠摻入有機溶劑。沒有內源活性；可使用自動化
氯霉素乙酰轉移酶的結構
內容信息最早對CAT結構的研究主要使用的是CATⅠ和CATⅢ的雜聚體，CAⅠ和CA’F1nⅡ亞基的分子量分別是25688和24965道爾頓，而CATⅢ的沉降平衡數據顯示其分子量為70500道爾頓，這證明CATⅢ是一個三聚體（αβ2和α2β）的結構。在CATⅢ三聚體中，每一亞基六條鏈的β片層結構延伸通
氯霉素乙酰轉移酶的結構特點
內容信息最早對CAT結構的研究主要使用的是CATⅠ和CATⅢ的雜聚體，CAⅠ和CA’F1nⅡ亞基的分子量分別是25688和24965道爾頓，而CATⅢ的沉降平衡數據顯示其分子量為70500道爾頓，這證明CATⅢ是一個三聚體（αβ2和α2β）的結構。在CATⅢ三聚體中，每一亞基六條鏈的β片層結構延伸通
轉染實驗常用的報告基因（植物、動物）
報告基因(reporter gene)是一種編碼可被檢測的蛋白質或酶的基因，是一個其表達產物非常容易被鑒定的基因。把它的編碼序列和基因表達調節序列相融合形成嵌合基因，或與其 它目的基因相融合，在調控序列控制下進行表達，從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控，篩選得到轉化體。
關于氯霉素乙酰轉移酶的結構介紹
最早對CAT結構的研究主要使用的是CATⅠ和CATⅢ的雜聚體，CAⅠ和CA’F1nⅡ亞基的分子量分別是25688 和24965道爾頓，而CATⅢ的沉降平衡數據顯示其分子量為70500道爾頓，這證明CATⅢ是一個三聚體（αβ2和α2β）的結構。 在CATⅢ三聚體中，每一亞基六條鏈的β片層結構延
氯霉素乙酰轉移酶的基本信息
氯霉素乙酰轉移酶（Chloramphenicol Acetyltransferase ，CAT）是一種原核酶類，可以將氯霉素乙酰化而使其失活，是細菌產生氯霉素抗性的主要原因。
氯霉素乙酰轉移酶的定點突變介紹
為了研究反應中底物識別，催化和特殊側鏈交互作用對蛋白結構各方面的影響，包括對其穩定性和反應活性的影響，CATⅢ己經有超過60種的定點突變類型。特殊的點突變類型有助于研究每一個酪氨酸殘基在配體結合時熒光發生改變的過程中所起的作用，有助于進一步的闡明CATⅢ和氯霉素交互作用的NMR結果。對cat基因
氯霉素乙酰轉移酶的基本信息
氯霉素乙酰轉移酶（Chloramphenicol Acetyltransferase ，CAT）是一種原核酶類，可以將氯霉素乙酰化而使其失活，是細菌產生氯霉素抗性的主要原因。
冷凝集素測定（CAT）臨床意義
正常參考范圍：陰性臨床意義：凝集價>1：64具有診斷意義，如在病程中，冷凝集素效價逐漸上升，則對診斷價值更大。支原體肺炎、肝硬化、多發性骨髓瘤 、瘧疾、惡性淋巴瘤等冷凝集素有不同程度的升高。冷凝集素效價升高可在傳染過程中出現，特別是傳染性單核細胞增多癥和支原體所致 非典型性肺炎；慢性的冷凝集
血清丙氨酸轉移酶（ALT）測定實驗
實驗方法原理經30min反應后， 加入2、4-二硝基苯肼終止反應，并與反應液中的二種a-酮酸生成相應的2、4 二硝基苯腙、在堿性條件，兩種苯腙的吸收光譜曲線有差別，在500－520nm處差異最大， 以等摩爾濃度計算，丙酮酸苯腙的顯色溫度約為a-酮戊二酸苯腙的3倍. 據此計算出丙酮酸的生成量．實驗步驟
血清丙氨酸轉移酶（ALT）測定實驗
實驗方法原理經30min反應后， 加入2、4-二硝基苯肼終止反應，并與反應液中的二種a-酮酸生成相應的2、4 二硝基苯腙、在堿性條件，兩種苯腙的吸收光譜曲線有差別，在500－520nm處差異最大， 以等摩爾濃度計算，丙酮酸苯腙的顯色溫度約為a-酮戊二酸苯腙的3倍. 據此計算出丙酮酸的生成
氯霉素乙酰轉移酶的基本功能
細菌的氯霉素抗性和CAT有著直接的關系。當含有CAT的細菌暴露于氯霉素時，可以使氯霉素乙酰化而失活。
氯霉素乙酰轉移酶的主要功能
細菌的氯霉素抗性和CAT有著直接的關系。當含有CAT的細菌暴露于氯霉素時，可以使氯霉素乙酰化而失活。
氯霉素乙酰轉移酶的活性位點的介紹
1、氯霉素結合位點 氯霉素結合與定位在亞基交界面的一個深深的袋子結構中。盡管形成袋子結構的大多數氨基酸位于形成交界面的其中的一個亞基中，在催化中起關鍵作用的195位的組氨酸卻位于另外的一個亞基。氯霉素的苯環與29位亮氨酸，31位半胱氨酸，160亮氨酸，172位異亮氨酸的側鏈結合，其二氯基團和1
琥珀氯霉素的含量測定
取該品適量,精密稱定,按琥珀氯霉素每10mg加乙醇1ml 使溶解,再用水稀釋使成每1ml 中約含20μg 的溶液,照分光光度法（附錄Ⅳ A）,在276nm 的波長處測定吸收度,按C11H12Cl2N2O5 的吸收系數（E1% 1cm）為298 計算。
氯霉素的含量測定方法
含量測定照高效液相色譜法(通則0512)測定。供試品溶液取本品適量,精密稱定,加甲醇適量(每10mg氯霉素加甲醇lml)使溶解,用流動相定量稀釋制成毎1ml中約含0.1mg的溶液,搖勻。對照品溶液取氨霉素對照品適量,精密稱定,加甲醇適量(每10mg氯霉素加甲醇1ml)使溶解,用流動相定量稀釋制成每1
粒子轟擊細胞法的定義和應用
在1987年，Vlein首先報道了應用此技術將TMV（煙草花葉病毒）RNA吸附到鎢粒表面，轟擊洋蔥表皮細胞，經檢測發現病毒RNA能進行復制，并以同樣技術將CAT(Chloraphericol acetyltransferase氯霉素乙酰轉移酶基因)基因導入洋蔥表皮細胞。該技術已在煙草、水稻、小麥、黑