原代細胞的培養與建系3
下面為美國標準細胞庫或細胞銀行（ATCC）入庫細胞的基本要求： （1）培養簡歷 組織來源日期、物種、組織來源、性別、年齡、供體正常或異常健康狀態，細胞已傳代數等。 （2）凍存液 培養基和保護劑名稱。 （3）細胞活力 凍融前后細胞接種存活率和生長特性(生長繁殖曲線，分裂指數等)。 （4）培養液 培養基種類和名稱、血清來源及濃度。 （5）細胞形態 類型，如上皮或成纖維細胞等。 （6）核型 二倍體或多倍體，標記染色體有或無。 （7）無污染情況 包括細胞、真菌、支原體、原蟲和病毒等。 （8）物種檢測&......閱讀全文
原代細胞的培養與建系-3
下面為美國標準細胞庫或細胞銀行（ATCC）入庫細胞的基本要求：???（1）培養簡歷?組織來源日期、物種、組織來源、性別、年齡、供體正常或異常健康狀態，細胞已傳代數等。???（2）凍存液?培養基和保護劑名稱。???（3）細胞活力?凍融前后細胞接種存活率和生長特性(生長繁殖曲線，分裂指數等)。???（4
原代細胞的培養與建系-3
（二）消化分離法組織消化法是把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后，細胞容易
原代細胞的培養與建系
凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。細胞的純化或細胞克隆技術是細胞培養工作的基礎。 原代細胞的取材 人和動物細胞的取材是原代細胞培養成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養。 一、取材的基本要求 1．取材要注意新鮮和保鮮 2．應嚴格無菌
原代細胞的培養與建系-2
（四）骨髓、羊水、胸/腹水細胞取材 取上述標本時，除嚴格無菌，注意抗凝外，還要盡快分離培養，一般無需其他處理，離心后，用無鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養液洗一次后即可培養，不宜低溫存放。具體操作詳見后面有關章節。 （五）動物組織取材 1、鼠胚組織取材 首先用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物，然
原代細胞的培養與建系-4
4.軟瓊脂克隆分離法???本法僅適用于懸浮培養的類淋巴細胞或惡性程度高的貼壁細胞，而正常貼壁細胞在軟瓊脂中不能形成克隆。???（1）將對數生長期的細胞制成單個細胞懸液(貼壁細胞用0.25%胰蛋白酶消化使之分散成單個細胞)作活細胞計數。調整細胞濃度至1×106細胞/L，然后根據實驗要求再作梯倍稀釋。通
原代細胞的培養與建系-4
（2） 膠原酶（Collagenase）消化法 ? 膠原酶是一種從細菌中提取出來的酶，對膠原有很強的消化作用。適于消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織，它對細胞間質有較好的消化作用，對細胞本身影響不大，可使細胞與膠原成分脫離而不受傷害。該酶分離效果好，即使有鈣、鎂離子存在仍有活性，故可用
原代細胞的培養與建系-5
三、原代細胞的培養方法原代細胞的培養也叫初代培養 是從供體取得組織細胞在體外進行的首次培養，是建立細胞系的第一步，是一項基本技術。原代細胞因剛從組織中分離開，生物學特性未發生很大變化，仍保留原來的遺傳特性，也最接近和反映體內生長特性，適宜用于藥物敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。原代細胞往往有多種細胞
原代細胞的培養與建系-1
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??原代細胞的培養與建系???細胞的來源多樣，培養方法也各不相同，凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。原代細胞經分散接種之手段稱為傳代。凡能經傳代方式進行再次培養的細胞稱為傳代細胞。若能穩定生長傳至10~20
原代細胞的培養與建系-2
(二)原代細胞的維持???1、貼壁細胞（包括半貼壁細胞的換液）???貼壁細胞長成網狀或基本單層時，由于營養缺乏，代謝產物增多，pH變酸，不適宜細胞生長，此時細胞還未長成單層，未達到飽和密度，仍需繼續培養，因此，需采取換液方式來更新營養成分以滿足細胞繼續生長繁殖的需要。其換液方法比較簡單，即棄去舊液，
原代細胞的培養與建系-1
細胞的來源多樣，培養方法也各不相同，凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。原代細胞經分散接種之手段稱為傳代。凡能經傳代方式進行再次培養的細胞稱為傳代細胞。若能穩定生長傳至10~20代以上的細胞可確立為細胞系。若有條件能開展單細胞克隆、純化，經大量擴增