噬菌體展示技術研究RNA結合蛋白實驗（三）
4. 免疫印跡檢測外源蛋白的展示情況pDTSPLAY-B 空載體生成的噬菌體表面不含外源基因，僅有帶有 6 個組氨酸標簽和 Myc 標簽的錨定蛋白（基因 Ⅲ 編碼），此蛋白 SDS-PAGE 中的條帶在 65 kDa 的位置（實際 Mr 為 45 kDa）。pDISPLAY-B 載體中插入外源蛋白編碼基因后，條帶遷移率會明顯變慢。同時電泳兩塊 SDS-PAGE 膠，一塊膠用考馬斯亮藍染色觀察蛋白上樣量，另一塊膠轉膜進行免疫印跡檢測。(1) 電泳及轉膜制備常規 8% SDS-PAGE 膠，取 10 μl 噬菌體樣本，加入 10 μl 2X 蛋白電泳上樣緩沖液，100℃ 加熱 5 min 變性。同時制備兩份同樣的樣品上樣電泳。電泳完成后，一塊膠用考馬斯亮藍染色 15 min 至 60 min，脫色后觀察蛋白上樣量。另一塊膠用電轉移的方法將蛋白轉至硝酸纖維素膜，再進行下一步的免疫印跡檢測。(2) 免疫檢測常規操......閱讀全文
λ噬菌體的局限性λ噬菌體
實驗方法原理 本實驗以含原λ噬菌體和缺陷噬菌體λdg的雙重溶原菌gal+作為供體,經紫外線誘導后,獲取能轉導半乳糖發酵基因的高頻轉導噬菌體裂解液,然后讓這些轉導噬菌體將gal+基因轉移到受體菌gal-中去。實驗材料 供體菌 : Escherichia coli K12 F2 gal + (帶有原噬菌
Lambda噬菌體
·?????????Lambda DNA Preparation?(Stanford DNA Sequence & Technology Center)Detailed protocol for lambda DNA preparation with recipes·?????????Isolati
通過噬菌體ELISA鑒定得到的噬菌體克隆
經過3～4輪的篩選后，應該能夠富集到能與受體特異性結合的噬菌體群體。通常而言，在后幾輪的篩選中，每次獲得的噬菌體總量都會增加，但是單就這個現象并不一定能說明已經篩選到了受體特異性結合的肽段。能與靶分子非特異性結合或者能與篩選基質的噬菌體克隆也會造成這一現象。噬菌體ELISA可以說是最靈敏的鑒定所獲取
烈性噬菌體（virulent phage）和溫和噬菌體（temperate phage）
噬菌體(bacteriaphage or phage)是病毒的一類，結構很簡單，基本上由一個蛋白質外殼包裹著一些核酸組成的。噬菌體的多樣性來自于組成其外殼的蛋白質的種類，以及其染色體的類型和結構的不同。（一）烈性噬菌體（ virulent phage）遺傳學上應用最廣泛的烈性噬菌體是大腸桿菌（ E.
噬菌體的生長
Preparing Lawn Cells for M13 Cloning?(Life Technologies)Lawn cells require the F' episome for M13 infection and may be prepared??Streaking Lambda
什么是噬菌體
噬菌體是感染細菌、真菌、藻類 、放線菌或螺旋體等微生物的病毒的總稱，因部分能引起宿主菌的裂解，故稱為噬菌體。本世紀初在葡萄球菌和志賀菌中首先發現。作為病毒的一種，噬菌體具有病毒的一些特性：個體微小、不具有完整細胞結構、只含有單一核酸。可視為一種“捕食”細菌的生物。噬菌體基因組含有許多個基因，但所有已
噬菌體的概述
噬菌體(bacteriophage, phage)是感染細菌、真菌、藻類 、放線菌或螺旋體等微生物的病毒的總稱，因部分能引起宿主菌的裂解，故稱為噬菌體。本世紀初在葡萄球菌和志賀菌中首先發現。作為病毒的一種，噬菌體具有病毒的一些特性：個體微小；不具有完整細胞結構；只含有單一核酸。可視為一種“捕食”
λ噬菌體DNA提取
???λ噬菌體是最早使用的克隆載體，λ噬菌體的基因組是一長度約為50kb的雙鏈DNA分子，它在宿主細胞有兩種生活途徑，其一是裂解生長，環狀DNA分子在細胞內多次復制，合成大量噬菌體基因產物，裝配成噬菌體顆粒，裂解宿主菌再進行下一次感染；其二是溶源性生長，即感染細胞內λ噬菌體DNA整合到宿主菌染色體D
噬菌體抗體ELISA
實驗概要噬菌體ELISA是一種快速而便捷的方法，尤其是因為pⅧ有多拷貝會導致信號的擴增。主要試劑1. 2％MPBS2. PBS/Tween3. 辣根過氧化物酶(HRP)標記的小鼠抗噬菌體單克隆抗體(mAb)(Amer Sham BiOSCiences)4. 3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺(TMB)
噬菌體抗體ELISA
實驗概要噬菌體ELISA是一種快速而便捷的方法，尤其是因為pⅧ有多拷貝會導致信號的擴增。主要試劑1. 2％MPBS2. PBS/Tween3. 辣根過氧化物酶(HRP)標記的小鼠抗噬菌體單克隆抗體(mAb)(Amer Sham BiOSCiences)4. 3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺(TMB)