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    熒光素酶的種類以及應用

    在細胞和基因的微觀世界中研究探索,遺傳報告基因是非常有用的"可視化和量化"工具,具有廣泛的應用。熒光素酶(螢光素酶)以出色的靈敏度、使用方便、可以定量檢測而成為理想的報告基因。熒光素酶不是特定的分子,是一類中能催化產生生物發光的酶的統稱,不同來源的熒光素酶各有特點,可催化底物發出不同顏色的光,有的還可以配合進行雙色發光檢測。這種酶最早的來源,也是最有代表性一種來自學名為Photinus pyrali'的北美螢火蟲體內的螢光素酶,之所以稱為螢光素酶,一方面也有助于區分需要激發光源才可以生成激發熒光的熒光蛋白,而螢光素酶是一個催化底物分解的發光反應,熒光素酶在細胞內沒有背景,因此可以檢測非常微弱的表達,靈敏度更高。不過,隨著發光檢測設備的不斷推進和升級,生物發光靈敏度高,檢測方便的優勢使得這類酶與熒光蛋白一起漸有取代其他報告基因的趨勢。于是,越來越多新的并非來自螢火蟲的新熒光素酶進入市場,不再是“......閱讀全文

    活體生物發光成像技術的最新進展

    活體動物體內光學成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物發光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術。生物發光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA,而熒光技術則采用熒光報告基團(GFP、RFP, Cyt及dyes等)進

    小動物活體成像

    小動物活體成像主要采用生物發光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術。生物發光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA,而熒光技術則采用熒光報告基團(GFP、RFP, Cyt及dyes等)進行標記。利用一套非常靈敏的光學檢測儀器,讓研究人員能夠直

    小動物活體成像

    小動物活體成像   主要采用生物發光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術。生物發光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA,而熒光技術則采用熒光報告基團(GFP、RFP, Cyt及dyes等)進行標記。利用一套非常靈敏的光學

    雙熒光素酶報告基因測試

    在用螢火蟲熒光素酶定量基因表達時 ,通常采用第二個報告基因來減少實驗的變化因素。但傳統的共報告基因(比如CAT,β-Gal,GUS)不夠便利。因為各自的測試化學,處理要求,檢測特點存在差異。Promega提供一種先進的雙報告基因技術,結合了螢火蟲熒光素酶測試和海洋腔腸熒光素酶測試。雙熒光素酶報告基因

    哺乳動物細胞抽提物中熒光素酶的測定

    哺乳動物細胞抽提物中熒光素酶的測定實驗             實驗方法原理 螢光素酶是理想的報告基因,因為哺乳動物細胞中

    哺乳動物細胞抽提物中熒光素酶的測定

    單細胞凝膠電泳實驗可應用于: (1)快速檢測單細胞DNA損傷; (2)遺傳毒性生物監測; (3)確定精子細胞中DNA片段化的程度。實驗方法原理螢光素酶是理想的報告基因,因為哺乳動物細胞中不含內源性螢光素酶,一旦轉錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶,同時在所有的化學發光反應中,它的光產物具有最高的量子效

    熒光素酶的作用原理及應用

    熒光素酶(luciferase)是自然界中能夠產生生物熒光的酶的總稱。熒光素酶可以催化熒光素氧化成氧化熒光素,在熒光素氧化的過程中,會發出生物熒光。然后可以通過熒光測定儀測定熒光素氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發光體系,可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達,是檢測轉錄因子與目的基因

    活體動物體內光學成像(四)

    3. 標記細菌(1) 細菌侵染研究可以用標記好的革蘭氏陽性和陰性細菌侵染活體動物, 觀測其在動物體內的繁殖部位、數量變化及對外界因素的反應。(2) 抗生素藥物利用標記好的細菌在動物體內對藥物的反應,醫藥公司和研究機構可用這種成像技術進行藥物篩選和臨床前動物實驗研究。4. 基因表達和蛋白質相互作用(1

    熒光素酶的作用原理及應用

    熒光素酶(luciferase)是自然界中能夠產生生物熒光的酶的總稱。熒光素酶可以催化熒光素氧化成氧化熒光素,在熒光素氧化的過程中,會發出生物熒光。然后可以通過熒光測定儀測定熒光素氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發光體系,可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達,是檢測轉錄因子與目的基因

