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（一）BCECF測定pH值 1. 儲存液配制 BCECF-AM溶于DMSO配成1mmol/L溶液，等份分裝后，－20℃避光保存。 2. 染色步驟 將培養細胞用PBS（含Ca2+、Mg2+）洗2遍。加入BCECF-AM（終濃度1～5μmol/L），37℃孵育30～60min。PBS（含Ca2+、Mg2+）洗2遍。激光掃描共聚焦顯微鏡觀察。 （二）SNARF-1定量比率測定pH值 1． 儲存液配制 SNARF溶于DMSO配成1mmol/L溶液，等份分裝后，－20℃避光保存。 2． 染色步驟 將培養細胞用PBS（含Ca2+、Mg2+）洗2遍。加入SNARF-1-AM（終濃度1～5μmol/L），37℃孵育30～60min。PBS（含Ca2+、Mg2+）洗2遍。激光掃描共聚焦顯微鏡觀察。 （三）Indo-1測定細胞內Ca2+ 1． 儲存液配制 Indo-1（分子量為840），活細胞標記常選用Indo-1 AM，分子量為1010，......閱讀全文
一、LSCM常用的檢測內容及其熒光探針 LSCM檢測內容和應用范圍非常廣泛，以下僅簡單介紹LSCM常用的檢測內容及其熒光探針。 1．細胞內游離鈣 共聚焦激光掃描顯微鏡常用的有Fluo-3、Rhod-1、Indo-1、Fura-2等，前兩者為單波長激光探針，利用其單波長激發特點可直接測量細胞內Ca
實驗室很多同學都要做Real time PCR實驗，實驗室的師兄師姐都會有很多寶貴意見，不過也有實驗室前沒有做過的，查找了下資料和大家分享下關于實時熒光 Taqman 探針設計、實時熒光PCR探針的選擇、引物的設計及評價。熒光探針法是用序列特異的熒光標記探針來檢測產物，探針法的出現使得定量
據世衛組織估計，到2035年全世界每年將有2400萬新癌癥病例和1450萬癌癥相關死亡案例。在與癌癥相關的死亡中，如果可以早期診斷出癌癥，約30%的人會有獲救的希望。因此對癌癥早期準確的診斷對于增加治愈癌癥和提高癌癥存活率的幾率是非常重要的。癌癥相關生物標志物的臨床檢測在癌癥診斷和治療方面具有重要意
ATP（三磷酸腺苷）是生物體內不可缺少的生物大分子，在細胞呼吸、酶催化、能量和信號傳遞過程中起到關鍵的作用。線粒體是產生ATP的主要場所，ATP的含量變化必然會對線粒體的功能產生不可逆的影響。科學研究表明，線粒體的功能紊亂與心血管疾病、惡性腫瘤以及帕金森氏癥等疾病密切相關。因此，發展一種可靠并能
實時熒光PCR檢測技術眾所周知，PCR（聚合酶鏈反應）技術自從1985年問世以來，經過十幾年的發展，已成為實驗室的常規技術。它是現代分子生物學研究中不可缺少的手段，是一種極為敏感的放大系統。相比于傳統的臨床診斷方法，核酸診斷是分子水平上的診斷技術，可以彌補傳統臨床診斷方法的某些缺陷，比如，核酸診斷能
多聚集鏈反應（polymerase chain reaction,PCR）技術發明至今已近20年了，在這期間技術得到了不斷的發展，近年來出現的實時熒光定量PCR（real-time quantitative PCR）技術實現了PCR從定性到定量的飛躍，它以其特異性強、靈敏度高、重復性好、
(張蓓，沈立松 上海第二醫科大學附屬新華醫院上海兒童醫學中心實驗診斷中心)摘要:多聚酶鏈反應飛速的發展使其成為了分子生物學實驗室重要的工具，實時熒光定量PCR(real-timequantitative PCR)技術以其敏感性高、重復性好、速度快和污染少使PCR技術又
實時定量PCR (qPCR)的優勢?實時檢測PCR反應過程?精確計算出每個循環的PCR產物量?擴增和檢測同時進行?消除后續PCR的干擾在實時定量PCR反應中，雜交探針與插入染料如SYBR Green相比是更好的選擇。熒光標記探針可以提高實時定量PCR結果的效率、靈敏度和特異性。而且定量PC
