華東理工大學再發NatureMethods文章:細胞代謝研究新技術
來自華東理工大學,中國科學技術大學等處的研究人員發表了題為“Genetically encoded fluorescent sensors reveal dynamic regulation of NADPH metabolism”的文章,開發了一系列特異性檢測NADPH的高性能遺傳編碼熒光探針iNap,實現了在活體、活細胞及各種亞細胞結構中對NADPH代謝的高時空分辨檢測與成像。 這一研究成果公布在6月5日的Nature Methods雜志上,由華東理工大學楊弋教授,趙玉政研究員課題組與中國科學技術大學劉海燕教授課題組合作完成。第一作者為華東理工大學博士生陶榮坤、趙玉政研究員和中科大博士生初環宇。 煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH/NAD+)及其磷酸化形式(NADPH/NADP+),作為生物體內兩對最重要的輔酶和核心代謝物,常被用作評價細胞代謝狀態的關鍵指標,與衰老及相關疾病如癌癥、糖尿病、肥胖癥、心腦血管疾病、神經性退......閱讀全文
鈣離子熒光探針:比值型熒光探針
前面我們介紹了熒光指示劑法可以將Ca2+檢測的實驗與其他技術結合使用,如可以與流式細胞儀、熒光分光光度計、或者熒光顯微鏡進行聯合檢測 。紫外光型主要包括Quin-2、Indo-1、Fura-2等,數量較少,可見光型數目較多,包括Fluo-3、鈣黃綠素、Rhod-2等。熒光指示劑根據測光原理和數據
熒光探針有毒嗎
有毒的。在紫外-可見-近紅外區有特征熒光,并且其熒光性質可隨所處環境的性質,如極性、折射率、粘度等改變而靈敏地改變的一類熒光性分子。
熒光原位雜交探針和熒光探針有什么區別
熒光原位雜交探針和熒光探針有什么區別 熒光原位雜交技術問世于70年代后期,其曾多用于染色體異常的研究,近年來隨著FISH所應用的探針鐘類的不斷增多,特別是全Cosmid探針及染色體原位抑制雜交技術的出現,使FISH技術不僅在細胞遺傳學方面,而且還廣泛應用于腫瘤學研究,如基因診斷基因定位等 。原
NADH和NADH+H+的區別
區別1、NADH產生于糖酵解和細胞呼吸作用中的檸檬酸循環。2、NADH+H+ 是氧化態。1分子NADH+H+在氧化磷酸化過程中理論上生成3分子ATP(常用于計算中)。NADPH是還原氫 也就是高二時說的[H] 是一種輔酶,叫還原型輔酶Ⅱ NADP+ 是還原氫失去電子的狀態,也叫氧化型輔酶Ⅱ(NADP
搖核酸的熒光探針
DNA和RNA?搖核酸的熒光探針 用于共聚焦激光掃描顯微鏡的主要有Acridine Orange(吖啶橙,AO)、Propidium Iodide(碘化丙啶,PI)。兩種染料既可標記DNA又可標記RNA,如為獲得單獨的DNA或RNA分布,染色前可用RNA酶或DNA酶處理細胞。PI不能進入完整的細胞膜
熒光探針的功能介紹
在紫外-可見-近紅外區有特征熒光,并且其?熒光性質(激發和發射波長、?強度、壽命、?偏振等)可隨所處環境的性質,如極性、折射率、粘度等改變而靈敏地改變的一類熒光性分子。
熒光探針技術的概念
受到激發光激發后,從激發態單重態回到基態,在紫外-可見-近紅外區有特征發光,稱之為熒光。熒光性質(激發和發射波長、強度、壽命、偏振等)可隨所處環境的性質,如極性、折射率、粘度等改變而靈敏地改變的一類熒光性分子,被稱為熒光探針。熒光探針分類很多,可以根據材料屬性分為有機和無機探針,可以根據探針尺寸分為
熒光探針的相關介紹
在紫外-可見-近紅外區有特征熒光,并且其熒光性質(激發和發射波長、強度、壽命、偏振等)可隨所處環境的性質,如極性、折射率、粘度等改變而靈敏地改變的一類熒光性分子。 與核酸(DNA或RNA)、蛋白質或其他大分子結構非共價相互作用而使一種或幾種熒光性質發生改變的小分子物質。可用于研究大分子物質的性
熒光探針的分類檢測
