蛋白質合成實驗
實驗步驟材料無菌細胞培養，如 1X104～ 1X106 個細胞，24 孔板3H-亮氨酸。無血淸培養基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特異活性并不重要，因為它將由培養基中的亮氨酸濃度決定）非無菌SLS 或 SDS，1% (35m mol/L ) 溶于 0 .3 mol/L NaOH三氯醋酸（TCA)液閃瓶Eppendorf 管閃爍液，最小含水為 10%操作步驟1. 細胞生長至所需密度。2. 從孵箱中取出培養板，加人預溫的溶于培養液或 BSS 中的放射性同位素，稀釋度為 1:10 (如 l00ul/ml/孔）。3. 盡快地將細胞放回孵箱。4 . 繼續培養 4～24 h。提示： 不同的蛋白質更新率不盡相同。本操作程序并不針對任何特定的一種蛋白質，而可用于快速生長細胞中的總蛋白。當第一次用來測定一個細胞系的蛋白質合成時，要核實合成率在所選的孵育時間內是否呈線性。如果氨基酸池比飽和時低，可發生延遲。5......閱讀全文
蛋白質合成實驗
實驗步驟 材料無菌細胞培養，如 1X104～ 1X106 個細胞，24 孔板3H-亮氨酸。無血淸培養基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特異活性并不重要，因為它將由培養基中的亮氨酸濃度決定）非無菌SLS 或 SDS，1% (35m mol/L ) 溶于 0 .3 mol/L NaOH
蛋白質合成實驗
實驗步驟材料無菌細胞培養，如 1X104～ 1X106?個細胞，24 孔板3H-亮氨酸。無血淸培養基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特異活性并不重要，因為它將由培養基中的亮氨酸濃度決定）非無菌SLS 或 SDS，1% (35m mol/L ) 溶于 0 .3 mol/L NaOH三
蛋白質合成實驗
實驗步驟 材料 無菌 細胞培養，如 1X104～ 1X106 個細胞，24 孔板 3H-亮氨酸。無血淸培養基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特異活性并不重要，因為它將由培養基中的亮氨酸濃度決定） 非無菌 SLS 或
蛋白質合成實驗
實驗步驟 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 材料 無菌 細胞培養，如 1X104～ 1X106 個細胞，24 孔板 3H-亮氨酸。無血淸培養基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特異活性并不重要
蛋白質的生物合成標記實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 甲硫氨酸PBS儀器、耗材 培養箱離心管實驗步驟 1. ?培養懸浮細胞至對數增長期，室溫300 g 離心5 min。回收107~108細胞。?2. ?每2×107細胞用約10 ml 37℃的短時間標記培養基在圓錐型試管中洗滌，于室溫300 g 離心5 min 回收細胞，小
蛋白質的生物合成標記實驗
甲硫氨酸短時間標記懸液中的細胞 甲硫氨酸短時間標記貼壁培養細胞 甲硫氨酸對細胞進行脈沖追蹤標記 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質
蛋白質的生物合成標記實驗
甲硫氨酸短時間標記懸液中的細胞 甲硫氨酸短時間標記貼壁培養細胞 甲硫氨酸對細胞進行脈沖追蹤標記 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質
蛋白質的生物合成標記實驗（一）
甲硫氨酸短時間標記懸液中的細胞生物按照從脫氧核糖核酸 (DNA)轉錄得到的信使核糖核酸（mRNA）上的遺傳信息合成蛋白質的過程。由于mRNA上的遺傳信息是以密碼（見遺傳密碼）形式存在的，只有合成為蛋白質才能表達出生物性狀，因此將蛋白質生物合成比擬為轉譯或翻譯。實驗材料蛋白質試劑、試劑盒甲硫氨酸PBS
