2.2.3綠色葉片植物葉線粒體RNA的分離
實驗方法原理利用差速離心,將線粒體從其他亞細胞結構中分離出來,再用蔗糖梯度離心進一步純化得到線粒體。用核糖核酸酶 A 處理從中去除葉綠體 RNA,然后加入高濃度硫氰酸胍滅活核糖核酸酶 A,硫氰酸胍作為一種蛋白變性劑可非常有效的滅活核糖核酸酶 A。通過 CsCl 梯度離心,線粒體 RNA 沉淀下來。最后用 LiCl 沉淀法,將 CsCl 梯度離心中共沉淀下來的單鏈 DNA 是從線粒體 RNA 中除去。試劑、試劑盒5.7moI LCsCl 溶液10 mmol LEDTApH7.5DEPC 水變性緩沖液EB抽提緩沖液4mol L 硫氰酸胍7.5mol L 鹽酸胍2mol L 和 4mcL LLiCl上樣緩沖液10XMOPS 緩沖液2mol L 乙酸鉀2mol L 乙酸鈉5% 十二烷基肌氨酸鈉TE 緩沖液洗脫緩沖液儀器、耗材勻漿器實驗步驟一 材料與設備溶液均用 DEPC 水配制:1)5.7moI/LCsCl 溶液。2)10 mmol/L......閱讀全文
Science發表超深度線粒體RNA測序
蒙特利爾大學的一項新研究顯示,線粒體遺傳物質在個體內和個體間具有顯著的多樣性,而線粒體RNA上的修飾影響著我們每個人的身體健康。 線粒體基因組中的突變與多種疾病和生物學過程有關,然而此前人們還不了解線粒體轉錄組中的序列多樣性。這項研究通過超深度線粒體RNA測序,首次為人們展示了線粒體RNA
RNASeq和線粒體測序介紹
如今NGS已能夠快速經濟地閱讀數億個reads,所及之處遠超越基因組學(如RNA測序使轉錄組學發生革命性變化)。盡管NGS取得了諸多進步,但依然存在一些重大的挑戰。日前,牛津大學舉辦的“NGS七周年大會”聚焦了NGS面臨的挑戰,此次會議闡述了NGS領域最令人生畏的障礙,同時也闡述了跨越這些障礙的技術
線粒體RNA加工酶的基本信息
中文名稱線粒體RNA加工酶英文名稱mitochondrial RNA processing enzyme;MRP RNase定 義一類存在于線粒體的酶,催化各種線粒體RNA前體加工,使之轉變為成熟的RNA。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),酶(二級學科)
線粒體RNA加工酶的基本信息
中文名稱線粒體RNA加工酶英文名稱mitochondrial RNA processing enzyme;MRP RNase定 義一類存在于線粒體的酶,催化各種線粒體RNA前體加工,使之轉變為成熟的RNA。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),酶(二級學科)
綠色葉片植物葉線粒體RNA的分離
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 利用差速離心,將線粒體從其他亞細胞結構中分離出來,再用蔗糖梯度離心進一步純化得到線粒體。用核糖核酸酶 A 處理從中去除葉綠體 RNA,然后加入高濃度硫氰酸胍滅活核糖核酸酶 A,硫氰酸胍作為一種蛋白變性劑可非常有效的滅活核糖核
綠色葉片植物葉線粒體RNA的分離
實驗方法原理 利用差速離心,將線粒體從其他亞細胞結構中分離出來,再用蔗糖梯度離心進一步純化得到線粒體。用核糖核酸酶 A 處理從中去除葉綠體 RNA,然后加入高濃度硫氰酸胍滅活核糖核酸酶 A,硫氰酸胍作為一種蛋白變性劑可非常有效的滅活核糖核酸酶 A。通過 CsCl 梯度離心,線粒體 RNA 沉
2.2.3-綠色葉片植物葉線粒體RNA的分離
實驗方法原理利用差速離心,將線粒體從其他亞細胞結構中分離出來,再用蔗糖梯度離心進一步純化得到線粒體。用核糖核酸酶 A 處理從中去除葉綠體 RNA,然后加入高濃度硫氰酸胍滅活核糖核酸酶 A,硫氰酸胍作為一種蛋白變性劑可非常有效的滅活核糖核酸酶 A。通過 CsCl 梯度離心,線粒體 RNA 沉淀下來。最
國外研究揭示非典型線粒體RNA加工機制