常用的熒光探針有熒光素類探針、無機離子熒光探針、熒光量子點、分子信標等。熒光探針除應用于核酸和蛋白質的定量分析外,在核酸染色、DNA電泳、核酸分子雜交、定量PCR技術以及DNA測序上都有著廣泛的應用。 檢測熒光探針的方法主要有單點測定和電荷耦合裝置(CCD)熒光成像(包括用于微區分析的激光共聚
溶酶體熒光探針原理介紹
溶酶體熒光探針溶酶體為單層膜蛋白包圍的內含一系列酸性水解酶的小體。溶酶體中含有多種酶,如糖苷酶、酸性磷酸酶、彈性蛋白酶、組織蛋白酶等等,是物質代謝的場所。弱堿性胺選擇性聚集在胞內低pH值的小室中,可用于研究溶酶體的生物合成和發病機理。其中最常用的就是DAMP,它不發熒光,需要和抗DNP的抗體共同使用
蛋白質的內源熒光與熒光探針
利用熒光光譜法研究蛋白質一般有兩種方法。一是測定蛋白質分子的自身熒光(內源熒光),另一種是當蛋白質本身不能發射熒光時,通過非共價吸附或共價作用向蛋白質分子的特殊部位引入外源熒光(也稱熒光探針),然后測定外源熒光物質的熒光。 ?蛋白質的內源熒光 含有芳香族氨基酸(色氨酸(tryptophan?,Trp
納米熒光探針摧滅原理
通過一間隔基S(space)和熒光團F(fluorophore)相連而構建。其中熒光團部分是光能吸收和熒光發射的場所,識別基團部分則用于結合客體,這兩部分被間隔基隔開,又靠間隔基相連而成一個分子,構成了一個在選擇性識別客體的同時又給出光信號變化的超分子體系。PET熒光探針中,熒光團與識別基團之間
共聚焦熒光探針的選擇
共聚焦熒光探針的選擇共聚焦激光掃描顯微鏡是20世紀80年代來發展起來的一種新型高精度顯微鏡系統,輔以各類熒光探針或熒光染料與被測物質特異性結合,不僅可觀察固定的細胞、組織切片,還可對活細胞的結構、分子、離子進行實時動態地觀察和檢測。熒光探針的發展非常迅速,目前僅美國Molecular Probes公
pcr熒光探針法是什么
pcr熒光探針法是是SYBRGreen摻入到雙鏈DNA中的量。SYBRGreen摻入到雙鏈DNA中后會發出熒光。但是只要是雙鏈,它都摻。而探針法是當探針結合到目標序列上以后,聚合酶降解探針后,探針上自帶的熒光基團離開淬滅基團,從而發出熒光。
生物芯片技術熒光探針
目前用熒光探針作為檢測信號的儀器,主要是考慮熒光標記所要檢測的DNA的效率,以及熒光探針本身的發光效率和光譜特性。PCR過程中的DNA標記1.末端標記:在引物上標記有熒光探針,在DNA擴增過程時,使新形成的DNA鏈末端帶有熒光探針。2 .隨機插入:選擇四種緘機基,使其中一種或幾種掛有熒光探針,在PC
熒光探針的分類及應用
受到激發光激發后,從激發態單重態回到基態,在紫外-可見-近紅外區有特征發光,稱之為熒光。熒光性質(激發和發射波長、強度、壽命、偏振等)可隨所處環境的性質,如極性、折射率、粘度等改變而靈敏地改變的一類熒光性分子,被稱為熒光探針。熒光探針分類很多,可以根據材料屬性分為有機和無機探針,可以根據探針尺寸分為
共聚焦熒光探針標記方法
(一)BCECF測定pH值 1. 儲存液配制 BCECF-AM溶于DMSO配成1mmol/L溶液,等份分裝后,-20℃避光保存。 2. 染色步驟 將培養細胞用PBS(含Ca2+、Mg2+)洗2遍。加入BCECF-AM(終濃度1~5μmol/L),37℃孵育30~60min。PBS(含Ca2+、M
檢測酶活性的熒光探針
檢測酶活性的熒光探針?共聚焦激光掃描顯微鏡除了具備熒光顯微鏡檢測熒光酶細胞化學的作用以外,在檢測活細胞酶活性動態變化方面有著無可比擬的優勢。通過對細胞施予不同的處理因素可檢測細胞內相應的酶被激活或滅活的動態變化過程。有的酶熒光探針是自身就可發出熒光、有的是與酶結合后發出熒光、有的則是被酶分解后發出熒
pcr熒光探針法是什么
實時定量聚合酶鏈反應 (Quantitative Real-time PCR,qPCR) 是一種分子生物學技術,用于放大和同時檢測或量化靶向 DNA 分子。程序遵循 PCR 的一般原則。在 PCR 反應過程中,隨著循環次數的增加,PCR 產物的積累導致熒光信號的增強。因此,通過監測熒光強度,在"實時
