高效液相色譜之高效反相液相色譜（一）
反相色譜（reversed phasc chromatography, RPC）是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在高效液相色譜中這是應用面最廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，流動相多采用酸性的、低離子強度的水溶液，并加一定比例的能與水互溶的異丙醇、乙腈或甲醇等有機改性劑，大量使用的填料為孔徑在30納米以上的硅膠烷基鍵合相，除此之外，也有少量高聚物微球。實驗表明，烷基鏈長對蛋白質的反相保留沒有顯著的影響，但在蛋白質的活性回收上短鏈烴基（如C4，C8，苯基）和長鏈烷基（如C18，C22）反相填料是有區別的。表現在烷基鏈越長，固定相的疏水性越強，因而為使蛋白質較快洗脫下來，需要增加流動相的有機成分。過強的疏水性和過多的有機溶劑會導致蛋白質的不可逆吸附和生物活性的損失。總起來說，在烷基鍵合硅膠上的反相色......閱讀全文
高效液相色譜之高效反相液相色譜（一）
反相色譜（reversed phasc chromatography, RPC）是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在高效液相色譜中這是應用面最廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色
高效液相色譜之高效反相液相色譜（二）
附：色譜柱操作說明，（以迪馬公司Diamonsil(TM)柱為例）1. 色譜柱常規參數訂貨號：Catalog.No. ? ? ? ? ? ? 產品ZL號 Serial No.出廠日期 ?Date填料 ?Column Paking ? ? 如，Diamonsil(TM)鉆石C18 5цm柱規格 Col
高效反相液相色譜
反相色譜（reversed phasc chromatography, RPC）是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在高效液相色譜中這是應用面最廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液
高效反相液相色譜
實驗方法原理反相色譜（reversed phasc chromatography, RPC）是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在高效液相色譜中這是應用面最廣的一種分離模式，在生物大分子的反
反相高效液相色譜
方案1 蛋白質 RP-HPLC 的標準色譜條件 方案2 填充 RP-HPLC 毛細管微柱 方案3 不易分離的大分子量多肽的純化實驗 方案4 用 RP-HPLC 對固相合成的多肽進行純化實驗 方案5 用 RP-HPLC 技術對多肽和蛋白質混合
高效反相液相色譜
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 反相色譜（reversed phasc chromatography, RPC）是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高
反相高效液相色譜
實驗材料 蛋白質標樣試劑、試劑盒 乙睛（HPLC級）去離子水（HPLC級） 三氟乙酸（TFA)儀器、耗材 HPLC 色譜系統 反相柱實驗步驟 1.進行空白或對照層析譜分析（即在步驟①中不加樣）。一般這是進行一天層析工作的開始。下面是推薦使用的用于 RP-HPLC 系統評估的標準色譜條件。（1）線性梯
反相高效液相色譜概述
結果與保留值之間的關系：利用RP-HPLC 分離多肽首先得確定不同結構的多肽在柱上的保留情況。為了獲得一系列的保留系數，Wilce 等利用多線性回歸方法對2106 種肽的保留性質與結構進行分析，得出了不同氨基酸組成對保留系數影響的關系，其中極性氨基酸殘基在2～20 氨基酸組成的肽中，可減少在柱上
反相高效液相色譜2
方案2 填充 RP-HPLC 毛細管微柱試劑、試劑盒甲醇n-丙醇反相硅膠TFA 乙腈溶劑體系儀器、耗材水浴超聲波儀色譜加樣器層析柱玻璃料末端接口環氧樹脂流動池正向光學掃描檢測器加熱槍加樣器液相色譜柱填充泵微柱聚丙烯離心管聚硅酸鹽管藍寶石切刀信號數據收集裝置硅膠隔膜Teflon接頭UV檢測器實驗步驟一
反相高效液相色譜3
方案3 不易分離的大分子量多肽的純化實驗實驗材料大分子量非極性多肽或蛋白質儀器、耗材層析柱HPLC 系統冷凍干燥器微量離心機標準的或專用 HPLC 儀器氮氣實驗步驟一、用于 RP-HPLC 純化的大分子非極性多肽或蛋白質樣品的制備1.將多肽樣品（如果蛋白質是通過固相化學合成法得到的，質量在 30~5
反相高效液相色譜4
方案4 用 RP-HPLC 對固相合成的多肽進行純化實驗實驗材料用于分析的肽或蛋白試劑、試劑盒丙酮乙腈（HPLC級）2 -丙醇乙醇硝酸鈉硫酸鈉硫脲三氟乙酸儀器、耗材分析型 HPLC 裝置離心機錐形瓶玻璃容器Hamilton 玻璃注射器氮氣冷凍干燥機流動相過濾裝置氦氣制備型 HPLC 裝置實驗步驟一、
反相高效液相色譜5
方案5 用 RP-HPLC 技術對多肽和蛋白質混合物進行脫鹽實驗實驗材料蛋白質或多肽樣品試劑、試劑盒乙腈（HPLC級）2 -丙醇硝酸鈉硫脲三氟乙酸儀器、耗材分析型 HPLC 裝置色譜柱洗脫液瓶Hamilton 玻璃注射器氮氣量筒微量離心機流動相過濾裝置實驗步驟一、流動相的配制1.配制緩沖液 A(弱流
反相高效液相色譜6
方案6 計算機輔助方法優化梯度條件的 RP-HPLC 蛋白質分離實驗實驗材料HPLC 肽標準品蛋白質樣品試劑、試劑盒丙酮乙腈（HPLC級）磷酸磷酸二氫鈉硫脲硝酸鈉三氟乙酸儀器、耗材分析型 HPLC 裝置色譜柱洗脫液瓶Hamilton 玻璃注射器氮氣量筒微量離心機流動相過濾裝置實驗步驟一、配制流動相以
反相高效液相色譜1
方案1 蛋白質 RP-HPLC 的標準色譜條件實驗材料蛋白質標樣試劑、試劑盒乙睛（HPLC級）去離子水（HPLC級）三氟乙酸（TFA)儀器、耗材HPLC 色譜系統反相柱實驗步驟1.進行空白或對照層析譜分析（即在步驟①中不加樣）。一般這是進行一天層析工作的開始。下面是推薦使用的用于 RP-HPLC 系
