用大腸桿菌DNA聚合酶IKlenow片段進行雙脫氧測序實驗
當 Sanger 及其同事建立第一個 DNA 鏈終止延伸法時，只有一種合適的 DNA 聚合酶可用，即大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段。它具有在模板存在時聚合 dNTP 的活性，但缺乏完整聚合酶 I 的 5'-3'外切酶活性。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒dATP去離子蒸餾水EDTA延伸 終止混合液和示蹤混合液甲酰胺上樣緩沖液Tris-Cl酶和緩沖液大腸桿菌 DNA 聚合酶ⅠKienow 片段核酸和寡聚核苷酸寡核苷酸引物單鏈 DNA 模板放射性化合物儀器、耗材離心機和轉頭微量離心管或微量滴定板實驗步驟材料緩沖液和溶液試劑、緩沖液，儲液的組成參見附錄 1, 儲液使用前稀釋到適當濃度。dATP(0.1 mmol/L)可選，參見步驟 4。去離子蒸餾水EDTA(10 mmol/L,pH8.0)延伸/終止混合液和示蹤混合液這些反應混合液......閱讀全文
大腸桿菌
? ? ??大腸細菌(E. coli)為埃希氏菌屬(Escherichia)代表菌。一般多不致病，為人和動物腸道中的常居菌，在一定條件下可引起腸道外感染。某些血清型菌株的致病性強，引起腹瀉，統稱病致病大腸桿菌。一、生物學性狀(一)形態與染色大小0.4～0.7×1～3um,無芽胞,大多數菌株有動力。有
大腸桿菌素或能殺死大腸桿菌本身
近日，英國諾丁漢大學生物分子科學中心研究人員表示，他們發現了對付大腸桿菌菌株的新線索。研究人員指明了如何使“細菌素”——能夠殺死其他細菌菌株的物質——進入細菌細胞進而殺死它，以及如何讓大腸桿菌產生的大腸桿菌素A有針對性地到另一個細胞蛋白(TolA)中創建一個新的“特洛伊木馬”武器，并最終從內部殺
大腸桿菌雜交
一、實驗原理Lederberg和Tatum（1946）選用典型的大腸桿菌為材料，篩選營養缺陷型。利用雙重和三重缺陷型的菌株，在簡單的合成培養基上混合培養，在此培養基上只有重組子能長，親本不能長，即所謂選擇性培養，使細菌雜交獲得成功。圖12-1說明了細菌的基因重組是不同基因型的細菌經接觸，接合后隨之發
大腸桿菌中毒表現
不同的致瀉性大腸埃希菌引起的中毒，癥狀各不相同。①產腸毒素性大腸埃希菌引起的中毒主要癥狀是水樣腹瀉、腹痛、惡心、低熱。每天腹瀉可達8～12次。②腸道侵襲性大腸埃希菌的中毒癥狀與志賀菌引起的痢疾相似，發熱、劇烈腹痛、水樣腹瀉、糞便中有少量粘液和血。③腸道致病性大腸埃希菌引起的中毒主要癥狀是發熱、不適、
大腸桿菌轉化實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 質粒DNA或重組DNA粘附在細菌細胞表面，經過42攝氏度短時間的熱擊處理，促進吸收DNA.然后在非選擇培養基中培養一代，待質粒上所帶的抗菌素基因表達，就可以在含抗菌素的培養基中生長。
大腸桿菌轉化實驗
熱擊法CaCl2轉化法一步法高效率電轉化法實驗方法原理質粒DNA或重組DNA粘附在細菌細胞表面，經過42攝氏度短時間的熱擊處理，促進吸收DNA.然后在非選擇培養基中培養一代，待質粒上所帶的抗菌素基因表達，就可以在含抗菌素的培養基中生長。實驗材料質粒DNA ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
大腸桿菌轉化實驗
實驗方法原理?質粒DNA或重組DNA粘附在細菌細胞表面，經過42°C短時間的熱擊處理，促進吸收DNA.然后在非選擇培養基中培養一代，待質粒上所帶的抗菌素基因表達，就可以在含抗菌素的培養基中生長。實驗材料?質粒DNA重組DNA試劑、試劑盒?LB培養基蒸餾水IPTGX-gal氨芐青霉素儀器、耗材?旋渦混
大腸桿菌轉化實驗
實驗方法原理質粒DNA或重組DNA粘附在細菌細胞表面，經過42攝氏度短時間的熱擊處理，促進吸收DNA.然后在非選擇培養基中培養一代，待質粒上所帶的抗菌素基因表達，就可以在含抗菌素的培養基中生長。實驗材料質粒DNA?重組DNA試劑、試劑盒LB培養基?蒸餾水?IPTG?X-gal?氨芐青霉素儀器、耗材旋