tRNA作為核酸酶釋放側翼轉錄的識別位點,決定了哺乳動物線粒體中典型RNA加工過程,但并非所有的線粒體轉錄物都由tRNA控制。 瑞典卡羅林斯卡醫學院科研人員使用果蠅和小鼠模型,研究證明了線粒體蛋白DmANGEL或ANGEL2丟失后,經過非規范加工的轉錄物會積累3′磷酸鹽,阻止其聚腺苷酸化,從而
Nature:線粒體中的RNA修飾能促進癌癥的擴散
腫瘤細胞在轉移過程中會消耗遠超正常細胞需要的能量,德國癌癥研究中心的研究團隊發現了與能量代謝相關的新型癌細胞轉移的促進因素,相關成果在《Nature》發表,論文的標題為:Mitochondrial RNA modifications shape metabolic plasticity in met
Nature:線粒體中的RNA修飾能促進癌癥的擴散
腫瘤細胞在轉移過程中會消耗遠超正常細胞需要的能量,德國癌癥研究中心的研究團隊發現了與能量代謝相關的新型癌細胞轉移的促進因素,相關成果在《Nature》發表,論文的標題為:Mitochondrial RNA modifications shape metabolic plasticity in met
Nature:線粒體中的RNA修飾能促進癌癥的擴散
腫瘤細胞在轉移過程中會消耗遠超正常細胞需要的能量,德國癌癥研究中心的研究團隊發現了與能量代謝相關的新型癌細胞轉移的促進因素,相關成果在《Nature》發表,論文的標題為:Mitochondrial RNA modifications shape metabolic plasticity in met
線粒體基質的線粒體結構
線粒體基質 線粒體基質是線粒體中由線粒體內膜包裹的內部空間,其中含有參與三羧酸循環、脂肪酸氧化、氨基酸降解等生化反應的酶等眾多蛋白質,所以較細胞質基質黏稠。蘋果酸脫氫酶是線粒體基質的標志酶。線粒體基質中一般還含有線粒體自身的DNA(即線粒體DNA)、RNA和核糖體(即線粒體核糖體)。 線粒體
科學家發現線粒體中的RNA修飾可促進癌細胞轉移
腫瘤細胞在轉移過程中會消耗遠超正常細胞需要的能量,德國癌癥研究中心的研究團隊發現了與能量代謝相關的新型癌細胞轉移的促進因素,相關成果在《Nature》發表,論文的標題為:Mitochondrial RNA modifications shape metabolic plasticity in met
線粒體作用
⑴若將純化的正常的線粒體與純化的細胞核在一起保溫,并不導致細胞核的變化。但若將誘導生成PT孔道的線粒體與純化的細胞核一同保溫,細胞核即開始凋亡變化。⑵細胞死亡調節蛋白不論是抑制死亡的bcl-2家族還是促進細胞死亡的Bax家族均以線粒體作為靶細胞器。bcl-2蛋白的C端的疏水肽段能插入線粒體外膜。事實
線粒體基因
線粒體基因:mtDNA,線狀、環狀,能單獨復制,同時受核基因控制。哺乳動物:無內含子,有重疊基因突變率高。
線粒體分離實驗—從組織中分離線粒體
實驗材料肝臟試劑、試劑盒MS儀器、耗材勻漿器實驗步驟1. 取出肝臟,注意不要弄破膽囊。放進一置于冰上的燒杯中,剪去任何結締組織。稱其質量后放回燒杯中。用鋒利的剪刀、手術刀或剃須刀片將之切成 1~2 mmol/L 的薄片,用勻漿緩沖液(1x MS) 沖洗兩次以去除大部分的血。轉移至勻漿器中。加入足夠的
線粒體的組成
線粒體的化學組分主要包括水、蛋白質和脂質,此外還含有少量的輔酶等小分子及核酸。蛋白質占線粒體干重的65-70%。線粒體中的蛋白質既有可溶的也有不溶的。可溶的蛋白質主要是位于線粒體基質的酶和膜的外周蛋白;不溶的蛋白質構成膜的本體,其中一部分是鑲嵌蛋白,也有一些是酶。線粒體中脂類主要分布在兩層膜中,
線粒體的分布
線粒體分布方向與微管一致,通常分布在細胞功能旺盛的區域:如在腎臟細胞中靠近微血管,呈平行或柵狀排列;在腸表皮細胞中呈兩極分布,集中在頂端和基部;在精子中分布在鞭毛中區。在卵母細胞體外培養中,隨著細胞逐漸成熟,線粒體會由在細胞周邊分布發展成均勻分布。線粒體在細胞質中能以微管為導軌、由馬達蛋白提供動
線粒體的形狀
