WIKI資訊
表達不同于其它一些實驗，比如：提取質粒、PCR 、電鏡切片，這些人為控制的因素比較多，出問題相對來說也比較好分析。表達呢，你把質粒克隆好啦，交給細胞，然后有些事情就不全是你要怎樣就怎樣了。原核表達在表達當中來說還是比較簡單，細菌培養條件簡單、生長速度快，需要的儀器和培養基都比較便宜。當然，它也存在一些缺乏高級修飾、細胞內部還原性過高等缺點。 原核表達從一開始的設計就非常重要，所謂好的開始是成功的一半。做足準備功夫，可是省去很多將來后悔的事情。首先，我們要根據是否要求可溶將載體分成兩大類，如果希望可以同時嘗試多種表達系統，也有許多商業化的系統供選擇。 前面已經介紹過許多公司的商業化載體、菌株和多系統表達體系，現在我想先從自己的蛋白分析講起。同樣的載體、同樣的系統，很可能表達這個蛋白表達 量奇高，但是另外一個就是做不出來，所以沒有萬......閱讀全文
人們合成與生物相關的物質是從尿素開始的，1828年，德國化學家維勒人工合成了存在于生物體的這種有機物。在1960年我國科學家采用化學方法首次成功地合成了具有生物活性的蛋白質——胰島素。隨著內切酶的發現和基因工程技術的發展，人們發現用各種不同的載體在原核、真核系統中進行蛋白表達更為行之有效。而這其中大
基因重組—層析法 實驗方法原理 攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPT
實驗方法原理 攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPTG誘導下，超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共價偶連的次氨基三乙酸（NTA）使鎳離子（Ni2+）固相化的層析介質加以提純，實為金屬熬合親和層析（MCAC）。蛋白質的純化程
蛋白質表達、分離、純化可以：（1）探索和研究基因的功能以及基因表達調控的機理；（2）供作結構與功能的研究；（3）作為催化劑、營養劑等。實驗方法原理攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPTG誘導下，超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共
（第二代高通量測序技術-454） 轉錄組即特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和，是研究細胞表型和功能的一個重要手段。與基因組不同的是，轉錄組的定義中包含了時間和空間的限定。同一細胞在不同的生長時期及生長環境下，其基因表達情況是不完全相同的。羅氏GS-FLX-Titanium第二代
（第二代高通量測序技術-454） 轉錄組即特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和，是研究細胞表型和功能的一個重要手段。與基因組不同的是，轉錄組的定義中包含了時間和空間的限定。同一細胞在不同的生長時期及生長環境下，其基因表達情況是不完全相同的。羅氏GS-FLX-Titaniu
（第二代高通量測序技術-454） 轉錄組即特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和，是研究細胞表型和功能的一個重要手段。與基因組不同的是，轉錄組的定義中包含了時間和空間的限定。同一細胞在不同的生長時期及生長環境下，其基因表達情況是不完全相同的。羅氏GS-FLX-Titaniu
（第二代高通量測序技術-454） 轉錄組即特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA的總和，是研究細胞表型和功能的一個重要手段。與基因組不同的是，轉錄組的定義中包含了時間和空間的限定。同一細胞在不同的生長時期及生長環境下，其基因表達情況是不完全相同的。羅氏GS-FLX-Titaniu
[實驗原理] 將克隆化基因插入合適載體后導入大腸桿菌用于表達大量蛋白質的方法一般稱為原核表達。這種方法在蛋白純化、定位及功能分析等方面都有應用。大腸桿菌用于表達重組蛋白有以下特點：易于生長和控制；用于細菌培養的材料不及哺乳動物細胞系統的材料昂貴；有各種各樣的大腸桿菌菌株及與之匹配的具
實驗概要將克隆化基因插入合適載體后導入大腸桿菌用于表達大量蛋白質的方法一般稱為原核表達。這種方法在蛋白純化、定位及功能分析等方面都有應用。大腸桿菌用于表達重組蛋白有以下特點：易于生長和控制；用于細菌培養的材料不及哺乳動物細胞系統的材料昂貴；有各種各樣的大腸桿菌菌株及與之匹配的具各種特性的質粒可供選擇
一、雜交通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
在基因表達研究中，研究者比較注意選擇合適的表達載體和宿主系統，而往往忽視基因本身是否與載體和宿主系統為最佳匹配這樣一個實質性問題。基因的最佳化表達可以通過對基因的重新設計和合成來實現，如消除稀有密碼子而利用最佳化密碼子，二級結構最小化，調整GC含量等。以下就密碼子最佳化、翻譯終止效率和真核細胞
基因融合或易位可能產生功能改變的嵌合蛋白，也可能重新排列基因啟動子，通過激活原癌基因或抑制抑癌基因導致細胞信號通路紊亂，它們在腫瘤的發生過程中扮演著重要的角色。[1,3] 例如，BCR–ABL1融合會導致酪氨酸激酶活性以及下游PI3K和MAPK信號通路的組成型激活，使細胞逃避凋亡，實現無限增殖。