蛋白質的生物合成標記實驗（二）
實驗材料細胞試劑、試劑盒PBS甲硫氨酸儀器、耗材培養箱離心機實驗步驟1. ?在100 mm 直徑的培養皿上培養貼壁細胞（0.5~2×107）至70%~90%匯片，吸去培養液，用10 ml 于37℃短時間標記培養基輕輕搖晃冼兩次細胞。2. ?加入5 ml 于37℃短時間標記培養基，在5%CO2的加濕培
蛋白質的生物合成標記實驗（三）
實驗材料細胞試劑、試劑盒甲硫氨酸PBS儀器、耗材離心機培養箱實驗步驟1. ?準備和用［35S］甲硫氨酸標記細胞，用0.2~1 mCi/ml 的［35S］甲疏氨酸脈沖標記細胞5~30 min。?2. ?脈沖標記后，除去［35S］甲硫氨酸培養基，用10 ml 于37℃追加培養基冼細胞1次，加入10 ml
蛋白質合成的合成場所介紹
核糖體就像一個小的可移動的工廠，沿著mRNA這一模板，不斷向前迅速合成肽鏈。氨基酰tRNA以一種極大的速率進入核糖體，將氨基酸轉到肽鏈上，又從另外的位置被排出核糖體，延伸因子也不斷地和核糖體結合和解離。核糖體和附加因子一道為蛋白質合成的每一步驟提供了活性區域。
蛋白質的生物合成
生物按照從脫氧核糖核酸?(DNA)轉錄得到的信使核糖核酸(mRNA)上的遺傳信息合成蛋白質的過程。由于mRNA上的遺傳信息是以密碼(見遺傳密碼)形式存在的,只有合成為蛋白質才能表達出生物性狀,因此將蛋白質生物合成比擬為轉譯或翻譯。所以,RNA是蛋白質合成的直接模板。
蛋白質合成的概述
蛋白質合成是生物按照從脫氧核糖核酸 (DNA)轉錄得到的信使核糖核酸（mRNA）上的遺傳信息合成蛋白質的過程。由于mRNA上的遺傳信息是以密碼形式存在的，只有合成為蛋白質才能表達出生物性狀，因此將蛋白質生物合成比擬為轉譯或翻譯。蛋白質生物合成包括氨基酸的活化及其與專一轉移核糖核酸(tRNA)的連
蛋白質合成的過程
原核生物與真核生物的蛋白質合成過程中有很多的區別，真核生物此過程更復雜，下面著重介紹原核生物蛋白質合成的過程，并指出真核生物與其不同之處。蛋白質生物合成可分為五個階段，氨基酸的活化、多肽鏈合成的起始、肽鏈的延長、肽鏈的終止和釋放、蛋白質合成后的加工修飾。
什么是蛋白質合成？
蛋白質合成是指生物按照從脫氧核糖核酸 （DNA）轉錄得到的信使核糖核酸（mRNA）上的遺傳信息合成蛋白質的過程。 蛋白質合成是基因表達的第二步，也是產生基因產物蛋白質的最后階段。 蛋白質合成是生物按照從脫氧核糖核酸 (DNA)轉錄得到的信使核糖核酸（mRNA）上的遺傳信息合成蛋白質的過程。由
蛋白質合成的概念
蛋白質合成是指生物按照從脫氧核糖核酸?（DNA）轉錄得到的信使核糖核酸（mRNA）上的遺傳信息合成蛋白質的過程。蛋白質生物合成亦稱為翻譯（Translation），即把mRNA分子中堿基排列順序轉變為蛋白質或多肽鏈中的氨基酸排列順序過程。
蛋白質生物合成過程
1．氨基酸的活化與搬運：氨基酸的活化以及活化氨基酸與tRNA的結合，均由氨基酰tRNA合成酶催化完成。反應完成后，特異的tRNA3’端CCA上的2’或3’位自由羥基與相應的活化氨基酸以酯鍵相連接，形成氨基酰tRNA。 2．活化氨基酸的縮合——核蛋白體循環：活化氨基酸在核蛋白體上反復翻譯mRNA
蛋白質合成的過程
1．氨基酸的活化與搬運：氨基酸的活化以及活化氨基酸與tRNA的結合，均由氨基酰tRNA合成酶催化完成。反應完成后，特異的tRNA3’端CCA上的2’或3’位自由羥基與相應的活化氨基酸以酯鍵相連接，形成氨基酰tRNA。 2．活化氨基酸的縮合——核蛋白體循環：活化氨基酸在核蛋白體上反復翻譯mRNA
蛋白質合成的特點
真核生物翻譯起始的特點： 1.真核起始甲硫氨酸不需甲酰化。 2.真核mRNA沒有S-D序列，但5'端帽子結構與其在核蛋白體就位相關。帽結合蛋白（CBP）可與mRNA帽子結合，促進mRNA與小亞基結合。 3.肽鏈的延長 ：延長階段為不斷循環進行的過程，也稱核蛋白體循環。分為進位、成肽