線粒體一般呈短棒狀或圓球狀,但因生物種類和生理狀態而異,還可呈環狀、線狀、啞鈴狀、分杈狀、扁盤狀或其它形狀。成型蛋白(shape-forming protein)介導線粒體以不同方式與周圍的細胞骨架接觸或在線粒體的兩層膜間形成不同的連接可能是線粒體在不同細胞中呈現出不同形態的原因。
線粒體的結構
線粒體由外至內可劃分為線粒體外膜(OMM)、線粒體膜間隙、線粒體內膜(IMM)和線粒體基質四個功能區。處于線粒體外側的膜彼此平行,都是典型的單位膜。其中,線粒體外膜較光滑,起細胞器界膜的作用;線粒體內膜則向內皺褶形成線粒體嵴,負擔更多的生化反應。這兩層膜將線粒體分出兩個區室,位于兩層線粒體膜之間
線粒體分離實驗
從組織培養細胞中分離線粒體 從組織中分離線粒體 用蔗糖密度梯度法純化線粒體 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
線粒體的功能
能量轉化 線粒體是真核生物進行氧化代謝的部位,是糖類、脂肪和氨基酸最終氧化釋放能量的場所。線粒體負責的最終氧化的共同途徑是三羧酸循環與氧化磷酸化,分別對應有氧呼吸的第二、三階段。細胞質基質中完成的糖酵解和在線粒體基質中完成的三羧酸循環在會產還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicot
線粒體的功能
主要功能:1,能量轉化線粒體是真核生物進行氧化代謝的部位,是糖類、脂肪和氨基酸最終氧化釋放能量的場所。線粒體負責的最終氧化的共同途徑是三羧酸循環與氧化磷酸化,分別對應有氧呼吸的第二、三階段。2,三羧酸循環糖酵解中生成的每分子丙酮酸會被主動運輸轉運穿過線粒體膜。進入線粒體基質后,丙酮酸會被氧化,并與輔
線粒體分離實驗
實驗材料 細胞試劑、試劑盒 RSBMS 緩沖液儀器、耗材 Dounce 勻漿器實驗步驟 1. 用 11 ml 冰上預冷過的 RSB 重新懸浮細胞,轉移到一個 15 ml 的 Dounce 勻漿器中RSB(使組織培養細胞膨脹的低滲緩沖液)10 mmol/L NaCl2.5 mol/L MgCl210
線粒體的作用
線粒體的作用:1、細胞有氧呼吸的主要場所線粒體是一種存在于大多數細胞中的用兩層膜包被的細胞器,是細胞有氧呼吸的主要場所,被稱為“power house”,其直徑在0.5到1.0微米左右。大多數真核細胞或多或少都擁有線粒體,但它們各自擁有的線粒體在大小數量以及外觀等方面上都有所不同。線粒體是一些大小不
為什么線粒體自噬被抑制,線粒體數量減少
因為線粒體活性進入休眠狀態。線粒體自噬被抑制,線粒體數量減少,會使線粒體代謝引起氧化,導致線粒體活性細胞進入休眠狀態。線粒體,是一種存在于大多數細胞中的由兩層膜包被的細胞器,細胞中制造能量的結構。
線粒體膜電位熒光探針Cell-Meter-線粒體膜電位(MMP)
人體的ATP有95%為線粒體所提供,合成的ATP通過線粒體內膜ADP/ATP載體與細胞質中的ADP交換進入細胞質,參與細胞的各種需能過程,因此線粒體與細胞維持正常功能密切相關。線粒體在呼吸氧化過程中,將所產生的能量以電化學勢能儲存于線粒體內膜,在內膜兩側造成質子及其他離子濃度的不對稱分布而形成線粒體
線粒體分離實驗—用蔗糖密度梯度法純化線粒體
實驗材料線粒體懸液試劑、試劑盒蔗糖溶液Tris-HClEDTA儀器、耗材Bockman SW28 號轉頭實驗步驟1. 在用于 Bockman SW28 號轉頭(或與其等同的產品)的 Uitradear 離心管中,小心地在 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液上加一層 15 ml 1.5 mol
線粒體病的診斷
線粒體肌病的診斷依賴于典型的臨床癥狀:四肢近端極度不能耐受疲勞,身體矮小和神經性耳聾等,伴各亞型臨床特征;血清乳酸,丙酮酸增高和肌肉活組織檢查發現RRF,mtDNA缺失或點突變等之結果,線粒體腦肌病患者CT或MRI檢查可見白質腦病,基底核鈣化,腦軟化,腦萎縮和腦室擴大等。
線粒體病的鑒別
但應注意炎癥肌病和其他肌病可同時伴存線粒體和糖原堆積之可能,嚴防過多過濫診斷線粒體肌病。線粒體肌病需與多發性肌炎,重癥肌無力,周期性癱瘓和眼咽型進行性肌營養不良等鑒別。