蛋白蛋白相互作用技術介紹
技術內容蛋白質并非孤立存在的生物分子，而是具有特定三維空間結構并與其他蛋白質相互作用，共同執行功能。因此，蛋白質的模塊及空間組織與其表達水平具有同樣的重要性。為了解析蛋白質組的組織結構單元而開發的基于質譜的蛋白質組學方法通常結合了質譜檢測與各種生化試驗。其中最經典的技術為1999[1]首次報導的親和純化－質譜技術（affinity purification – mass spectrametry，AP-MS）。既可進行大規模的protein interactome 構建[2]，也能針對特定條件下特定蛋白質的互作進行差異分析、時間動態分析等[3]。圖１：AP-MS技術的兩種運用。技術原理使用親和標簽 (AP-MS) 或特異性抗體 (CoIP-MS)，在native條件下純化與目標蛋白質相互作用的蛋白，進而使用質譜進行鑒定，通過test\control比對，過濾非特異結合蛋白，定性定量分析與特定蛋白質直接或間接作用的蛋白質。同時......閱讀全文
蛋白蛋白相互作用技術介紹
技術內容蛋白質并非孤立存在的生物分子，而是具有特定三維空間結構并與其他蛋白質相互作用，共同執行功能。因此，蛋白質的模塊及空間組織與其表達水平具有同樣的重要性。為了解析蛋白質組的組織結構單元而開發的基于質譜的蛋白質組學方法通常結合了質譜檢測與各種生化試驗。其中最經典的技術為1999[1]首次報導的親和
蛋白蛋白相互作用技術內容
技術內容 蛋白質并非孤立存在的生物分子，而是具有特定三維空間結構并與其他蛋白質相互作用，共同執行功能。因此，蛋白質的模塊及空間組織與其表達水平具有同樣的重要性。為了解析蛋白質組的組織結構單元而開發的基于質譜的蛋白質組學方法通常結合了質譜檢測與各種生化試驗。其中最經典的技術為1999[1]
相互作用蛋白鑒定實驗——相互作用蛋白捕獲
實驗方法原理實驗要經過兩次連續大量的酵母菌平板篩選過程。酵母菌含有 LexA 融合探針、報道基因和插入PJG4-5（見圖19.1.6）的 GAL 啟動子控制下的 cDNA 表達文庫。最近，已有可供用于這個系統的文庫。實驗材料攜帶適當質粒組合的酵母菌試劑、試劑盒完全（CM）缺失成分液體培養基含有如下指
鄰位連接技術PLA在蛋白蛋白相互作用，蛋白磷酸化修飾..
鄰位連接技術PLA在蛋白-蛋白相互作用，蛋白磷酸化修飾的應用摘要 鄰位連接技術（ｐｒｏｘｉｍｉｔｙｌｉｇａｔｉｏｎａｓｓａｙ，ＰＬＡ），是新研發的一項高靈敏度的蛋白質體外分析技術。該方法利用一對鄰位探針（ｐｒｏｘｉｍｉｔｙｐｒｏｂｅｓ）對靶分子進行雙識別，通過連接反應產生可擴增的檢測信號，以實時ＰＣ
表面等離子共振技術在蛋白蛋白相互作用的應用（二）
控制軟件SensiQ的控制軟件在原始反應曲線生成時，同時并實時獲取和展示兩個通道內的數據。參照通道內的數據被減除，以補償熱漂移、非特異性結合、總折射指數移相等效應，從而得到清晰高質的實驗數據。控制軟件在反應曲線上簡單加入報告點，用來確定樣品注入后產生的結合反應。報告點的添加可在實驗中的任何時候由人工
表面等離子共振技術在蛋白蛋白相互作用的應用（一）
應用領域結合特異性、抗體選擇、抗體質控、疾病機制、藥物發明、生物治療、生物處理、生物標記物、配體垂釣、基因調控、細胞信號傳導、親和層析、結構-功能關系、小分子間相互作用等檢測原理表面等離子共振（SPR）是一種光學現象，可被用來實時跟蹤在天然狀態下生物分子間的相互作用。這種方法對生物分子無任何損傷，且
研究蛋白質相互作用的新技術
近期，來自多倫多大學Lunenfeld-Tanenbaum Research Institute (LTRI)和Donnelly中心的一組研究人員，開發出一種新技術，可以將細胞內的DNA條形碼拼接在一起，以同時搜尋數百萬個蛋白質配對，用以分析蛋白質相互作用。相關研究結果發表在4月22日的《Mol