    五種小動物活體成像專用設備特點、應用及優缺點比較 一

    摘要:隨著小動物成像技術的發展,活體小動物非侵襲性成像在臨床前研究中發揮著越來越重要的作用。本文圍繞五種小動物成像專用設備,綜述其特點及主要應用,比較各種設備的優勢和劣勢,總結小動物活體成像設備的發展趨勢。動物模型是現代生物醫學研究中重要的實驗方法與手段,有助于更方便、更有效地認識人類疾病的發生、發

    活體動物體內光學成像(五)

    3. 底物熒光素(Luciferin)是如何進入小鼠體內的?需要多少? 熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進入小鼠體內的,約一分鐘就可以擴散到小鼠全身。 大部分發表的文章中,熒光素的濃度是150mg/kg (見下圖)。20克的小鼠需要3毫克的熒光素,價錢約兩到三美元。常用方法是腹腔注射,擴散較慢

    活體動物體內成像技術文獻-2

    12. 藥物對蛋白質相互作用的影響Kinetics of regulated protein-protein interactions revealed with firefly luciferase complementation imaging in cells and living anima

    雙熒光素酶檢測的原理和應用

    一、熒光素酶報告基因的檢測原理熒光素酶(Luciferase)是生物體內催化熒光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化發光的一類酶的總稱,來自于自然界能夠發光的生物。自然界存在的熒光素酶來自螢火蟲、發光細菌、發光海星、發光節蟲、發光魚、發光甲蟲等。細菌熒光素酶對熱敏

    報告基因(report gene)的應用

    報告基因被廣泛地應用于細胞生物學中的基因表達和細胞相關內容的研究。常用的報告基因主要有GUS基因、CAT基因、hGH基因、Cato2ase基因、綠色熒光蛋白基因及螢火蟲熒光素酶基因等。在這些報告基因中螢火蟲熒光素酶基因因其表達產物-熒光素酶敏感性高,測定方法快速且宜于掌握,線性好,并且熒光素酶產生的

    報告基因的應用

    實驗概要報告基因被廣泛地應用于細胞生物學中的基因表達和細胞相關內容的研究。常用的報告基因主要有GUS基因、CAT基因、hGH基因、Cato2ase基因、綠色熒光蛋白基因及螢火蟲熒光素酶基因等。在這些報告基因中螢火蟲熒光素酶基因因其表達產物-熒光素酶敏感性高,測定方法快速且宜于掌握,線性好,并且熒光素

    哺乳動物細胞抽提物中熒光素酶的測定實驗

    實驗材料 用感興趣的 DNA 轉染的哺乳動物培養細胞試劑、試劑盒 細胞裂解緩沖液熒光素酶測定緩沖液熒光素溶液不含鈣鹽和鎂鹽的磷酸鹽緩沖液儀器、耗材 熒光光度計和光度計測置管橡膠棒實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液稀釋到適當濃度。細胞裂解緩沖液25 mmol/L 雙甘氨肽(pH7.8)15 mmol/L

    生物發光技術研究及其應用進展

    摘要:目的:了解生物發光種類、機理及其在醫學、生物科學、食品、環保等領域的應用。方法:對有關的文獻中生物發光種類、機理及其在上述領域的具體應用進行綜述。結果:生物發光有兩類,機理明確,應用廣泛。結論:生物發光在很多領域的應用日趨廣泛,對其深入了解和研究至關重要。生物發光是生物發光器在細胞或生物體內發

    生物發光技術研究及其應用進展

      摘要:   目的:了解生物發光種類、機理及其在醫學、生物科學、食品、環保等領域的應用。   方法:對有關的文獻中生物發光種類、機理及其在上述領域的具體應用進行綜述。   結果:生物發光有兩類,機理明確,應用廣泛。   結論:生物發光在很多領域的應用日趨廣泛,對其深入了解和研究至關重要。

    生物發光技術研究及其應用進展

      摘要:   目的:了解生物發光種類、機理及其在醫學、生物科學、食品、環保等領域的應用。   方法:對有關的文獻中生物發光種類、機理及其在上述領域的具體應用進行綜述。   結果:生物發光有兩類,機理明確,應用廣泛。   結論:生物發光在很多領域的應用日趨廣泛,對其深入了解和研究至關重要。

