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TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）把PCR片斷與一個具有3-T突出的載體DNA連接起來的方法。因為PCR反應中所適用的聚合酶具有末端轉移的活性，通常在3加上A。例如：Taq聚合酶同時具有的末端連接酶的功能，PCR反應時在每條PCR擴增產物的3端自動添加一個3-A突出端。只有用經過特殊處理的具有3-T突出末端的DNA片斷才能通過T/A配對進行連接。通過PCR的方法擴增目的基因片斷的過程中，由于往往不清楚目的基因的DNA序列，獲得的目的片斷通常需要通過TA克隆的方法，重組到T-載體中，通過序列測定清楚DNA序列。 由于在PCR過程中，使用的DNA聚合酶不同，往往分為2種情況：（1）使用不同的Taq酶，在PCR擴增循環結束后，加上72℃ 10分鐘一個過程，Taq酶可以在擴增產物的3末端加上A，因此PCR產物回收純化后可以和T載體直接連接。（2）使用高保真的DNA聚合酶，如pfu酶，由于其不能在擴......閱讀全文
PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切與連接法，雜交法和近期開發出來的特異性重組法等。但因為TA克隆法操作最簡單，快速和高效的原因，成為Taq聚合酶PCR產物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen發明，并擁有全球TA Cloning商標的專利權。TA克隆方法（Original TA Cl
Topo TA克隆方法（Topo TA Cloning Kit） Topo TA克隆原理與TA克隆一樣，唯一不同的是TA克隆用的是T4連接酶把PCR片斷連接到T載體上，而Topo TA Cloning用的是DNA Topoisomerase。
對于亞克隆來說，酶切-連接可謂是最經典的方式。雖說效果不錯，可著實有些麻煩。載體和片段分別酶切、跑膠、回收，再加上連接和轉化，一星期轉眼就過去了。做表達的那是沒辦法，載體上只有多克隆位點，那我們只能配合。對于只是想克隆保存或測序的同學來說，快速簡便的TA 克隆則不失為一個好選
PCR產物克隆大致分為兩類，即平頭連接和粘頭連接。平頭連接是將制備好的平頭載體和補平或削平的PCR 產物直接進行連接。載體可用EcoR V或Sma I切成平頭；PCR 產物純化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用該酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。如果要求
PCR產物克隆大致分為兩類，即平頭連接和粘頭連接。平頭連接是將制備好的平頭載體和補平或削平的PCR 產物直接進行連接。載體可用EcoR V或Sma I切成平頭；PCR 產物純化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用該酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。如果要求
PCR產物克隆大致分為兩類，即平頭連接和粘頭連接。 平頭連接是將制備好的平頭載體和補平或削平的PCR產物直接進行連接。載體可用EcoR V或Sma I切成平頭；PCR產物純化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用該酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’
PCR 產物的克隆 PCR 產物克隆大致分為兩類，即平頭連接和粘頭連接。 平頭連接是將制備好的平頭載體和補平或削平的 PCR 產物直接進行連接。載體可用EcoR V 或 Sma I 切
把PCR產物克隆到載體上常見有3種做法： 1. 直接克隆到T載體（或者U載體上） 2. 引物設計時引入酶切位點，PCR產物酶切后直接克隆到目標載體上 3. 將平末端PCR產物直接克隆到平末端酶切載體上。 方法3主要是針對高保
把PCR產物克隆到載體上常見有3種做法：1.直接克隆到T載體（或者U載體上）2.引物設計時引入酶切位點，PCR產物酶切后直接克隆到目標載體上3.將平末端PCR產物直接克隆到平末端酶切載體上。 方法3主要是針對高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶，N
把PCR產物克隆到載體上常見有3種做法：1.直接克隆到T載體（或者U載體上）2.引物設計時引入酶切位點，PCR產物酶切后直接克隆到目標載體上3.將平末端PCR產物直接克隆到平末端酶切載體上。 方法3主要是針對高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶，N
與PCR、qPCR等技術一樣，作為分子實驗室必備手段，分子克隆技術被廣泛用于多樣的基因功能研究。所謂分子克隆指的是在體外將核酸分子插入病毒、質粒或其他載體分子，構成遺傳物質的新組合，使之進入宿主細胞內并獲得持續穩定增殖能力和表達。 基因克隆技術的發展經歷3個階段，第一階段為經典的T4 DN
實驗方法原理TA克隆 系統由Invitrogen公司（San Diego，CA）發展而來的商業性試劑盒，它用于PCR 產物的克隆 和測序。其原理是利用Taq酶能夠在PCR 產物的3'末端加上一個非模板依賴的A，而T載體是一種帶有3'T突出端的載體，在連接酶作用下，可以快速地、一步到位
