反相高效液相色譜
實驗材料 蛋白質標樣試劑、試劑盒 乙睛（HPLC級）去離子水（HPLC級） 三氟乙酸（TFA)儀器、耗材 HPLC 色譜系統 反相柱實驗步驟 1.進行空白或對照層析譜分析（即在步驟①中不加樣）。一般這是進行一天層析工作的開始。下面是推薦使用的用于 RP-HPLC 系統評估的標準色譜條件。（1）線性梯度：從 0~100% 的溶劑 B，溶劑 A 是 0.1% 的 TFA 水溶液 (體積分數），溶劑 B 是含 0.09%TFA 的 60% 乙腈水溶液；（2）梯度率：1%B/min(即 60 min 內溶劑 B 從 O 到 100%);（3）流速：lml/min(4.6 mm 內徑層析柱）；0.lml/min(2.1 mm 內徑層析柱）（4）溫度：40~45°C。2.標樣蛋白（對照組）色譜分析。在步驟①中，對于 4.6 mm 層析柱來說，注入 1OOul 標樣蛋白（0.lmg/ml)(即每標樣蛋白為 10ug，流速為 lml/min......閱讀全文
高效反相液相色譜
實驗方法原理反相色譜（reversed phasc chromatography, RPC）是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在高效液相色譜中這是應用面最廣的一種分離模式，在生物大分子的反
高效反相液相色譜
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 反相色譜（reversed phasc chromatography, RPC）是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高
反相高效液相色譜
方案1 蛋白質 RP-HPLC 的標準色譜條件 方案2 填充 RP-HPLC 毛細管微柱 方案3 不易分離的大分子量多肽的純化實驗 方案4 用 RP-HPLC 對固相合成的多肽進行純化實驗 方案5 用 RP-HPLC 技術對多肽和蛋白質混合
高效反相液相色譜
反相色譜（reversed phasc chromatography, RPC）是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在高效液相色譜中這是應用面最廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液
反相高效液相色譜
實驗材料 蛋白質標樣試劑、試劑盒 乙睛（HPLC級）去離子水（HPLC級） 三氟乙酸（TFA)儀器、耗材 HPLC 色譜系統 反相柱實驗步驟 1.進行空白或對照層析譜分析（即在步驟①中不加樣）。一般這是進行一天層析工作的開始。下面是推薦使用的用于 RP-HPLC 系統評估的標準色譜條件。（1）線性梯
高效液相色譜之高效反相液相色譜（二）
附：色譜柱操作說明，（以迪馬公司Diamonsil(TM)柱為例）1. 色譜柱常規參數訂貨號：Catalog.No. ? ? ? ? ? ? 產品ZL號 Serial No.出廠日期 ?Date填料 ?Column Paking ? ? 如，Diamonsil(TM)鉆石C18 5цm柱規格 Col
高效液相色譜之高效反相液相色譜（一）
反相色譜（reversed phasc chromatography, RPC）是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在高效液相色譜中這是應用面最廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色
反相高效液相色譜1
方案1 蛋白質 RP-HPLC 的標準色譜條件實驗材料蛋白質標樣試劑、試劑盒乙睛（HPLC級）去離子水（HPLC級）三氟乙酸（TFA)儀器、耗材HPLC 色譜系統反相柱實驗步驟1.進行空白或對照層析譜分析（即在步驟①中不加樣）。一般這是進行一天層析工作的開始。下面是推薦使用的用于 RP-HPLC 系
反相高效液相色譜2
方案2 填充 RP-HPLC 毛細管微柱試劑、試劑盒甲醇n-丙醇反相硅膠TFA 乙腈溶劑體系儀器、耗材水浴超聲波儀色譜加樣器層析柱玻璃料末端接口環氧樹脂流動池正向光學掃描檢測器加熱槍加樣器液相色譜柱填充泵微柱聚丙烯離心管聚硅酸鹽管藍寶石切刀信號數據收集裝置硅膠隔膜Teflon接頭UV檢測器實驗步驟一
反相高效液相色譜3
方案3 不易分離的大分子量多肽的純化實驗實驗材料大分子量非極性多肽或蛋白質儀器、耗材層析柱HPLC 系統冷凍干燥器微量離心機標準的或專用 HPLC 儀器氮氣實驗步驟一、用于 RP-HPLC 純化的大分子非極性多肽或蛋白質樣品的制備1.將多肽樣品（如果蛋白質是通過固相化學合成法得到的，質量在 30~5
反相高效液相色譜5
方案5 用 RP-HPLC 技術對多肽和蛋白質混合物進行脫鹽實驗實驗材料蛋白質或多肽樣品試劑、試劑盒乙腈（HPLC級）2 -丙醇硝酸鈉硫脲三氟乙酸儀器、耗材分析型 HPLC 裝置色譜柱洗脫液瓶Hamilton 玻璃注射器氮氣量筒微量離心機流動相過濾裝置實驗步驟一、流動相的配制1.配制緩沖液 A(弱流
反相高效液相色譜6
方案6 計算機輔助方法優化梯度條件的 RP-HPLC 蛋白質分離實驗實驗材料HPLC 肽標準品蛋白質樣品試劑、試劑盒丙酮乙腈（HPLC級）磷酸磷酸二氫鈉硫脲硝酸鈉三氟乙酸儀器、耗材分析型 HPLC 裝置色譜柱洗脫液瓶Hamilton 玻璃注射器氮氣量筒微量離心機流動相過濾裝置實驗步驟一、配制流動相以
反相高效液相色譜概述
結果與保留值之間的關系：利用RP-HPLC 分離多肽首先得確定不同結構的多肽在柱上的保留情況。為了獲得一系列的保留系數，Wilce 等利用多線性回歸方法對2106 種肽的保留性質與結構進行分析，得出了不同氨基酸組成對保留系數影響的關系，其中極性氨基酸殘基在2～20 氨基酸組成的肽中，可減少在柱上
反相高效液相色譜4
方案4 用 RP-HPLC 對固相合成的多肽進行純化實驗實驗材料用于分析的肽或蛋白試劑、試劑盒丙酮乙腈（HPLC級）2 -丙醇乙醇硝酸鈉硫酸鈉硫脲三氟乙酸儀器、耗材分析型 HPLC 裝置離心機錐形瓶玻璃容器Hamilton 玻璃注射器氮氣冷凍干燥機流動相過濾裝置氦氣制備型 HPLC 裝置實驗步驟一、
反相高效液相色譜的原理
在反相液相色譜中，固定相的極性小于流動相，洗脫順序取決于溶質分子的疏水性，疏水性強的保留時間長！
反相高效液相色譜柱的維護如何？
