(1)SILVER SEQUENCETM DNA測序試劑盒。 (2)丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺儲備液(38%丙烯酰胺 W/V,2%甲叉雙丙烯酰胺 W/V):95g丙烯酰胺,5g甲叉雙丙烯酰胺溶于140ml 雙蒸水中,定容至250ml,0.45mm過濾器過濾后,貯于棕色瓶中,置于4℃冰箱可保存2周。(3)10%過硫酸銨,0.5g過硫酸銨溶于4ml水中,定容至5ml,應新配新用。 (4)10×TBE緩沖液(1 mol/L Tris, 0.83mol/L 硼酸,10mmol/L EDTA): 121.1g Tris,51.35g硼酸,3.72g Na2 EDTA ·2H2O,溶于雙蒸水中定容至1升,置于4℃下可貯存2周,其pH約為8.3。 (5)TBE電極緩沖液:10×TBE 緩沖液稀釋至1×TBE備用。 (6)TEMED (7)固定/停止溶液:10%冰醋酸(V/V)配制2升備用。 (8)染色溶液:硝酸銀2克,甲醛3ml......閱讀全文
(1)SILVER SEQUENCETM DNA測序試劑盒。 (2)丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺儲備液(38%丙烯酰胺 W/V,2%甲叉雙丙烯酰胺 W/V):95g丙烯酰胺,5g甲叉雙丙烯酰胺溶于140ml 雙蒸水中,定容至250ml,0.45mm過濾器過濾后,貯于棕色瓶中,置于4℃冰箱可保存2周
DNA測序儀,性能特點,自動化程度高,提供連續、無需監控的操作,自動灌膠、上樣、電泳分離、檢測及數據分析,可連續運行24小時無需人工干預。樣品分析量大,一束毛細管可同時對16個樣品進行全自動分析,一天可完成數百個樣品的測序或片段分析工作。先進的熒光檢測系統,采用光柵分光,CCD攝像機成像技術,實
染色過程要求凝膠浸在塑料盤中。因而至少使用兩個盤子,大小與玻璃板類似。在盤中加入新鮮溶液之前須用高質量的水洗滌盤子。 1.電泳完畢后用一個塑料片子小心地分開兩板,凝膠應該牢固地附著在短玻璃板上。 2. 固定凝膠:將凝膠(連玻璃板)放入塑料盤,用固定/停止溶液浸沒,充分振蕩20分鐘或直至樣品中
人類基因組這部由A、T、G、C四個字母組成的卷帙浩繁的生命天書如同一座寶庫,保藏著幾千年來人們迫切想知道的秘密,DNA測序技術就好似“芝麻開門”這樣的咒語,是我們打開寶庫的金鑰匙。世界上第一個測定DNA序列的方法是由英國生化學家弗雷德里克·桑格爾發明的。自此DNA測序的速度就一直呈加速態勢。20
DNA測序(DNA sequencing,或譯DNA定序)是指分析特定DNA片段的堿基序列,也就是腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)與鳥嘌呤的(G)排列方式。快速的DNA測序方法的出現極大地推動了生物學和醫學的研究和發現。 在基礎生物學研究中,和在眾多的應用領域,如診斷,生物技術,法醫
1. 對于每組測序反應,標記四個0.5ml eppendorf管(G、A、T、C)。每管加入2ml適當的d/ddNTP混合物(d/ddNTP Mix)。各加入1滴(約20ml)礦物油,蓋上蓋子保存于冰上或4℃備用。 2. 對于每組四個測序反應,在一個eppendorf管中混合以下試劑: (1
(1)當凝膠聚合完全后,撥出鯊魚齒梳,將該梳子反過來,把有齒的一頭插入凝膠中,形成加樣孔。 (2)立即將膠板固定在測序凝膠槽中,一般測序凝膠槽的上下槽是分開的,因而只有在固定好凝膠板后,方能加入TBE緩沖液。 (3)稀釋10×TBE緩沖液至1×TBE,將該緩沖液加入上下二個電泳槽中,去除產生
一、玻璃板的處理 銀染測序的玻璃板一定要非常清潔,一般先用溫水和去污劑洗滌,再用去離子水沖洗玻璃板,除去殘留的去污劑,最后用乙醇清洗玻璃板。玻璃板上遺留的去污劑微膜可能導致凝膠染色時背景偏高(棕色)。短玻璃板經粘合溶液處理可將凝膠化學交聯于玻璃板上。這一步對于在銀染操作過程中防止凝膠撕裂至關重
(1)玻璃板經粘合硅膠和Sigmacote處理后,即可固定玻璃板。該方法是用0.2mm或0.4mm厚的邊條置于玻璃板左右兩側,將另一塊玻璃板壓于其上。在長玻璃板的一側插入鯊魚齒梳平的一面邊緣,用夾子固定住。 (2)根據所需要的凝膠濃度,按下表制備測序凝膠,一般6%-8%的膠濃度可獲得較好的結果
高通量測序技術(High-throughput sequencing)又稱“下一代”測序技術("Next-generation" sequencing technology),以能一次并行對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定和一般讀長較短等為標志。 根據發展歷史、影響力、測序原理和技術不同