六、重組質粒的轉化【實驗目的】學習和掌握感受態細胞的制備方法和轉化實驗的基本操作。【實驗原理】將重組質粒轉入大腸桿菌的過程稱為轉化。轉化所用的大腸桿菌需要用物理或化學方法特殊處理，使重組DNA分子容易進入細胞內，被處理后易于接納DNA分子的細胞稱作感受態細胞。下面介紹感受態細胞的制備。【實驗試劑與器
【實驗原理】1．DNA重組技術重組DNA(Recombinant DNA)技術是遺傳工程的核心技術，也是人類在基因和DNA分子水平進行操作的技術。它包括以下幾個步驟： 1）重組DNA分子的構建：即將目的基因（DNA或cDNA片段）與載體DNA重組，應用TA克隆方法,將PCR擴增產物快速克隆至質粒
TA克隆 系統可以用于快速地、一步到位地把PCR 產物直接插入到質粒載體的多克隆 位點（MCS）中。實驗方法原理PCR產物克隆大致分為兩類，即平頭連接和粘頭連接。平頭連接是將制備好的平頭載體和補平或削平的PCR 產物直接進行連接。載體可用EcoR V或Sma I切成平頭；PCR 產物純化后，可以在2
實驗原理 PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法，它類似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs；而體外PCR反應同樣需要類似的成分，有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列，實現對特
一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合
在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主
實驗常見問題解答匯集(一) BSP甲基化擴增得到的PCR產物可否直接測序，為什么需要構建TA克隆后測序？ 由于基因組DNA的每個CG位點甲基化程度各不相同，未發生甲基化的C會被重亞硫酸鹽修飾成為U，而C若發生甲基化則不變，這樣如果進行PCR產物測序就有可能在原有的C位點得到雙峰圖，
BSP甲基化擴增得到的PCR產物可否直接測序，為什么需要構建TA克隆后測序？由于基因組DNA的每個CG位點甲基化程度各不相同，未發生甲基化的C會被重亞硫酸鹽修飾成為U，而C若發生甲基化則不變，這樣如果進行PCR產物測序就有可能在原有的C位點得到雙峰圖，無法確定甲基化的程度，必需通過回收PCR產物，進
快速TA克隆的突破T載體是TA克隆載體的簡稱，就是利用載體的T末端和PCR產物的A末段連接而將目的基因克隆到載體中的方法。目前市場上常見的T載體，根據連接方法可以分成兩種：方法1、以T4連接酶進行連接的方法，這種方法的載體有promega、takara；可以說這兩家公司將這兩種方法發揮到了很高的水平
實驗方法原理 在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。實驗材料 寡核
實驗方法原理 在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起
隨著分子生物學研究發展的不斷廣泛和深入，PCR已成為一門相當成熟的常規技術，而熱聚合酶（即Taq酶）的合理選擇是PCR成敗與否的一個關鍵因素。目前市面上有多種Taq酶，能夠滿足多方面的實驗需要。那么，如何選擇最合適的Taq酶？根據用戶經常考慮的指標，如特異性、保真性、耐熱性、擴增速率、擴增片段長度、
聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）技術是基因擴增技術的一次重大革新，是分子生物學發展史中的一個重要里程碑。使用PCR擴增技術，可以將極微量的靶DNA片段特異地擴增上百萬倍，大大提高了對DNA分子的分析和檢測能力。PCR技術具有敏感度高、特異性強、快速簡便等優
聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）技術是基因擴增技術的一次重大革新，是分子生物學發展史中的一個重要里程碑。使用PCR擴增技術，可以將極微量的靶DNA片段特異地擴增上百萬倍，大大提高了對DNA分子的分析和檢測能力。PCR技術具有敏感度高、特異性強、快速簡便等優
PCR克隆概述 克隆技術是分子生物學實驗的核心技術之一。通過PCR擴增獲得的DNA片段通常需要克隆到質粒載體中，用于測序、亞克隆、表達等后續實驗。利用Taq DNA聚合酶在產物的3’-端添加一個突出A堿基的特點而設計的TA克隆技術，使得PCR產物克隆變得更加方便、高效：PCR
隨著高通量測序技術的普及與基因組信息爆炸式的增長，解析基因與基因組孕藏的功能信息成為我們了解生命密碼的必需步驟。功能基因研究是破解基因組信息這部天書的重要手段之一，而功能基因的研究離不開載體的構建與轉基因方法。傳統的載體構建耗時耗力，伴隨著煩瑣的酶切與連接手段，成功地構建一個用于植物轉化的載體往
PCR實驗技術指南之引物設計 所謂“工欲善其事，必先利其器”，這年頭手工設計引物的人似乎不多，還是用軟件方便些，防止你一不小心看走眼，丟一個堿基，同時計算起來也方便。設計軟件有很多，既可以在線設計,也可以用Prime
所謂“工欲善其事，必先利其器”，這年頭手工設計引物的人似乎不多，還是用軟件方便些，防止你一不小心看走眼，丟一個堿基，同時計算起來也方便。設計軟件有很多，既可以在線設計(如Primer3 http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi)，