圖1. 與細胞內蛋白表達相比，無細胞蛋白表達系統能夠顯著地節約時間。 與基于細胞的蛋白表達系統相比較，無細胞蛋白表達系統具有獨特的優勢，包括節約時間、提高具有功能的、可溶的、全長蛋白的總體產量。本文介紹了根據模板類型、期望產率以及下游實驗等因素來選擇無細胞蛋白表達系統的標
通過首位串聯可以實現HEV線性表位較高效的表達。 Cloning and expression a linear epitope from hepatitis E virusXIA Xiaobing, HUANG Rutong, LI Derong. (Institute of Microbio
在基因表達研究中，研究者比較注意選擇合適的表達載體和宿主系統，而往往忽視基因本身是否與載體和宿主系統為最佳匹配這樣一個實質性問題。基因的最佳化表達可以通過對基因的重新設計和合成來實現，如消除稀有密碼子而利用最佳化密碼子，二級結構最小化，調整GC含量等。以下就密碼子最佳化、翻譯終止效率和真
4． DNA序列分析a. Sanger的雙脫氧鏈終止法Cambridge的F. Sanger在1977年發明用雙脫氧鏈終止法測定單鏈DNA的序列，其基本原理如下：①DNA聚合酶能夠用單鏈DNA作為模板，合成準確的DNA互補鏈；②該酶能夠用2'，3'--雙脫氧核苷三磷酸作底物并將其聚合
1. 了解實驗課題對目的蛋白的要求包括：目的蛋白分子量有多大，表達目的（是蛋白結晶、藥劑結合還是制備抗體，不同目的對蛋白要求不同）；是否要其可溶；是胞內表達還是分泌表達，是組成型表達還是誘導型表達；另外，還要了解蛋白表達后需要采用什么樣的方式進行純化，純化標簽有多大，蛋白純化后是否需要將標簽去除（即
近日，中國科學院分子植物科學卓越創新中心/植物生理生態研究所合成生物學重點實驗室研究員覃重軍研究團隊及其合作者在國際上首次人工創建了單條染色體的真核細胞。該成果于北京時間8月2日發表在《自然》上，是合成生物學領域具有里程碑意義的突破。人造單染色體酵母與天然酵母細胞對比圖，兩者形態相似，但染色體的
人類能否創造生命？“上帝”的特權能否交由人類自己掌控？選擇與人類有1/3同源基因的真核模式生物釀酒酵母為突破口，將其天然16條染色體融合改造為1條巨大染色體，這個合成生物學領域開展的“異想天開”的結構設計與工程化實施，終于夢想成真！ 合成生物學領域里程碑式的突破 中國科學院分子植物科學卓越創
近日，中國科學院分子植物科學卓越創新中心/植物生理生態研究所合成生物學重點實驗室研究員覃重軍研究團隊及其合作者在國際上首次人工創建了單條染色體的真核細胞。該成果于北京時間8月2日發表在《自然》上，是合成生物學領域具有里程碑意義的突破。人造單染色體酵母與天然酵母細胞對比圖，兩者形態相似，但染色體的
中國科學院分子植物科學卓越創新中心/植物生理生態研究所今早宣布，其合成生物學重點實驗室覃重軍研究團隊與合作者在國際上首次人工創建了單條染色體的真核細胞，該成果于8月2日在國際知名學術期刊《自然》在線發表。該成果完全由中國科學家獨立完成，是合成生物學具有里程碑意義的重大突破。 人類能否創造生命？
中國科學院分子植物科學卓越創新中心/植物生理生態研究所合成生物學重點實驗室覃重軍研究團隊與合作者在國際上首次人工創建了單條染色體的真核細胞，該成果于北京時間2018年8月2日在國際知名學術期刊《自然》在線發表。這一成果在中科院B類先導專項“細胞命運可塑性的分子機制與調控”以及國家自然科學基金委
覃重軍研究員在觀察單染色體酵母的生長情況中國科學院分子植物科學卓越創新中心/植物生理生態研究所合成生物學重點實驗室覃重軍研究團隊與合作者在國際上首次人工創建了單條染色體的真核細胞，該成果于北京時間2018年8月2日在國際知名學術期刊《自然》在線發表。這一成果在中科院B類先導專項“細胞命運可塑性的分子
（3）插入表達篩選法與插入失活相反，插入表達法是外源目的基因插入特定載體后，能激活用于篩選操作的標記基因的表達，由此進行轉化子的篩選。設計載體時，在篩選標記基因前面連接一段具有抑制作用的負調控序列，插入外源DNA將使該負調控序列失活，其下游的篩選標記基因才能表達。例如質粒pTR262有一個負調控的c
大規模基因組測序計劃的實施已改變生命科學的重心，在相當短的時期內，一些原核生物和某些低等真核生物的基因組序列已被測定. 1995年，流感嗜血桿菌基因組序列首次被破譯，在此后不到兩年的時間，近50個細菌的基因組序列已被完成. 然而，這僅僅是理解有機物功能的一個起點. 在基因組時代，許多DNA序列信
大規模基因組測序計劃的實施已改變生命科學的重心，在相當短的時期內，一些原核生物和某些低等真核生物的基因組序列已被測定. 1995年，流感嗜血桿菌基因組序列首次被破譯，在此后不到兩年的時間，近50個細菌的基因組序列已被完成. 然而，這僅僅是理解有機物功能的一個起點. 在基因組時代，許多DNA序列信息僅
直接點樣法最早由Stanford大學Brown實驗室發展而來，是將微量的寡聚核苷酸片段、cDNA或蛋白質等通過特定的高速點樣機器人直接排列到玻片等介質上，生物大分子探針通過共價鍵或離子鍵與特殊處理的玻片相連，從而制備成芯片。直接點樣法主要包括3個重要的環節：探針