WesternBlot蛋白質磷酸化操作小貼士
WB 是檢測和定量磷酸化蛋白質的重要實驗方法，然而大家一直都說磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出條帶的時候，會特別沮喪。在此給大家列出幾點小建議，希望能幫助您改善一下實驗結果。1、樣本是否表達：查閱資料或通過預實驗確定。2、對照設置：陽性和陰性對照。總蛋白抗體對照，對于特定時間的特定樣品，磷酸化和非磷酸化蛋白質的總和代表該特定蛋白質的總量。在相同的 WB 檢測中， 磷酸化蛋白質的量增加通常伴隨著非磷酸化蛋白質的降低。3、內參設置：根據實驗選擇合適的內參，如Actin、GAPDH 等4、適當的提取方法：蛋白質提取的方法不僅影響提取效率，還會影響蛋白的質量。建議采用裂解液裂解和超聲破碎組合的方式，可確保整個樣本充分裂解。5、低溫操作：室溫條件下，磷酸化蛋白很容易被蛋白磷酸酶降解。請勿反復凍融，操作時一定置于冰上。6、加入抑制劑：組織或細胞裂解時會釋放出大量內源性蛋白磷酸酶，它會導致磷酸化蛋白的去磷酸化，因此，必須在裂解......閱讀全文
Western Blot蛋白質磷酸化操作小貼士
WB 是檢測和定量磷酸化蛋白質的重要實驗方法，然而大家一直都說磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出條帶的時候，會特別沮喪。 Azure君在此給大家列出幾點小建議，希望能幫助您改善一下實驗結果。 1、樣本是否表達： 查閱資料或通過預實驗確定。 2、對照設置：
Western Blot蛋白質磷酸化操作小貼士
WB 是檢測和定量磷酸化蛋白質的重要實驗方法，然而大家一直都說磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出條帶的時候，會特別沮喪。在此給大家列出幾點小建議，希望能幫助您改善一下實驗結果。1、樣本是否表達：查閱資料或通過預實驗確定。2、對照設置：陽性和陰性對照。總蛋白抗體對照，對于特定時間的特定樣
Western Blot操作步驟
背景： 蛋白質印跡的發明者是斯坦福大學George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被稱為Western Blot。最開始做印跡的是一個叫Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術
Western Blot操作步驟
背景： 蛋白質印跡的發明者是斯坦福大學George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被稱為Western Blot。最開始做印跡的是一個叫Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術稱為Southe
Western-Blot操作流程
試劑配制（一）母液1.0mol/L Tris·HCl Tris (MW121.14) 30.29g蒸餾水 200ml溶解后，用濃鹽酸調pH至所需點（見下所示），最后用蒸餾水定容至250ml，高溫滅菌后室溫下保存。 PH HCl7.4 約17ml7.5 約16m7.6 約15ml8.0 約10ml1.
Western Blot操作步驟（二）
四、轉膜以下以使用半干轉膜為例。對于轉印90kd以下的蛋白，轉膜液都不用加SDS，如果是蛋白分子量大的話可以加入0.037%的SDS。在電泳結束前20min開始準備轉膜所需的東西。轉一張膜需準備6張的濾紙（長一般為8.1~8.3cm，寬度根據裁的膠大小實際測量，但膠一般會縮水，所以裁8cm就行）和1
Western Blot操作步驟（二）
四、轉膜 以下以使用半干轉膜為例。對于轉印90kd以下的蛋白，轉膜液都不用加SDS，如果是蛋白分子量大的話可以加入0.037%的SDS。 在電泳結束前20min開始準備轉膜所需的東西。轉一張膜需準備6張的濾紙（長一般為8.1~8.3cm，寬度根據裁的膠大小實際測量，但膠一
Western Blot操作步驟（一）
背景：蛋白質印跡的發明者是斯坦福大學George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被稱為Western Blot。最開始做印跡的是一個叫Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術稱為Southern
酪氨酸磷酸化相關蛋白western blot條帶
1.首先裂解液中應該有去污劑之類的如SDS、NP-40等2.為了防止蛋白降解，還要加入蛋白酶抑制劑之類的PMSF以及胰蛋白酶抑制劑等3.為了防止磷酸化蛋白的去磷酸化，還要加入磷酸酶抑制劑之類的如氟化鈉、釩酸鈉之類等
蛋白質檢測－Western Blot
蛋白質檢測－Western Blot1.?把聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質電泳轉移到硝酸纖維膜上。1）轉移緩沖液洗滌凝膠和硝酸纖維素膜，將硝酸纖維素膜鋪在凝膠上，用5ml移液管在凝膠上來回滾動去除所有的氣泡。2）在凝膠/濾膜外再包一張3mm濾紙（預先用轉移緩沖液浸濕），將凝膠夾在中間，保持濕潤和沒有氣泡。