大腸桿菌介紹（二）
? 三、微生物學檢查法 （一)細菌的分離鑒定 1．標本：腸道外感染取中段尿、血液、膿液、腦脊液等，腹瀉者取糞便。 2．分離培養與鑒定：糞便標本直接接種腸道桿菌選擇性培養基。血液需先經肉湯增菌，再轉種血瓊脂平板。其他標本可同時接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養基。37℃孵育18～24小時后，觀察
質粒轉染大腸桿菌
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 感受態細胞易于接受外來基因成為重組細胞，實驗將質粒加入有感受態細胞的培養皿中，熱擊處理進行質粒轉染。 實驗材料 細胞株 質
大腸桿菌染色方法
考慮到你是觀察純凈水，大腸桿菌含量較少，首先用濾膜過濾濃縮，然后平板培養數菌落即可，如果要用顯微鏡觀察的話可以革蘭氏染色
什么是大腸桿菌
大腸桿菌是革蘭氏陰性菌，又叫大腸埃希菌，屬于人體內正常菌群，一般不致病。大腸桿菌周身有鞭毛，有菌毛，無芽孢，兼性厭氧，可以發酵葡萄糖等多種糖類，產酸并產氣。致病物質是可以分泌黏附素、外毒素和內毒素。大腸桿菌在正常情況下可以抵御外來致病菌的入侵和定植，對宿主起著保護作用；大腸埃希菌還可以利用人體攝入的
大腸桿菌介紹（一）
? 大腸細菌（E. coli)為埃希氏菌屬(Escherichia)代表菌。一般多不致病，為人和動物腸道中的常居菌，在一定條件下可引起腸道外感染。某些血清型菌株的致病性強，引起腹瀉，統稱病致病大腸桿菌。 一、生物學性狀 （一)形態與染色 大小0.4～0.7×1～3um,無芽胞,大多數菌株有動力
質粒轉染大腸桿菌
質粒轉染大腸桿菌可應用于：（1）細菌株的構建；（2）細胞工程；實驗方法原理感受態細胞易于接受外來基因成為重組細胞，實驗將質粒加入有感受態細胞的培養皿中，熱擊處理進行質粒轉染。實驗材料細胞株質粒試劑、試劑盒鏈霉素青霉素FCSPBS胰酶EDTA轉染試劑(Lipofectamine TM2000)胰化蛋白
質粒轉化大腸桿菌
該實驗主要有兩個用途：1．重組質粒的鑒定。當質粒的重組或其它載體重組后，通常會發生質粒的重組失敗，包括質粒的自身環化。因而要求進行篩選，把重組成功的質粒找出來。在目前常用的質粒和其它載體中含有相應的抗生素抗性基因，一旦重組成功，質粒環化（包括自身環化），抗生素抗性基因表達，被轉化的大腸桿菌便具備抗相
大腸桿菌破碎壓力
細菌的破碎在生物行業的應用是細菌培養完成、離心后的一個重要工藝，這其間所涉及的幾個主要技術要點分別是：細菌的重懸，細菌破碎率，溫度控制。 第一， 細菌重懸 細菌的重懸對于每一個做過細菌破碎的用戶來說都是非常熟悉的一件事情，培養好的細菌經離心收集之后在破碎之前必須將收集好的菌泥與緩沖液按照一定
大腸桿菌超聲破碎
大腸桿菌的基因工程 一、原理：微生物 細胞在超聲波的作用下，細胞結構受到破壞，而使細胞破碎。 二、材料與試劑：超聲波破碎儀、顯微鏡、燒杯、細胞破碎緩沖液(10mmol/L，PH7.4Tris-HCL緩沖液中含5mmol/L的MgCL2)、細胞懸浮液(取50-100mg)大腸桿菌 濕細胞懸浮在
大腸桿菌中毒的表現
大腸桿菌中毒表現：不同的致瀉性大腸埃希菌引起的中毒，癥狀各不相同。①產腸毒素性大腸埃希菌引起的中毒主要癥狀是水樣腹瀉、腹痛、惡心、低熱。每天腹瀉可達8～12次。②腸道侵襲性大腸埃希菌的中毒癥狀與志賀菌引起的痢疾相似，發熱、劇烈腹痛、水樣腹瀉、糞便中有少量粘液和血。③腸道致病性大腸埃希菌引起的中毒主要
關于大腸桿菌的簡介
大腸桿菌是動物腸道中的正常寄居菌，其中很小一部分在一定條件下引起疾病。大腸桿菌的血清型能夠引起人體或動物胃腸道感染，主要是由特定的菌毛抗原、致病性毒素等感染引起的，除胃腸道感染以外，還會引起尿道感染、關節炎、腦膜炎以及敗血型感染等 [1] 。
大腸桿菌的基本介紹