反相高效液相色譜的原理
在反相液相色譜中，固定相的極性小于流動相，洗脫順序取決于溶質分子的疏水性，疏水性強的保留時間長！
高效液相色譜之高效排阻液相色譜
高效液相色譜（High Rerformance Liquid Chromatography, HPLC）又叫高壓、高速、近代液相色譜，通常叫做高效液相色譜。它是60年代中期才建立的一種高效快速分離化合物的方法，到了70年代后期才廣泛用于蛋白質的分離純化方面，現已成為分離純化蛋白質非常有效的方
高效液相色譜知識（一）
一、液相色譜理論發展簡況色譜法的分離原理是：溶于流動相(mobile phase)中的各組分經過固定相時，由于與固定相(stationary phase)發生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。色譜法
反相高效液相色譜柱的維護如何？
反相高效液相色譜柱是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高。???? 在高效液相色譜中這是應用面較廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，流動相多采用酸性的、低離子強度的水溶液，并加一
反相高效液相色譜柱的維護如何？
反相高效液相色譜柱是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高。???? 在高效液相色譜中這是應用面較廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，流動相多采用酸性的、低離子強度的水溶液，并加一
高效液相色譜技術
高效液相色譜（HPLC：High Performance Liquid Chromatography ）是化學、生物化學與分子生物學、醫藥學、農業、環保、商檢、藥檢、法檢等學科領域與專業最為重要的分離分析技術，是分析化學家、生物化學家等用以解決他們面臨的各種實際分離分析課題必不可缺少的工具。國際市場
高效液相色譜原理
以高壓下的液體為流動相，并采用顆粒極細的高效固定相的柱色譜分離技術。構造可分為高壓輸液泵，色譜柱，進樣器，檢測器以及數據獲取與處理系統等部分。與氣相色譜法相比，液相色譜法不受樣品揮發性和熱穩定性及相對分子質量的限制，只要求把樣品制成溶液即可，非常適合于分離生物大分子、離子型化合物，不穩定的天然產物以
高效液相色譜特點
①高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。 ②高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內即可完成，一般小于1小時。 ③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離
高效液相色譜柱
一、怎樣選擇色譜柱現代高效液相色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解。（1）硅膠基質填料：1、正相色譜正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica），以及其他具有極性官能團，如胺基團（NH2，APS）和氰基團（CN，C
高效液相色譜原理
液相色譜儀是一款以用戶為核心的智能化的色譜儀，具有常規HPLC的基本性能，并擴展了更多智能化的功能，能很好的滿足用戶的各類不同的應用要求，使用戶能更加輕松的使用，并獲得準確的分析數據。一、原理：高效液相色譜法的原理是在原始的經典色譜法基礎上面引用氣象色諧的理論，色譜柱則是用特殊的方式用小顆粒裝填而成
高效液相色譜原理
液相色譜儀是一款以用戶為核心的智能化的色譜儀，具有常規HPLC的基本性能，并擴展了更多智能化的功能，能很好的滿足用戶的各類不同的應用要求，使用戶能更加輕松的使用，并獲得準確的分析數據。一、原理：高效液相色譜法的原理是在原始的經典色譜法基礎上面引用氣象色諧的理論，色譜柱則是用特殊的方式用小顆粒裝填而成
高效液相色譜原理
以高壓下的液體為流動相，并采用顆粒極細的高效固定相的柱色譜分離技術。構造可分為高壓輸液泵，色譜柱，進樣器，檢測器以及數據獲取與處理系統等部分。與氣相色譜法相比，液相色譜法不受樣品揮發性和熱穩定性及相對分子質量的限制，只要求把樣品制成溶液即可，非常適合于分離生物大分子、離子型化合物，不穩定的天然產物以
高效液相色譜分類
按照分離原理分類，大概可以分為：1.吸附色譜：基于各組分對固定相的吸附能力不同而實現分離的方法。比較常見的色譜柱是火星硅膠、氧化鋁、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等。用于測定結構異構體。2.分配色譜：基于樣品在流動相和固定相之間溶解度不同的原理實現分離。比較常見的正相氰基柱（正相）和極為普遍的C18色譜柱（
高效液相色譜原理
色譜法是一種分離技術，試樣混合物的分離過程也就是試樣中各組分在稱之為色譜分離柱中的兩相間不斷進行著的分配過程。 其中的一相固定不動，稱為固定相； 另一相是攜帶試樣混合物流過此固定相的流體（氣體或液體），稱為流動相。 當流動相中攜帶的混合物流經固定相時，其與固定相發生相互作用。由于混合物中各組分在性質
高效液相色譜原理
采用高效液相色譜（HPLC）法分離單糖和寡糖，較多采用氨基柱，乙腈和水作為流動相，此法具有完全分離麥汁、發酵液和啤酒中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和麥芽三糖的優點。本文采用Hypersil NH2柱分析麥汁、發酵液和啤酒中三糖以內的可發酵糖。至今尚未見到采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法分離測
高效液相色譜積分
正常操作不建議手工積分，手工積分會人為的帶來誤差，同一次測定的對照品和樣品的色譜圖最好是在設定一個固定的積分條件進行積分計算，積分參數一致的情況下進行可減少人為主觀意識上的誤差。