等電聚焦電泳色譜儀分離技術介紹（二）
8、載體兩性電解質pH值梯度不穩定的原因：陰極漂移是指在等電聚焦電泳中pH梯度的堿性端逐漸消失的過程。反之，如果其酸性端逐漸消失則稱為陽極漂移。為了闡明等電聚焦電泳中pH值梯度不穩定的機制，提出了各種假說：（1）載體兩性電解質向陰、陽極的等速電泳遷移。（2）在陰極因CO2的吸附而引起陰極液組分和濃度的變化。（3）在pH梯度的中性區域生成一段純水，水的等電聚焦導致水在電泳柱中的聚集并向兩端反流。（4）不同等電點的載體兩性電解質的選擇性缺陷而引起不穩定。（5）載體兩性電解質帶電配體的結合或分離而引起不穩定。（6）載體兩性電解質相互反應的存在而引起不穩定。（7）相對遷移的氫離子和氫氧根離子濃度的不平衡。9、注意事項：（1）pH梯度的選擇。（2）添加中性載體兩性電解質。（3）電流降到最小且恒定時盡快結束電泳。（4）電泳結束后，檢測凝膠表面pH。（5）蛋白質在pI處形成沉淀，添加表面活性劑。二、固相pH梯度等電聚焦電泳：固相pH梯度等電聚......閱讀全文
等電聚焦電泳色譜儀分離技術介紹（二）
8、載體兩性電解質pH值梯度不穩定的原因：陰極漂移是指在等電聚焦電泳中pH梯度的堿性端逐漸消失的過程。反之，如果其酸性端逐漸消失則稱為陽極漂移。為了闡明等電聚焦電泳中pH值梯度不穩定的機制，提出了各種假說：（1）載體兩性電解質向陰、陽極的等速電泳遷移。（2）在陰極因CO2的吸附而引起陰極液組分和濃度
等電聚焦電泳色譜儀分離技術介紹（一）
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定、連續和線性的pH梯度中進行分離。按pH梯度的形成原理不同可分為載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳和固相pH梯度等電聚焦電泳。一、載體兩性電解質pH梯度等電聚焦電泳：1、理想的載體兩性電解質應具備的條件：載體兩性電解質是兩性分子
等電點聚焦電泳的技術介紹
中文名稱等電點聚焦電泳英文名稱isoelectric focusing electrophoresis定 義一種根據蛋白質等電點不同而將蛋白質在凝膠介質中分離的電泳方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
等電點聚焦電泳的技術介紹
聚丙烯酰胺凝膠電泳（ polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱PAGE），是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的一種常用電泳技術，用于分離蛋白質和寡核苷酸。
影響等電聚焦電泳色譜儀分離容量的因素
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定、連續和線性的pH梯度中進行分離。等電聚焦是在電泳介質中放入載體兩性電解質，當通以直流電時，載體兩性電解質形成一個由陽極到陰極逐步增加的pH梯度，不同的蛋白質移動到其相當的等電點位置上，聚焦于一個狹窄區帶中的過程。一、影響等電
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（二）
5.電泳操作步驟：1）將蛋白樣品于等體積的2×上樣緩沖液混合，10000×g離心5min以除去蛋白質沉淀；2）用微量注射器將蛋白質樣品加入到上樣空底部，注意不要溢出來。注意：對于考馬斯亮藍染色液來說，每個泳道10-30ug的蛋白混合粗提物（我們俗稱粗抗原）或者5-10ug單一蛋白組分是較合理的上樣濃
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（二）
6．電泳聚焦后處理測定pH梯度：1）將凝膠條切成0.5cm或1cm的小片；2）將每小片凝膠在1ml 10mM KCl中 浸泡30min；3）測讀此KCl溶液的pH值、凝膠的固定：1）將凝膠于10%三氯乙酸中浸泡10min；2）換成1%三氯乙酸溶液繼續浸泡至少2h以上，以去除載體兩性電解質，浸泡過夜可
等電聚焦電泳的技術特點
