用T7噬菌體DNA聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
試劑、試劑盒 去離子蒸餾水二硫蘇糖醇dNTP 和 ddNTP標記混合液和 ddNTP 延伸 終止混合液甲酰胺上樣緩沖液測序酶稀釋緩沖液測序酶反應緩沖液含MgCl2測序酶酵母無機焦磷酸酶寡核苷酸引物模板 DNA放射性化合物儀器、耗材 離心機和轉頭微量離心管或微量滴定板實驗步驟 材料緩充液和溶液去離子蒸餾水（冰預冷）二硫蘇糖醇（DTT)(100 mmol/L)dNTP 和 ddNTP，dNTP(0.5 mmol/L) 和 ddNTP(0.5 mmol/L) 儲液5X 標記混合液和 ddNTP 延伸/終止混合液（ddCTP、ddTTP、ddATP、ddGTP)這些反應混合液可按表 12-5 給出的溶液體積混合配制。甲酰胺上樣緩沖液測序酶稀釋緩沖液10 mmol/L Tris-Cl(pH7.5)5 mmol/L DTT0.5 mg/ml 牛血淸白蛋白-20°C 儲存5X 測序酶反應緩沖液，含 MgCl220......閱讀全文
用 T7 噬菌體 DNA 聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
本方案參照了 Tabor 和 Richardson(1987a,1989b,1990) 的方法，采用單鏈 DNA 模板進行 DNA 測序（有關單鏈 M13 噬菌體和質粒 DNA 制備，請參見第 3 章的方案 4、8 和第 12 章的方案 1)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美
用 T7 噬菌體 DNA 聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
試劑、試劑盒?去離子蒸餾水二硫蘇糖醇dNTP 和 ddNTP標記混合液和 ddNTP 延伸 終止混合液甲酰胺上樣緩沖液測序酶稀釋緩沖液測序酶反應緩沖液含MgCl2測序酶酵母無機焦磷酸酶寡核苷酸引物模板 DNA放射性化合物儀器、耗材?離心機和轉頭微量離心管或微量滴定板實驗步驟?材料緩充液和溶液去離子蒸
用 T7 噬菌體 DNA 聚合酶進行雙脫氧測序反應
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 去離子蒸餾水 二硫蘇糖醇 dNTP 和 ddNTP 標記混合液和 ddNTP 延伸 終止混合液 甲酰胺上樣緩沖液 測序酶稀釋緩沖
用 Taq DNA 聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
熱穩定 DNA 聚合酶除了在 PCR 反應中應用外，還可用來替代測序酶或 Klenow 片段進行雙脫氧鏈終止法測序。它在高溫下（70°C) 進行等溫鏈終止反應的能力可減少測序反應中由于模板 DNA 上引物假結合位點與引物退火錯配產生的問題，它還可用于富含二級結構模板的測序。本實驗源于分子克隆實驗指南
用 Taq DNA 聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
試劑、試劑盒 去離子蒸餾水ddNTPdNTP甲酰胺加樣緩沖液。酶和緩沖液。Taq 酶或類似的熱穩定 DNA 聚合酶Taq 酶稀釋緩沖液核酸和寡核苷酸寡核苷酸引物模板 DNA(100ug ul) 溶于 TE 中放射性化合物5'32P 標記的寡核苷酸引物儀器、耗材 微量離心管（0.5 ml) 或
用 Taq DNA 聚合酶進行雙脫氧測序反應實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 去離子蒸餾水 ddNTP dNTP 甲酰胺加樣緩沖液。酶和緩沖液。Taq 酶或類似的熱穩定 DNA 聚合酶 Taq 酶稀釋緩沖液
雙脫氧法DNA測序實驗——測序酶進行標記測序反應
在基本的雙晩氧測序反應中，寡核苷酸引物退火于單鏈DNA摸板，在4種脫氧核糖核酸三磷酸存在時，引物為DNA聚合酶所延伸。反應混合物中也含有4種雙脫氧核糖核苷三磷酸的其中一種，當它摻入到DNA的生長鏈時，可終止鏈的延伸。實驗材料DNA試劑、試劑盒寡核苷酸引物測序酶終止混合液測序酶緩沖液焦磷酸酶混合液儀器
用大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段進行雙脫氧測序實驗
當 Sanger 及其同事建立第一個 DNA 鏈終止延伸法時，只有一種合適的 DNA 聚合酶可用，即大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段。它具有在模板存在時聚合 dNTP 的活性，但缺乏完整聚合酶 I 的 5'-3'外切酶活性。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，
雙脫氧法DNA測序實驗——α-標記核苷酸進行熱循環測序反應
實驗材料DNA試劑、試劑盒DNA測序緩沖液dATPDNA聚合酶儀器、耗材熱心換反應裝置離心機實驗步驟1. ?對應于毎個待測模板，分別以A、G、C、T?標記好4個微量離心管。2. ?分別往標好A、G、C、T?的管子中，加A、G、C、T?測序混合液各3 μl。?3. ?對于單鏈模板：在0.5 ml 微量
雙脫氧法DNA測序實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 寡核苷酸引物測序酶終止混合液測序酶緩沖液焦磷酸酶混合液儀器、耗材 離心機離心管微量滴定板實驗步驟 1. ?對于每個單鏈模板：將下列試劑混合于0.5 ml 微量離心管中（1）0.5 pmol 單鏈DNA模板（2）0.5 pmol 引物（3）1 μl 10×測序酶緩沖液（4