Nat－Met：新技術可揭示蛋白間相互作用
加拿大多倫多大學研究人員開發出一種研究人體蛋白質的新技術。該技術可追蹤膜蛋白與其他蛋白之間的相互作用 ??????? 據報道，加拿大多倫多大學研究人員開發出一種研究人體蛋白質的新技術。該技術可追蹤膜蛋白與其他蛋白之間的相互作用。 膜蛋白占人體所有蛋白的約三分之一，有500多種疾病與其失能相關
相互作用蛋白鑒定實驗
實驗方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是構建能夠表達 LexA 與目的蛋白的融合體的質粒。這種質粒轉化到包含 LEU2 和lacZ 報道基因的報道酵母株中，并要行一系列的對照實驗來鑒定所構建的誘餌蛋白是否適用，是否需要修飾，或是否應改變酵母菌報道條件。這些對照實驗實現了誘餌蛋白在酵母菌中作為
相互作用蛋白鑒定實驗
鑒定誘餌蛋白（半乳糖苷酶） 鑒定誘餌蛋白（LacZ 的活性分析） 相互作用蛋白捕獲 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是構建能夠表達
蛋白質相互作用
Interaction Trap/Trap Two-Hybrid System·?????????Yeast Two-Hybrid System?(Finley Lab)This is one of the most comprehensive and detailed guide to yeast
無細胞蛋白表達技術介紹
無細胞蛋白表達技術是指用含有蛋白合成必需的組分（核糖體，轉運RNA，氨酰合成酶，啟動/延伸/終止因子，三磷酸鳥苷，ATP，Mg2+和K+）的細胞裂解物在體外進行蛋白合成。與傳統的基于細菌或真核細胞的蛋白表達系統相比較，無細胞蛋白表達系統具有獨特的優勢，包括節約時間、提高具有功能的、可溶的、全長蛋白的
蛋白與蛋白相互作用分析—免疫共沉淀
?實驗原理免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是以抗體和抗原之間的特異性結合以及細菌蛋白質的“protein A/G"特異性地結合抗體Fc段的現象而開發出來的方法，是研究蛋白質相互作用的經典方法，主要用于確定兩種蛋白質在完整細胞內是否存在生理性相互作用。其原理是：當
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相互作用緩沖液PK 緩沖液還原型谷胱甘肽于 Tris-Cl中洗滌緩沖液 1 洗滌緩沖液 2蛋白酶蛋白激酶 A[y-32P]ATP儀器、耗材 與待篩選蛋白結合的膜或濾膜Sephadex G-50 轉柱實驗步驟 材
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白 試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
GST 融合蛋白作為在細菌中表達的重組蛋白，從它們被介紹以來，已用于成千上萬個研究項目中（Smith and johnson 1988)。它們常常被用于制備抗體，這些抗體可用于研究蛋白質-蛋白質相互作用以及分析生化反應。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W
相互作用蛋白的捕獲實驗
實驗材料?酵母菌試劑、試劑盒?CM培養基乙酸鋰PEGTEDMSO甘油氨芐青霉素儀器、耗材?離心機分光光度計搖床培養箱實驗步驟?1.? 為了轉化文庫，將約20 ml 含pSH18-34和pBait 的酵母菌EGY48培養液接種到Glc/CM-Ura-His 省卻成分液體培養基中，于30℃培養過夜。2.