眾所周知，PCR（聚合酶鏈反應）技術自從1985年問世以來，經過十幾年的發展，已成為實驗室的常規技術。它是現代分子生物學研究中不可缺少的手段，是一種極為敏感的放大系統。相比于傳統的臨床診斷方法，核酸診斷是分子水平上的診斷技術，可以彌補傳統臨床診斷方法的某些缺陷，比如，核酸診斷能直接揭示病原體的存在，
劉向國 謝國明 (重慶醫科大 重慶市 400016)摘 要 熒光定量PCR儀技術是一種新的核酸定量技術，該技木在PCR儀反應系統中引人了熒光標記探針，具有可實時監測，高靈敏性，高特異性和高精確性的特點，極大地克服了原有PCR儀技術的不足，擴大了PCR儀的應用范圍。關鍵詞 定量pcr；熒光；基因Flu
1 概述 熒光定量多聚酶鏈式反應是一種新的核酸定量技術。該技術將熒光能量傳遞技術（fluorescence resonance energy transfer，FRET）應用于常規多聚酶鏈式反應（poly
在用共聚焦顯微鏡進行的試驗中，一些實驗指標可以利用樣品自身或外源性物質的自發性熒光進行檢測，但大多數待測物質不具備可測熒光，需要采用熒光探針標記的方法使其具有可測定的熒光信號。那么，怎樣選擇共聚焦顯微鏡熒光探針呢？ 1、根據實驗目的確定需要檢測的指標 一旦檢測指標確定，則熒光探針的選
SYBR Green I：一種DNA結合染料，能非特異性地與雙鏈DNA結合，結合后發出熒光，價格便宜，但因無特異性，易受到非特異性擴增和引物二聚體地的影響，是定量結果不可靠。可用融解曲線分析區分特異性和非特異性擴增，引物的設計和反應條件的優化對消除非特異性熒光有很大幫助。 2.Taqman探針：
熒光定量PCR檢測試劑盒簡述熒光探針法的應用熒光定量PCR檢測試劑盒的原理在于PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;P
定量PCR 定義 以參照物為標準對PCR終產物進行分析或對PCR過程的進行監測，來評估樣本中靶基因的拷貝數，稱為定量PCR相對定量→絕對定量， 手工操作→自動化檢測， 靈敏度與特異性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR擴增的指數期進行的。 特定的待擴增基因片段 起始含量越大，則指
鈣離子在許多生理過程中起著復雜的作用。例如，細胞內鈣離子在促進神經元從神經元中釋放神經遞質的信號轉導途徑中必不可少，并參與所有肌肉細胞收縮所需的機制。細胞離子濃度受被動和主動離子通道和泵的調節。離子通道和泵的故障可能導致離子濃度調節不當，從而產生不利于正常細胞功能的不利條件。鈣離子濃度研究領域中常使
靶向熒光探針能夠在術中實時點亮癌細胞，幫助醫生判斷腫瘤邊界和發現轉移灶，這一概念也被稱為熒光引導手術（fluorescence-guided surgery，FGS）。 在過去幾十年中，分子影像技術的發展大大提高了腫瘤診治的能力，傳統醫學影像技術一般基于生物體本身的物理特性或解剖學特征，缺乏特
論文摘自山東師范大學化學化工與材料科學學院，濟南 250014摘 要 熒光顯微鏡與熒光光譜儀耦合系統可獲取顯微熒光成像及微區熒光光譜、熒光壽命的測定信息，廣泛應用于細胞、組織中蛋白質的結構功能分析，核酸的識別檢測，金屬離子、自由基的定量測定，以及納米生物探針的研制等生物分析研究的熱點領域。1 引 言
1.SYBR Green I：一種DNA結合染料，能非特異性地與雙鏈DNA結合，結合后發出熒光，價格便宜，但因無特異性，易受到非特異性擴增和引物二聚體地的影響，是定量結果不可靠。可用融解曲線分析區分特異性和非特異性擴增，引物的設計和反應條件的優化對消除非特異性熒光有很大幫助。2.Taqm