反相高效液相色譜柱是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高。???? 在高效液相色譜中這是應用面較廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，流動相多采用酸性的、低離子強度的水溶液，并加一
反相高效液相色譜柱的維護如何？
反相高效液相色譜柱是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高。???? 在高效液相色譜中這是應用面較廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，流動相多采用酸性的、低離子強度的水溶液，并加一
反相高效液相層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 TFA乙腈鹽酸胍儀器、耗材 層析柱HPLC進樣器實驗步驟 1. ?用經脫氣的HPLC級水洗去反相柱的有機溶劑，梯度從100%有機溶劑到100%水，流速1 ml/min，持續15 min 以上。?2. ?以100%的TFA/乙腈緩沖液平衡柱子至柱壓和光吸收值達到恒定。用1
反相高效液相層析實驗
多肽和蛋白質的分離 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒
反相高效液相色譜的固定相是什么
反相高效液相色譜的固定相是非極性溶劑，常見的固定相是十八烷基鍵合硅膠，流動相是極性溶劑，常見的流動相是甲醇，乙腈。反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系，它正好與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系（正相色譜）相反。
反相高效液相色譜的固定相是什么
反相高效液相色譜的固定相是非極性溶劑，常見的固定相是十八烷基鍵合硅膠，流動相是極性溶劑，常見的流動相是甲醇，乙腈。反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系，它正好與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系（正相色譜）相反。RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基鍵合硅膠，
反相高效液相色譜的固定相是什么
反相高效液相色譜的固定相是非極性溶劑，常見的固定相是十八烷基鍵合硅膠，流動相是極性溶劑，常見的流動相是甲醇，乙腈。反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系，它正好與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系（正相色譜）相反。RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基鍵合硅膠，
何謂反相液相色譜
液-液色譜有正相和反相之分。如果采用極性固定相和相對非極性流動相，就稱為正相；如果采用相對非極性固定相和極性流動相，則稱為反相。由于極性化合物更容易被極性固定相所保留，所以正相液-液色譜系統一般可用于分離極性化合物。相反，反相液-液色譜系統一般可用于分離非極性或弱極性化合物。正相色譜的流出順序是極性
反相高效液相色譜緩沖體系PH的選定
反相高效液相色譜中緩沖體系PH值的選擇在反相高效液相色譜分析中，選擇正確的緩沖液PH值，對可離解的化合物分析的重現性十分重要，不恰當的PH值可能導致不對稱峰，寬峰，分裂峰或肩峰，而尖銳的，對稱的峰是定量分析中獲得低的檢測限以，兩次分析之間較低的相對標準偏差(RSD)和保留時間的高重現性的前提。我
反相高效液相色譜柱使用維護注意事項
??? 作為基于極性流動相和非極性固定相所組成的液相色譜體系，反相高效液相色譜柱是通過表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，根據一般有機分子的結構中具有非極性的疏水部分，同時疏水部分越大，一般保留值越高的性質，反相高效液相色譜柱進行相應的工作。? 為盡可能減少日常中不正確色譜操作對反向液相色譜柱的損
反相高效液相色譜柱的原理及使用維護
反相高效液相色譜柱是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在高效液相色譜中這是應用面較廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，流動相多采用酸性的、低離子強度的水溶液，并加一定比例的能
反相高效液相色譜柱的保護要怎么做
反相高效液相色譜柱的填料常是以硅膠為基質，表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分先被沖洗出，而極性弱的組分會在色譜柱上有更強的保留。? 選擇合適的色譜柱可以縮短方法開發時間，并使開發的方
反相高效液相色譜的固定相是什么，流動相有什么
反相高效液相色譜的固定相是非極性溶劑，常見的固定相是十八烷基鍵合硅膠，流動相是極性溶劑，常見的流動相是甲醇，乙腈。反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系，它正好與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系（正相色譜）相反。RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基鍵合硅膠，
反相高效液相色譜柱是一種怎樣的色譜模式
反相高效液相色譜柱是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在高效液相色譜中這是應用面較廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，流動相多采用酸性的、低離子強度的水溶液，并加一定比例的能
高效液相色譜之高效排阻液相色譜
高效液相色譜（High Rerformance Liquid Chromatography, HPLC）又叫高壓、高速、近代液相色譜，通常叫做高效液相色譜。它是60年代中期才建立的一種高效快速分離化合物的方法，到了70年代后期才廣泛用于蛋白質的分離純化方面，現已成為分離純化蛋白質非常有效的方