相互作用蛋白的捕獲實驗
相互作用蛋白的捕獲試驗要經過兩次連續大量的酵母菌平板篩選過程。酵母菌含有lexA 融合合探針，報道基因和插入pJG4-5的GAL啟動子控制下的cDNA表達文庫。實驗材料酵母菌試劑、試劑盒CM培養基乙酸鋰PEGTEDMSO甘油氨芐青霉素儀器、耗材離心機分光光度計搖床培養箱實驗步驟1. ?為了轉化文庫，
相互作用蛋白的捕獲實驗
基本實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 酵母菌 試劑、試劑盒
蛋白定量技術
（一）雙縮脲測定法1．原理? 蛋白質中的肽鍵有雙縮脲反應，在堿性溶液中與二價銅離子形成藍紫色的絡合物，在一定的范圍內，顏色的深淺與蛋白質的含量成正比。此法特異性強，游離的氨基酸、小肽和核酸均不產生這種反應，但此法不夠敏感，僅能測出毫克水平。??? 2．試劑配制???? 硫酸銅（CuSO4·5H2O）
關于膜蛋白的檢測技術介紹
研究膜蛋白結構的技術包括 X 射線衍射、核磁共振波譜、電子顯微鏡、原子力顯微鏡、紅外光譜和圓二色譜等。其中 X 射線衍射和核磁共振波譜技術是對膜蛋白三維結構進行研究的主要方法。尤其利用固體核磁共振技術可在接近膜蛋白的天然環境的磷脂雙分子層中研究膜蛋白的三維結構信息和動力學特征。
關于β酪蛋白的分離技術介紹
蛋白質的分離純化可根據蛋白質分子的大小、電荷量、溶解度以及親和性結合部位的有無，建立許多分離純化的方法。常用的有離心分離、沉淀分離、透析法、超濾法、層析分離、膜分離以及酶法分離等。這些分離純化蛋白質的方法各有利弊。 1、離心分離 離心分離是利用不同物質之間的沉降系數或浮力密度等差異，用離心力
相互作用蛋白鑒定實驗——鑒定誘餌蛋白（LacZ的活性分析）
實驗方法原理捕捉相互作用蛋白的第一步是構建能夠表達 LexA 與目的蛋白的融合體的質粒。這種質粒轉化到包含 LEU2 和lacZ 報道基因的報道酵母株中，并要行一系列的對照實驗來鑒定所構建的誘餌蛋白是否適用，是否需要修飾，或是否應改變酵母菌報道條件。這些對照實驗實現了誘餌蛋白在酵母菌中作為一種穩定蛋
G蛋白的蛋白調控介紹
G蛋白在信號轉導過程中起著分子開關的作用。與GDP（紫色）結合后，G蛋白處于非活性狀態。GTP取代GDP后，G蛋白活化并傳遞信號。G蛋白形式多樣，大多數用于信號傳遞，有些則在諸如蛋白質合成中起重要作用。本文主要介紹異三聚體G蛋白，它由三條不同的鏈組成，分別為α（棕黃色）β（藍色）γ（綠色）。紅色部分
融合蛋白技術的臨床的應用介紹
1、DNA疫苗目前，疫苗已經經歷了三代：第一代疫苗是用減毒或殺死的病原體來激活機體免疫系統；第二代疫苗是用生物技術和重組DNA技術研制的組分疫苗注射機體誘導免疫應答； 第三代疫苗是直接注射基因重組的抗原基因來激活人體免疫系統，即DNA疫苗。DNA疫苗與傳統疫苗相比有著明顯的優勢，如易于生產，穩定性強
乳清蛋白的技術成果介紹
國外乳品工業中已經研制運用超濾技術來制作“預干酪”和乳清濃縮物。與傳統的蒸發濃縮相比，膜技術不僅能減少加熱引起的蛋白質變性，而且在產品提純方面具有明顯優勢。在美國大約三分之二的乳清直接噴霧干燥成粉或制成濃縮物，其余三分之一乳清做進一步處理，加工成其他乳清產品，如脫鹽乳清粉，低乳糖乳清粉、高乳糖乳
蛋白芯片技術的常用載體介紹
常用的材質有玻片、硅、云母及各種膜片等。理想的載體表面是滲透濾膜（如硝酸纖維素膜）或包被了不同試劑（如多聚賴氨酸）的載玻片。外形可制成各種不同的形狀。Lin，SR等人引采用APTS-BS3技術增強芯片與蛋白質的結合。
4位學者親述：質譜技術分析蛋白相互作用
質譜技術已經成為了蛋白質組學研究的主力。這種技術方法能精確的檢測多肽，從而幫助研究人員識別并測序多肽分子，分析它們的特征，了解它們如何進行化學修飾的。 但大多數蛋白質并不是單獨行動的，一些關鍵的生物學過程，如DNA 復制、轉錄、翻譯、細胞分裂和能量生成都依賴于大型蛋白復合物的行為，這
人硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP）酶聯免疫分析（ELISA）
本試劑僅供研究使用???????目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP）的含量。實驗原理：??本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP）水平。用純化的人硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被
相互作用蛋白鑒定實驗——鑒定誘餌蛋白（半乳糖苷酶）
通過確定與之結合的其他蛋白質來理解某種特定蛋白質的功能，常常是十分有用的方法。這可以通過從文庫中選擇或篩選與靶蛋白相互作用的新蛋白來實現。現有一種特別有用的方法即雙雜交系統或相互作用阱， 用來測定新的相互作用蛋白，這種方法采用充當「試管」的酵母菌和一種報道系統的轉錄激活作用來識別結合蛋白。本方法也可