克隆化基因體外合成蛋白質分析DNA蛋白質相互作用實驗
體外合成的蛋白質對于測定一個克隆的基因是否編碼一個特異的DNA結合蛋白， 以及分析DNA-蛋白質相互作用都是極為有用的。為了檢測DNA的結合能力，可將標 記的蛋白質與特異的DNA片段共溫育，用非變性丙烯酰胺凝膠電泳將蛋白質-DNA復 合物與游離的蛋白質分離開來。來源：《精編分子生物學實驗指南》第五版
蛋白質生物合成翻譯模板
不同mRNA序列的分子大小和堿基排列順序各不相同,但都具有5ˊ-端非翻譯區、開放閱讀框架區、和3ˊ-端非翻譯區;真核生物的mRNA的5ˊ-端還有帽子結構、3ˊ-端有長度不一的多聚腺苷酸(polyA)尾。帽子結構能與帽子結合,在翻譯時參與mRNA在核糖體上的定位結合,啟動蛋白質生物的合成;帽子結構和p
蛋白質生物合成的調控
生物體內蛋白質合成的速度,主要在轉錄水平上,其次在翻譯過程中進行調節控制。它受性別、激素、細胞周期、生長發育、健康狀況和生存環境等多種因素及參與蛋白質合成的眾多的生化物質變化的影響。由于原核生物的翻譯與轉錄通常是偶聯在一起的,且其mRNA的壽命短,因而蛋白質合成的速度主要由轉錄的速度決定。弱化作用是
動物能合成蛋白質嗎
動物能合成蛋白質，但是組成蛋白質的氨基酸并不是全都能合成而必須來自于食物。這部分不能自己合成的就叫“必須氨基酸”
簡述蛋白質合成的調控
生物體內蛋白質合成的速度,主要在轉錄水平上,其次在翻譯過程中進行調節控制。它受性別、激素、細胞周期、生長發育、健康狀況和生存環境等多種因素及參與蛋白質合成的眾多的生化物質變化的影響。由于原核生物的翻譯與轉錄通常是偶聯在一起的,且其mRNA的壽命短,因而蛋白質合成的速度主要由轉錄的速度決定。弱化作
蛋白質合成的過程簡介
1．氨基酸的活化與搬運：氨基酸的活化以及活化氨基酸與tRNA的結合,均由氨基酰tRNA合成酶催化完成。反應完成后,特異的tRNA3’端CCA上的2’或3’位自由羥基與相應的活化氨基酸以酯鍵相連接,形成氨基酰tRNA。 2．活化氨基酸的縮合——核蛋白體循環：活化氨基酸在核蛋白體上反復翻譯mRNA
蓖麻毒素抑制蛋白質合成
蓖麻毒素具有強烈的細胞毒性，屬于蛋白合成抑制劑或核糖體失活劑，這也是在構建免疫毒素時，應用到蓖麻毒素的主要原因。 合成的機理在20世紀70年代已經明確。首先，毒素依靠B鏈上的半乳糖結合位點與細胞表面含末端半乳糖殘基的受體結合，促進整個毒素分子以內陷方式進入細胞，形成細胞內囊，毒素從細胞內囊中進
真核細胞蛋白質合成過程
真核細胞中，核糖體進行蛋白質合成時，既可以游離在細胞質中，稱為游離核糖體（freeribosome）。也可以附著在內質網的表面，稱為膜旁核糖體或附著核糖體。參與構成RER，稱為固著核糖體或膜旁核糖體，是以大亞基圓錐形部與膜接著游離核糖體（freeribosome）。分布在線粒體中的核糖體，比一般核糖
蛋白質生物合成的調控
生物體內蛋白質合成的速度，主要在轉錄水平上，其次在翻譯過程中進行調節控制。它受性別、激素、細胞周期、生長發育、健康狀況和生存環境等多種因素及參與蛋白質合成的眾多的生化物質變化的影響。由于原核生物的翻譯與轉錄通常是偶聯在一起的，且其mRNA的壽命短，因而蛋白質合成的速度主要由轉錄的速度決定。弱化作用是
基因合成實驗
實驗材料?DNA試劑、試劑盒?dNTPDAN聚合酶乙醇TE限制性內切核酸酶緩沖液儀器、耗材?水浴鍋培養箱實驗步驟 1.? 將兩種寡核苷酸各1 μg加入微量離心管中，加水至17 μl，再加2 μl 的10×測序酶緩沖液。70℃加熱5 min，然后在合適的退火溫度下保溫5? min，取2 μl 留待以后
探針合成實驗
實驗材料 基因試劑、試劑盒 轉錄緩沖液DTTRNA酶抑制劑CTPATPGTPS-UTP乙酸銨乙酸銨乙醇儀器、耗材 水浴鍋離心機培養箱烘箱實驗步驟 1. ?在一個含SP6、T3或T7啟動子的載體中，插入目的基因。在編碼序列下游酶切使質粒呈線性。DNA以酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干。以無菌