大腸桿菌（Escherichia coli），又叫大腸埃希氏菌，Escherich在1885年發現的。大腸桿菌是條件致病菌，在一定條件下可以引起人和多種動物發生胃腸道感染或尿道等多種局部組織器官感染。 大腸桿菌是動物腸道中的正常寄居菌，其中很小一部分在一定條件下引起疾病 。大腸桿菌的血清型能夠
大腸桿菌中所致疾病
1.腸道外感染：多為內源性感染，以泌尿系感染為主，如尿道炎、膀胱炎、腎盂腎炎、上行性尿道感染多見于已婚婦女。也可引起腹膜炎、膽囊炎、闌尾炎等。嬰兒、年老體弱、慢性消耗性疾病、大面積燒傷患者，大腸桿菌可侵入血流，引起敗血癥。早產兒，尤其是生后30天內的新生兒，易患大腸桿菌性腦膜炎。2.急性腹瀉：某些血
鑒別大腸桿菌的原理
運用伊紅-美藍鑒別培養基。在培養基中加入伊紅和美藍，可以用來鑒別是否存在大腸桿菌：如果有大腸桿菌，其代謝產物（有機酸）就會與伊紅和美藍結合，使菌落出現深紫色，并帶有金屬光澤。
大腸桿菌生長曲線測定
實驗方法原理 測定微生物生長曲線的方法很多，有血球計數法、平板菌落計數法、稱重法、比濁法等。本實驗采用比濁法測定，由于細菌懸液的濃度與混濁度成正比，因此，可利用光電比色計測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度，并將所測得的光密度值（OD值）與其對應的培養時間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線。現已
大腸桿菌的致病物質
1、定居因子（Colonizationfactor,CF）：也稱粘附素(Adhesin)，即大腸桿菌的菌毛。致病大腸桿菌須先粘附于宿主腸壁，以免被腸蠕動和腸分泌液清除。使人類致瀉的定居因子為CFAⅠ、CTAⅡ(ColonizationfactorantigenⅠ、Ⅱ)，定居因子具有較強的免疫原性，能
大腸桿菌可能誘發癌癥
人腸道中數萬億的可能導致肥胖并帶來糖尿病等疾病風險。而今天公布的研究報告稱，這個組與癌癥也有關系。 ? ? 研究人員說，有炎性腸道疾病的老鼠體內有更多可能導致結腸直腸癌的可產生毒素的細菌。而且，相比健康人，患有結腸直腸癌的人也更容易存有這些細菌。 ? ? 這一結果
大腸桿菌的菌落形態
大腸桿菌在普通瓊脂培養基上面都是一樣的,圓形邊緣整齊，表面光滑，半透明，小凸起；典型的大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂平板上的特征為：深紫黑色、光滑、濕潤、帶有金屬光澤的圓形菌落。大腸桿菌是動物腸道中的正常寄居菌，其中很小一部分在一定條件下引起疾病 。大腸桿菌的血清型能夠引起人體或動物胃腸道感染，主要是由特定
大腸桿菌的檢測方法
? 隨著人們生活水平的提高，食品安全問題受到越來越多的重視，在不斷被報道的食品安全事故中，大腸桿菌是引起這些事件的主要的影響因素之一，是判斷食品污染程度的一個重要參數，因此采用快速、可靠、簡便的方法來準確檢測食品中大腸桿菌數量是否超標是至關重要的。本文綜述了大腸桿菌的傳統檢測方法以及最新的檢測方法，
大腸桿菌活化步驟方法
1、種子接種：將凍干管或甘油管種子接種到LB培養基搖瓶中進行活化，一般可以加抗性標記對應的抗生素。然后搖床恒溫培養。2、發酵培養基準備：搖瓶的話好說，滅菌鍋就行。發酵罐的話，要先將罐子清洗干凈，然后配料，然后滅菌。3、將培養好的種子液，按一定的接種量接到發酵培養基中。如果是搖瓶發酵的話一般不用中控，
小兒大腸桿菌腸炎的病因
細菌感染（20%）： 細菌性腸炎的致病菌以痢疾桿菌最常見，其次為空腸彎曲菌和沙門氏菌。 病毒感染（20%）： 在病毒性胃腸炎中，輪狀病毒是嬰幼兒腹瀉的主要病因，而諾瓦克病毒是成人和大齡兒童流行性病毒性胃腸炎的主要病因。 寄生蟲感染（15%）： 寄生蟲引起的腸炎以溶組織內阿米巴較為常見。
小兒大腸桿菌腸炎的檢查
內窺鏡檢查 臨床上多數病變在直腸和乙狀結腸，采用乙狀結腸鏡檢查很有價值，對于慢性或疑為全結腸患者，宜行纖維結腸鏡檢查。 放射學鋇劑檢查 急性期一般不宜作鋇劑檢查。而特別注意的是重度潰瘍性結腸炎在作鋇灌腸時，有誘發腸擴張與穿孔的可能性。