抗體的制備方法與原理2
骨髓瘤細胞的培養可用一般的培養液，如RPMI1640，DMEM培養基。小牛血清的濃度一般在10%～20%，細胞濃度以104～5×105/ml為宜，最大濃度不得超過106/ml。當細胞處于對數生長的中期時，可按1：3～1：10的比例傳代。每3～5天傳代一次。細胞在傳代過程中，部分細胞可能有返祖現象，應定期用8-氮鳥嘌呤進行處理，使生存的細胞對HAT呈均一的敏感性。 （2）飼養細胞：在組織培養中，單個或少數分散的細胞不易生長繁殖，若加入其它活細胞，則可促進這些細胞生長繁殖，所加入的這種細胞數被稱為飼養細胞。在制備McAb的過程中，許多環節 需要加飼養細胞，如在雜交瘤細胞篩選、克隆化和擴大培養過程中，加入飼養細胞是十分必要的。常用的飼養細胞有：小鼠腹腔巨噬細胞（較為常用）、小鼠脾臟細胞或胸腺細胞。也有人用小鼠成纖維細胞系3T3經放射線照射后作為飼養細胞。飼養細胞的量為一般為2×104或105細胞/孔。 2．細胞融合的步驟 （1......閱讀全文
抗體的制備方法與原理-2
骨髓瘤細胞的培養可用一般的培養液，如RPMI1640，DMEM培養基。小牛血清的濃度一般在10%～20%，細胞濃度以104～5×105/ml為宜，最大濃度不得超過106/ml。當細胞處于對數生長的中期時，可按1：3～1：10的比例傳代。每3～5天傳代一次。細胞在傳代過程中，部分細胞可能有返祖現象，
抗體的制備方法與原理
一、抗血清的制備 有了質量好的抗原，還必須選擇適當的免疫途徑，才能產生質量好（特異性強和效價高）的抗體。 （一）用于免疫的動物 作免疫用的動物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數量，如
本生詳解抗體的制備方法與原理
抗血清的制備 有了質量好的抗原，還必須選擇適當的免疫途徑，才能產生質量好(特異性強和效價高)的抗體。 (一)用于免疫的動物 作免疫用的動物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數量，如般
單克隆抗體的制備方法-2
（2）飼養細胞：在組織培養中，單個或少數分散的細胞不易生長繁殖，若加入其它活細胞，則可促進這些細胞生長繁殖，所加入的這種細胞數被稱為飼養細胞。在制備McAb的過程中，許多環節 需要加飼養細胞，如在雜交瘤細胞篩選、克隆化和擴大培養過程中，加入飼養細胞是十分必要的。常用的飼養細胞有：小鼠腹腔巨噬細胞（較
抗肽抗體的制備實驗2
實驗材料 抗體 試劑、試劑盒 磷酸鈉緩沖液MBS二甲基酰胺EDTAPBS 儀器、耗材 分光光度計離心機 實驗步驟 1. ?將10 mg 的血藍蛋白溶于2 ml pH10的硼酸緩沖液中，置于15 ml 的玻璃試管中，溫和振搖。 2. ?加10 μmol
單克隆抗體制備過程與原理
單克隆抗體(MAb)是針專一的抗原決定簇產生的抗體，單克隆技術又名雜交瘤技術起源于1975年，由G.K?hler和Milstein創立。主要原理是利用產生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產抗體。單克隆抗體制備過程有以下幾個步驟，下面講簡要介紹。1、免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠
PCR技術的原理與方法（2）
?PCR反應的成分和作用?總體積：一般為25μl～100 μl?（一）無Mg2?buffer：由純水、kcl、Tris組成。Tris用于調節反應體系pH值，使Taq酶在偏堿性環境中反揮活性。kcl可降低退火溫度，但不能超過50 mmol/L，否則會抑制DNA聚合酶活性。?（二）Mg2?:終濃度為1.
RNAi實驗原理與制備方法（一）
實驗原理通過生化和遺傳學研究表明，RNA干擾包括起始階段和效應階段(inititation and effector steps)。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。證據表明；一個稱
RNAi實驗原理與制備方法（二）
3.用RNase III 消化長片斷雙鏈RNA制備siRNA其他制備siRNA的方法的缺陷是需要設計和檢驗多個siRNA序列以便找到一個有效的siRNA。而用這種方法——制備一份混合有各種siRNAs “混合雞尾酒” 就可以避免這個缺陷。選擇通常是200—1000堿基的靶mRNA模版，用體外轉錄
抗原的制備方法-2
表2－1 室溫下由S1提高到S2時每升加固體硫酸銨的克數 0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 0.95 1.00?0 55 113 114 175 209 242 278 3