是將兩性電解質加入盛有pH梯度緩沖液的電泳槽中，當其處在低于其本身等電點的環境中則帶正電荷，向負極移動；若其處在高于其本身等電點的環境中，則帶負電向正極移動。當泳動到其自身特有的等電點時，其凈電荷為零，泳動速度下降到零，具有不同等電點的物質最后聚焦在各自等電點位置，形成一個個清晰的區帶，分辨率極高。
等電聚焦電泳色譜儀的特點
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定、連續和線性的pH梯度中進行分離。等電聚焦是在電泳介質中放入載體兩性電解質，當通以直流電時，載體兩性電解質形成一個由陽極到陰極逐步增加的pH梯度，不同的蛋白質移動到其相當的等電點位置上，聚焦于一個狹窄區帶中的過程。一、進行等電聚
毛細管等電聚焦電泳色譜儀分析技術
毛細管等電聚焦電泳色譜儀（CIEF）是以載體兩性電解質為介質，根據等電點差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術。一、載體兩性電解質應具備的條件：載體兩性電解質是兩性分子，使其在電泳柱中能達到一個平衡位置。載體兩性電解質可作為載體，但兩性電解質不能用于等電聚焦。只有載體兩性電解質，即具有好的電導和緩沖
等電點聚焦電泳
中文名稱等電點聚焦電泳英文名稱isoelectric focusing electrophoresis定 義一種根據蛋白質等電點不同而將蛋白質在凝膠介質中分離的電泳方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
什么是等電聚焦電泳技術？
等電聚焦（IEF）是利用有pH梯度的介質分離等電點不同的蛋白質的電泳技術，特別適合于分離分子量相近而等電點不同的蛋白質組分，在區帶電泳中分辨率最好。常用的pH梯度支持介質有聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠等。
毛細管電泳芯片等電聚焦分離
芯片等電聚焦分離芯片等電聚焦分離蛋白質的原理與常規毛細管等電聚焦基本相同，都是依據蛋白質的等電點(pI)不同而進行分離。Hofmann等首次將毛細管等應用于蛋白質分析。Li等在PDMS芯片和聚碳酸酯(PC)芯片上，采用等電聚焦模式分離廠牛血清白蛋白和增強型綠色熒光蛋白(EGFP)。Das等。26 3
芯片等電聚焦分離
芯片等電聚焦分離蛋白質的原理與常規毛細管等電聚焦基本相同，都是依據蛋白質的等電點(pI)不同而進行分離。Hofmann等首次將毛細管等應用于蛋白質分析。Li等在PDMS芯片和聚碳酸酯(PC)芯片上，采用等電聚焦模式分離廠牛血清白蛋白和增強型綠色熒光蛋白(EGFP)。Das等。26 3采用高聚物芯片，
高效毛細管等電聚焦電泳色譜儀分析技術
高效毛細管等電聚焦電泳色譜儀（CIEF）是以載體兩性電解質為介質，根據等電點差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術。一、載體兩性電解質應具備的條件：??????? 載體兩性電解質是兩性分子，使其在電泳柱中能達到一個平衡位置。載體兩性電解質可作為載體，但兩性電解質不能用于等電聚焦。只有載體兩性電解質，即
等電聚焦電泳（IEF）分離蛋白及測定蛋白質等電點
一、原理等電點聚焦（IEF）是在電場中分離蛋白質技術的一個重要發展，等電聚焦是在穩定的pH梯度中按等電點的不同分離兩性大分子的平衡電泳方法。在電場中充有兩性載體和抗對流介質，當加上電場后，由于兩性載體移動的結果，在兩極間逐步建立穩定的pH梯度，當蛋白質分子或其他兩性分子存在于這樣的pH梯度中時，這種
等電聚焦電泳色譜儀的檢測方法
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定、連續和線性的pH梯度中進行分離，檢測方法有染色法、掃描法和其它檢測方法。一、染色法：1、考馬斯亮藍染色法。2、銀染色法。3、同工酶染色法。4、專一蛋白染色法。5、熒光標記以及免疫法。二、掃描法：激光光源強度大，單色性好，掃描I
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
1.原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術可應用于：(1)蛋白質的分離提純；（2）蛋白質組學研究。實驗方法原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的p