PCR實驗室產品選擇指南 熒光 基團是吸收一定波長的光子后發射特定波長的光波，可以作為抗體等分子的標記物，實時熒光定量PCR中的Taqman探針常用熒光基團FAM標記熒光基團和TAMRA標記。 熒光基團 吸收特定波長的光子后熒光染料(通常稱為“熒光基團”或簡稱為“熒光
熒光定量PCR檢測技術從誕生到現在已經有 8 年了，但是其應用在近四年才迅猛增長。在 Medline 數據庫中，用“ Taqman” 或 ”real time PCR” 作為關鍵詞檢索，在1996 年僅有 19 篇，在 1997 年僅有 28 篇，在 98 、 99 、2000 年分別達到了
熒光定量PCR實驗指南一、基本步驟：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；2、引物、探針的設計；3、引物探針的合成；4、反應體系的配制；5、反應條件的設定；6、反應體系和條件的優化；7、熒光曲線和數據分析；8、標準品的制備；二、技術關鍵：1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比
Real Time PCR實時熒光定量PCR 其定量的基本原理是在 PCR 反應體系中加入非特異性的熒光染料（如： SYBR GREEN I ）或特異性的熒光探針（如： Taqman 探針），實時檢測熒光量的變化，獲得不同樣品達到一定的熒光信號（閾值）時所
一、基于分子雜交的分子診斷技術 上世紀60年代至80年代是分子雜交技術發展最為迅猛的20年，由于當時尚無法對樣本中靶基因進行人為擴增，人們只能通過已知基因序列的探針對靶序列進行捕獲檢測。其中液相和固相雜交基礎理論、探針固定包被技術與cDNA探針人工合成的出現，為基于分子雜交的體外診斷方法進行了
聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction, PCR）自誕生之日起就決定了它不僅是一種高敏感、高特異的檢測核酸分子的定性方法，而且也是一個能對核酸分子進行精確定量的有力工具[1]。隨著分子生物學技術研究的不斷進展，定量PCR技術取得了突飛猛進的發展，不僅建立了一系
1. 引言量子點是一種準零維納米晶粒，因其三個維度均受到量子限域，從而表現出一些獨特的光學性能，如激發波長范圍寬、發射波長范圍窄且對稱、量子產率高、熒光壽命長、光學性能穩定等優點。量子點作為熒光離子探針在離子以及小分子檢測領域引起了許多研究人員的關注并且取得了不錯的進展。離子和無機小分子與量子點之間
2019-12-03作者：瀏覽次數：34 來源：北京歐普特科技有限公司 熒光探針的作用是標記待測物質，使之能夠利用熒光測定的方法得到檢測，并獲得正確的實驗結果。那么如何選擇合適的共聚焦顯微鏡熒光探針呢？ 根據實驗目的確定需要檢測的指標選擇探針一旦檢測指標確定，則熒光探針的選擇范圍也隨
目前用熒光探針作為檢測信號的儀器，主要是考慮熒光標記所要檢測的DNA的效率，以及熒光探針本身的發光效率和光譜特性。PCR過程中的DNA標記1.末端標記：在引物上標記有熒光探針，在DNA擴增過程時，使新形成的DNA鏈末端帶有熒光探針。2 .隨機插入：選擇四種緘機基，使其中一種或幾種掛有熒光探針，在PC
除了為克隆基因、預測編碼蛋白而需要研究基因的構成外，當前在基因組學上的努力也包括對基因組構成的研究，以分析具有結構和調控因子插入的基因。近源物種分析成為比較基因組學的主要內容，被認為是研究進化、基因功能和人類疾病的重要方法。 利用該方法分析微生物，特別是細菌的基因組，早在 1996 年就已開始
在最新一期出版的美國化學會旗下的期刊ACS Nano（影響因子IF 13.942）上，刊載了中國科學院大學化學科學學院田志遠教授課題組博士研究生呂巖霖的研究論文Cancer Cell Membrane-Biomimetic Nanoprobes with Two-Photon Excitatio