NADH是什么
是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的還原態。NADH是一種化學物質,是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的還原態,還原型輔酶Ⅰ。N指煙酰胺,A指腺嘌呤,D是二核苷酸。因NADH主要在細胞中參與物質和能量代謝,產生于糖酵解和細胞呼吸作用中的檸檬酸循環,并作為生物氫的載體和電子供體,在線粒體內膜上通過氧化磷酸化過程。轉移能量供給
NADH是什么
是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的還原態。NADH是一種化學物質,是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的還原態,還原型輔酶Ⅰ。N指煙酰胺,A指腺嘌呤,D是二核苷酸。因NADH主要在細胞中參與物質和能量代謝,產生于糖酵解和細胞呼吸作用中的檸檬酸循環,并作為生物氫的載體和電子供體,在線粒體內膜上通過氧化磷酸化過程。轉移能量供給
NADH是什么
是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的還原態。NADH是一種化學物質,是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的還原態,還原型輔酶Ⅰ。N指煙酰胺,A指腺嘌呤,D是二核苷酸。因NADH主要在細胞中參與物質和能量代謝,產生于糖酵解和細胞呼吸作用中的檸檬酸循環,并作為生物氫的載體和電子供體,在線粒體內膜上通過氧化磷酸化過程。轉移能量供給
NADH制備方法
NADH制備方法主要包括提取法、發酵法、強化法、生物合成法和有機物合成法?。
雙重熒光定量PCR探針熒光基團該怎么選擇
有干擾的話,在儀器上面就可以看出來,比如說,FAM和VIC,FAM有信號,單獨看VIC也肯定有信號,只是低點而已
探針法熒光定量pcr-熒光值要達到多少
定量PCR有絕對定量跟相對定量,絕對定量就是先用已知濃度的質粒濃度梯度(1.00E+07、1.00E+06、1.00E+05、1.00E+04、1.00E+03)制作標準曲線,然后通過做Real-timePCR的CT值計算出其表達量;相對定量是比較管家基因(GAPDH)與目的基因的CT值,得出各標本
實時熒光定量-PCR-所用熒光探針及功能介紹
應用于實時定量 PCR 檢測體系中的熒光探針主要有兩種:一種是 TaqMan 探針,一種是分子信標探針。Tyagi 和 Krammer(1996)首次建立了分子信標探針,在同一寡核苷酸探針的5'端標記熒光素、3'端標記淬滅劑(DABCYL)分子信標探針能形成發夾結構,探針的嚕撲環(L
熒光探針和熒光染料對于PCR技術的區別
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅
熒光探針有助于癌癥研究
???Echelon Biosciences公司和猶他大學的研究人員合作研究,指出使用ATX-Red AR-2作為新的顯像劑可有效照亮腫瘤。???????ATX-Red AR-2是臨床前階段藥物研發中令人興奮的進步,可使研究人員使用非侵入性、機制特異診斷方法來監控疾病和候選藥物。圖像化酶自毒素的活性
局部熒光探針可以檢測腸癌啦!
近日,國際化學與生物學雜志chemistry&biology發表了來自斯坦福大學醫學院Matthew Bogyo研究小組的一項最新研究成果,他們發現一種熒光淬滅探針(aABP)能夠特異性靶向在腸道發育不良中高表達的半胱氨酸蛋白酶,對指示腸道腫瘤具有非常高的敏感性和特異性。 早期檢測結腸息肉能夠
熒光探針的化學性質
熒光定量PCR所使用的熒光化學制劑可分為兩種:熒光探針和熒光染料。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切