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
1.原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在
等電聚焦（isoelectric－focusing，IEF）電泳技術
等電聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期問世的一種利用有pH梯度的介質分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。由于其分辨率可達0.01pH單位，因此特別適合于分離分子量相近而等電點不同的蛋白質組分。⒈IEF的基本原理 在IEF的電泳中，具有pH梯度的介質其分布是從陽極
電泳分析常用方法等電聚焦電泳技術
等電聚焦(isoelectric focusing,IEF)是60年代中期問世的一種利用有pH 梯度的介質分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。由于其分辨率可達0.01pH單位,因此特別適合于分離分子量相近而等電點不同的蛋白質組分。⒈IEF的基本原理 在IEF的電泳中,具有pH梯度的介質其分布是從陽極到
制備電泳實驗——等電聚焦制備電泳
實驗方法原理等電聚焦制備電泳是一種非變性制備技術。由于等電聚焦電泳技術的特點，因而是一種理想的制備方法。試劑、試劑盒電極液兩性電解質Ultrodex實驗步驟一、液體介質垂直柱狀蔗糖密度梯度等電聚焦是原瑞典 LKB 公司早期用于制備和分析目的的等電聚焦方法。載體兩性電解質在蔗糖密度梯度柱中形成 pH
毛細管等電聚焦電泳色譜儀分離蛋白質的原理
蛋白質是一種兩性電解質分子，當它在大于其等電點的pH環境中時，會解離成帶負電的離子，在電場中向正極泳動；當它在小于其等電點的pH環境中時，會解離成帶正電荷的離子，在電場中向負極泳動。這種泳動作用到達它的等電點的pH環境中，即它的凈電荷為零時才會停止，此時蛋白質在電場作用下的遷移運動與擴散運動達到平衡
等電聚焦電泳色譜儀pH梯度的類型
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同，在一個穩定的、連續的和線性的pH梯度中進行分離，具有靈敏度高、分辨率高和重復性好等特點，特別適合大批量純度檢測和真實性鑒定以及遺傳多樣性等群體生物學領域的研究。pH梯度按形成方式可分為載體兩性電解質pH梯度和固相pH梯度等。一、載體兩性電
蛋白質技術專題：蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（二）
8.常見問題及解釋1） 若產生模糊條帶則證明聚焦不完全，這可能是由于電泳中的問題或大分子蛋白質限制了其在凝膠中的遷移能力。若聚焦時間過長或過短，條帶的分辨率會下降。增加電壓梯度可以使帶形更加銳利。高分子量蛋白質在瓊脂糖凝膠中可以聚焦的更好。2） 產生歪斜的條帶通常由于不正確的pH梯度，檢查電極是否潔
蛋白質技術專題：蛋白等電聚焦凝膠電泳技術（二）
1） 若產生模糊條帶則證明聚焦不完全，這可能是由于電泳中的問題或大分子蛋白質限制了其在凝膠中的遷移能力。若聚焦時間過長或過短，條帶的分辨率會下降。增加電壓梯度可以使帶形更加銳利。高分子量蛋白質在瓊脂糖凝膠中可以聚焦的更好。 2） 產生歪斜的條帶通常由于不正確的pH梯度，檢查電極是否潔凈，是
毛細管電泳法的芯片等電聚焦分離系統介紹
芯片等電聚焦分離蛋白質的原理與常規毛細管等電聚焦基本相同，都是依據蛋白質的等電點(pI)不同而進行分離。Hofmann等首次將毛細管等應用于蛋白質分析。 Li等在PDMS芯片和聚碳酸酯(PC)芯片上，采用等電聚焦模式分離廠牛血清白蛋白和增強型綠色熒光蛋白(EGFP)。Das等。26 3采用高聚
等電聚焦和二維凝膠電泳實驗（二）
SDS-PAGELaemmli(1970) 描述的 SDS-PAGE 在很長一段時間內作為各種生化分析中分辨完整蛋白質的備選方法。這主要是因為對于疏水性很強的蛋白質,SDS 是最好的增溶去污劑，所有的蛋白質，包括堿性很強的蛋白質，都向同一方向移動, 分離取決于各自的表觀分子質量 (通常稱為分