重組人胰島素的制備—下游純化工藝的研究（一）
摘要 建立了一套通過大腸桿菌表達(H is) 62A rg2A rg2人胰島素原[ (H is) 62A rg2A rg2human p ro insulin,RRhP I]制備重組人胰島素的工藝。將大腸桿菌中以包涵體形式表達的RRhP I 依次經過DEA E2瓊脂糖快流速陰離子交換層析, Sephadex G225 層析, 重組復性酶切轉化和Superdex75 分子篩, 制備重組人胰島素。SDS2PA GE、HPLC、氨基酸組成分析和小鼠驚厥實驗結果證明, 制備的重組人胰島素具有天然生物活性, 而且純度較高。關鍵詞 重組人胰島素 純化 DEA E2瓊脂糖快流速陰離子交換劑 Superdex751 引 言分離純化是基因工程藥物生產中極其重要的一環, 這是由于工程菌經過大規模培養后, 產生的有效成分含量很低, 雜質含量卻很高; 另外由于基因工程藥物是從轉化細胞, 而不是從正常細胞生產的, 因此對產品的純度要求也高......閱讀全文
重組人胰島素的制備—下游純化工藝的研究（一）
摘要 建立了一套通過大腸桿菌表達(H is) 62A rg2A rg2人胰島素原[ (H is) 62A rg2A rg2human p ro insulin,RRhP I]制備重組人胰島素的工藝。將大腸桿菌中以包涵體形式表達的RRhP I 依次經過DEA E2瓊脂糖快流速陰離子交換層析, Se
重組人胰島素的制備—下游純化工藝的研究（二）
3. 2 復性及重折疊經過初步純化的RRhP I 通過Sephadex G225柱層析脫尿素并轉換緩沖液為50 mmo l?L 甘氨酸2N aOH, pH9. 5。層析圖譜(見圖3) , 有2 個層析峰,峰2 主要為折疊趨于正確的單體RRhP I, 收集峰2。進行SDS2PA GE 分析。結
下游純化工藝簡介-2
（2）樣品預處理a、去除樣品中顆粒物（0.45-0.22微米膜過濾或者10000 g離心15分鐘）b、去除樣品中脂類（10000 g離心15分鐘或有機溶劑抽提）c、去除樣品中核酸（加入核酸酶消化或者使核酸沉淀）d、抑制樣品中蛋白水解酶（加入蛋白酶抑制劑、低溫下快速第一步分離或在蛋白酶缺陷宿主中表達重
下游純化工藝簡介-3
4、蛋白質的來源 （1）天然蛋白： 天然產物中的目的蛋白一般含量很少而且組分極復雜，在分離過程中須采用多個步驟才能去除各種雜質，并應在整個過程中降低蛋白水解酶的活性。 （2）重組蛋白： 重組蛋白則目標蛋白的豐度較高。重組蛋白主要有三種表達定位： a、細胞質：在這種情況下，必須
下游純化工藝簡介-4
2、離子交換色譜（ion exchange chromatography）蛋白質、多肽均屬于兩性電解質，在緩沖液pH小于其等電點時，帶凈正電荷，而在緩沖液pH大于其等電點時，帶凈負電荷。陰離子交換凝膠本身帶有正電荷基團，陽離子交換凝膠本身帶負電荷基團。由于靜電相互作用而使樣品結合到凝膠上，再采用鹽濃
下游純化工藝簡介-1
Downstream（下游）與上游相對的概念，一般而言，上游指基因克隆、細胞培養等目的產物表達工序，下游指從表達有目的產物的復雜的混合液中分離純化得到符合要求的目的產物的一系列步驟。美、日、歐等發達國家生物技術產品工業化的實踐證明：生物技術產品的產業化高度依賴于基因工程下游工序技術及設備的進步。一、
水的純化與超純水的制備（一）
摘要?????? 這是一篇關于水的純化和超純水制備的綜述。介紹了各種純化水的技術與某些新近的進展。包括蒸餾法、離子交換法、電滲析法、反滲透法和紫外線照射法等。關鍵部分?? 水的純化?? 超純水?? 離子交換?? 電滲析?? 反滲透?? ?一、??????????? 前言關于高純水的制備在聞瑞梅先生等
超純化水質的主要工藝
??天然水中常見雜質包括可溶性無機物、有機物、顆粒物、微生物、可溶性氣體等。超純水機就是要盡可能徹底地去處這些雜質。?? 目前常用凈化水質的工藝方法有蒸餾法、反滲透法、離子交換法、過濾法、吸附法、紫外氧化法等。超純水機一般可以將水的純化過程大致分為4大步，預處理（初級凈化）、反滲透（生產出純水），離
蛋白質純化武器——工藝篇（一）
條條大路通羅馬，純化之路千萬條。本篇是寫給蛋白質純化新手的，就一些最常用的純化工藝、概念方法作一些列舉。以起始原料的不同來進行分類，分為：大腸桿菌、酵母、細胞培養、腹水、血清、生物組織六個板塊。?板塊一、大腸桿菌? ? （這里討論的大腸桿菌為非分泌到培養基中的重組蛋白，是否有重組蛋白分泌到培養基中的
高純萬古霉素制備色譜純化工藝
a 萬古霉素萬古霉素（Vancomycin）是抗生素的一種，其分子式為C66H74ClN9O24。其半衰期：4~8小時，腎衰竭天，對厭氧菌和革蘭氏陰性細菌無效，血液透析不會移除Vancomcin。在印度等南亞國家出現的 “超級病菌，已經蔓延到英國、美國、加拿大、澳大利亞、荷蘭等國家，國內專家稱南亞超