    生物發光技術研究及其應用進展

    摘要:目的:了解生物發光種類、機理及其在醫學、生物科學、食品、環保等領域的應用。方法:對有關的文獻中生物發光種類、機理及其在上述領域的具體應用進行綜述。結果:生物發光有兩類,機理明確,應用廣泛。結論:生物發光在很多領域的應用日趨廣泛,對其深入了解和研究至關重要。生物發光是生物發光器在細胞或生物體內發

    活體動物光學成像技術在中醫藥研究中的應用展望(一)

    活體動物體內光學成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物發光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術。生物發光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA,而熒光技術則采用熒光報告基團(GFP、RFP, Cyt及d

    熒光素酶和腔腸素Coelenterazine的選擇及使用

    熒光素酶 自然界中的熒光素酶:是自然界中能夠產生熒光的酶的系統,如發光真菌,發光海星,發光魚,發光節蟲,發光甲蟲等。 螢火蟲熒光素酶:目前常用的螢火蟲熒光素酶來源于北美螢火蟲(Photinus pyralis),是一個61KDa的單體酶,無需表達后修飾,直接具有完全酶活性,反應需要底物熒光素以及

    活體生物光學成像技術的應用

      作為一項新興的分子、基因表達的分析檢測技術,在體生物光學成像已成功應用于生命科學、生物醫學、分子生物學和藥物研發等領域,取得了大量研究成果,主要包括: 在體監測腫瘤的生長和轉移、基因治療中的基因表達、機體的生理病理改變過程以及進行藥物的篩選和評價等。   1、在體監測腫瘤的生長和轉移  

    活體熒光成像系統介紹(一)

    一、  技術簡介活體生物熒光成像技術(in vivo bioluminescence imaging)是近年來發展起來的一項分子、基因表達的分析檢測系統。它由敏感的CCD及其分析軟件和作為報告子的熒光素酶(luciferase)以及熒光素(luciferin)組成。利用靈敏的檢測方法,

    活體動物體內光學成像(一)

    活體動物體內光學成像主要采用生物發光與熒光兩種技術。生物發光是用熒光素酶基因標記細胞或DNA,而熒光技術則采用熒光報告基團(GFP、RFP, Cy5及Cy7等)進行標記。該技術最初是由美國斯坦福大學的科學家采用了世界上最優秀的高性能CCD研發與生產制造商Roper scientific公司最

    活體動物體內生物發光和熒光成像技術基礎原理與應用一

    活體動物體內生物發光和熒光成像技術基礎原理與應用簡介 文章目錄:一、活體生物發光成像技術二、活體動物熒光成像技術三、生物發光成像與熒光成像的比較四、活體動物可見光成像儀器原理與操作流程活體動物體內成像技術是指應用影像學方法,對活體狀態下的生物過程進行組織、細胞和分子水平的定性和定量研究的技

    應用MD微孔板讀板機和雙報告系統檢測NF-κB活性(三)

    熒光素酶檢測設定試劑盒中的試劑使用前需在室溫下孵育。向裝有2 . 2 m g 凍干底物的小瓶中加入220μL水混勻后即為螢火蟲酶底物。向裝有440μg凍干底物的小瓶中加入220μL水混勻后即為水蛭素腸桿菌素。用螢火蟲檢測緩沖液按1:50比例稀釋螢火蟲酶底物后即為螢火蟲工作液。用海腎熒光素酶緩沖液

    小動物活體成像技術

    1、背景和原理1999年,美國哈佛大學Weissleder等人提出了分子影像學(molecular imaging)的概念——應用影像學方法,對活體狀態下的生物過程進行細胞和分子水平的定性和定量研究。傳統成像大多依賴于肉眼可見的身體、生理和代謝過程在疾病狀態下的變化,而不是了解疾病的特異性分子事件。

    熒光素酶報告基因檢測的操作步驟

    熒光素酶檢測系統,可用裂解液來溫和而快速地提取真核細胞中的熒光素酶,用其底物來檢測熒光素酶活性。檢測步驟如下:1. 加裂解緩沖液裂解轉染的細胞。2. 將上述裂解物轉移入微孔板或者試管中(根據檢測的需要選擇所用器材類型)。3. 加入含有所有酶反應成分(必須包括底物熒光素)

    活體動物體內成像技術文獻

    1. 細胞凋亡與白血病Activation of Apoptosis in Vivo by a Hydrocarbon-Stapled BH3 HelixSCIENCE 2004,305:1466-1470 通過對BCL-2蛋白家族BID的BH3結構域進行化學修飾,使其容易穿過細胞膜,在活

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